吉非替尼在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用

目的研究表皮生长因子酪氨酸受体抑制剂（EGFR-TKI）——吉非替尼（gefitinib）在丙烯醛诱导气道黏液高分泌中的作用。方法采用丙烯醛诱导气道黏液高分泌建立大鼠模型，将大鼠分为正常对照组（A组，不予以任何干预），模型组（B组，丙烯醛雾化吸入），药物干预组（C、D、E组，在丙烯醛雾化前30min，分别以10mg／kg、20mg／kg、30mg／kg的吉非替尼灌胃），药物对照组（F组，生理盐水雾化前30min，以30mg／kg吉非替尼灌胃），每组6只大鼠。上述处理持续3周后处死实验动物并取其肺组织，分别进行RT-PCR检测黏蛋白MUC5AC mRNA的表达，免疫组化检测气道MUC5AC和EGFR的蛋白表达，阿尔辛蓝-过碘酸雪夫氏染色（AB-PAS）检测杯状细胞数目。结果模型组大鼠肺组织MUC5AC、EGFR表达增强，杯状细胞数增加；吉非替尼对丙烯醛引起的MUC5AC表达、杯状细胞数增加均具有抑制作用，随着浓度的增加，抑制作用加强；吉非替尼对EGFR信号通路中EGFR蛋白表达具有抑制作用。结论丙烯醛活化EGFR使MUC5AC过度表达，吉非替尼通过对EGFR信号通路的调节，在气道黏液高分泌中具有保护作用。     

MARCKS相关多肽与地尔硫(艹卓)对大鼠气道黏液高分泌模型MUC5AC分泌的影响

目的 研究在大鼠气管内滴入MARCKS相关多肽（MANS）或/和地尔硫（艹卓）（DTZ）对气道黏蛋白5AC（MUC5AC）分泌的影响并探讨其可能的作用机制。方法 通过雾化吸入丙烯醛建立大鼠气道黏液高分泌模型后随机分为4组，对照组气管内滴入生理盐水，三个实验组即MANS组、DTZ组和联用组在气管内分别滴入MANS、DTZ以及二者同时滴入，1 h后获取支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。用ELISA法对BALF中的MUC5AC进行定量；用免疫组化染色对气道杯状细胞中MUC5AC进行特异性染色，用灰度扫描和图像分析对杯状细胞内的MUC5AC进行半定量分析。结果 BALF中MUC5AC的分泌量在MANS组和联用组均较对照组明显减少（P均〈0.05），在DTZ组无明显变化（P〉0.05）；在联用组较MANS组亦明显减少（P〈0.05）。气道杯状细胞内MUC5AC的量在MANS组和联用组均较对照组显著增多（P均〈0.05）；在单用DTZ组没有明显变化（P〉0.05）。结论 在丙烯醛诱导的大鼠气道黏液高分泌模型中，气管内滴入MANS可以减少气道黏液的分泌，单用DTZ气管内滴入不能减少气道黏液的分泌。但二者联合滴入时DTZ对MANS抑制气道黏液的分泌可能具有协同作用。     

表皮生长因子受体在中性粒细胞弹力酶诱导气道粘液高分泌中的作用

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)活化在中性粒细胞弹力酶(NE)引起气道粘蛋白(MUC)分泌增加信号传导中的作用。方法 健康Wistar雄性大鼠40只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组动物采用气管内一次性给予后每日雾化小剂量NE法建立慢性支气管炎模型；C组在每次NE前预先给予EGFR拮抗剂BIBX1522。上述处理2周后于第3周取实验动物肺组织，分别行阿尔辛蓝一过碘酸雪夫氏染色(AB-PAS)测定杯状细胞数目；免疫组化法检测气道MUC5AC和EGFR的表达。结果 B组大鼠气道杯状细胞数和MUC5AC、EGFR的表达强度与A组、C组比较均有显差异。结论 NE可通过气道上皮EGFR的活化使杯状细胞数目增加及MUC5AC过度生成，提示EGFR在气道粘液高分泌过程中具重要的介导作用。     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-kB表达的影响

目的 通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制.方法 大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型.干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃.蛋白印迹(western blot)检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法(EMSA)检测NF-<,k>B的活性.结果 丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性增加.辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-<,k>B活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-<,k>B活性增加.结论 辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-<,k>B活性.     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-κB表达的影响

目的通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制。方法大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型。干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃。蛋白印迹（western blot）检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法（EMSA）检测NF-κB的活性。结果丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性增加。辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-κB活性增加。结论辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-κB活性。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在大鼠气道黏液高分泌中的表达及意义

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在内毒素诱导大鼠气道黏液高分泌中的作用.方法 将12只雄性SD大鼠随机分为对照组和内毒素组.采用HE染色和阿辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色进行气道上皮杯状细胞计数及检测气道黏液物质表达.用免疫组化染色及实时定量-PCR检测气道及肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、PPARγ蛋白及mRNA表达.结果 内毒素组气道上皮杯状细胞积分、气道黏液物质、气道及肺组织MUC5AC、PPARγ蛋白及mRNA表达均较对照组升高(P<0.05).相关性分析显示,内毒素组气道及肺组织PPARγ蛋白表达水平与气道及肺组织MUC5AC mRNA表达水平呈负相关(r=-0.829,P<0.05).结论 PPARγ参与了内毒素诱导气道黏液高分泌的发生.     

阳和平喘颗粒不同阶段干预对哮喘大鼠气道黏液高分泌及血清IL-13水平影响

目的:探讨阳和平喘颗粒不同阶段干预对哮喘大鼠气道黏液高分泌的影响及可能作用机制。方法:将70只SD大鼠随机分为模型组,正常组,地塞米松组,阳和平喘颗粒早期、晚期低剂量组,阳和平喘颗粒早期、晚期高剂量组,每组大鼠10只,OVA致敏,激发制备哮喘大鼠模型。正常组和模型组用生理盐水代替实验药物进行干预,其他组则分阶段给予相应药物干预。在AB-PAS染色后,光镜下观察气道组织形态学变化。采用ELISA法检测血清IL-13水平,采用免疫组化法检测各组大鼠气道MUC5AC水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道内可见大量黏液分泌及杯状细胞增生,IL-13和MUC5AC表达水平也显著升高(P0.01)。与模型组比较,各干预组大鼠气道内可见少量黏液分泌,无明显杯状细胞增生,IL-13及MUC5AC表达水平也显著降低(P0.01)。其中,阳和平喘颗粒高剂量组的效应表达显著优于低剂量组,早期用药在降低IL-13和MUC5AC表达水平方面优于晚期用药(P0.05或P0.01)。结论:阳和平喘颗粒可减少哮喘大鼠气道内黏液分泌及杯状细胞增生,抑制MUC5AC转录和蛋白合成,能有效抑制气道炎症,其作用机制可能与下调IL-13水平有关,早期用药的效应表达明显优于晚期用药,且具有一定的剂量依赖性。     

铜绿假单胞菌密度感应系统对气道黏液高分泌的影响

目的 探讨铜绿假单胞菌(PA)的密度感应系统(QS)在气道黏液高分泌中的作用.方法 60只大鼠随机分为3组(野生型菌株PA01组、QS基因突变型菌株PA01-JP2组和对照组),分别将包被不同亚型PA的硅胶管置人大鼠一侧主支气管,建立慢性肺部感染模型,对照组则用生理盐水浸泡硅胶管.28 d后处死大鼠,取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF)采用AB-PAS染色、ELISA和RT-PCR等方法检测气道内黏蛋白MUC5AC蛋白及mRNA的表达水平,比较野生型菌株PA01和QS突变型菌株PA01-JP2对大鼠气道黏液分泌的影响.结果 PA01组较PA01-JP2组气道黏膜上皮的杯状细胞数目显著增多(P＜0.05),对照组的杯状细胞数目极少.PA01组MUC5ACmRNA表达量较PAO1-JP2组显著增多(P＜0.05),对照组MUC5AC mRNA仅有少量表达.PA01组BALF中MUC5AC蛋白分泌量明显高于PA01-JP2组(P＜0.05).结论 PA的QS重要基因缺损导致气道黏液分泌的能力显著下降.     

吉非替尼对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用

目的 观察吉非替尼对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠a平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达的影响,探讨EGFR在肺纤维化上皮间质转分化中的作用.方法 将30只SPF级雌性BALB/c小鼠分为三组:对照组(气管滴人生理盐水)、纤维化组(气管滴人博莱霉素3 mg/kg )、纤维化吉非替尼干预组(气管滴人博莱霉素+吉非替尼灌胃20 mg/Kg ).实验第14天杀鼠取肺,肺组织石蜡切片行HE染色与Masson染色;RT-PCR法检测a-SMA的mRNA表达水平;免疫组化检测总EGFR,磷酸化EGFR及a-SMA表达.结果 纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积减少,气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P<0.05);同时,肺a-SMA的mRNA表达减少,免疫组化评分也明显降低(P<0.05).结论 吉非替尼抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化可能与其抑制EGFR活性,下调a-SMA表达有关.     

内毒素致大鼠气道黏液高分泌的研究

[摘要] 目的 探讨内毒素致大鼠气道黏液高分泌的发生机制。 方法 将12只雄性SD大鼠随机分为对照组和脂多糖组。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-10浓度。分别用HE染色、阿辛蓝-过碘酸雪夫（AB-PAS）和免疫组化染色进行气道上皮杯状细胞计数,检测气道黏液物质和MUC5AC表达。结果 LPS气道内注射后BALF中TNF-α、IL-1β和IL-10水平较对照组升高,气道上皮杯状细胞积分、气道黏液物质及MUC5AC表达明显升高（均P<0.01）。相关性分析示LPS组BALF中TNF-α、IL-1β水平与气道MUC5AC呈正相关（r分别为 0.921、0.883,均P<0.01）,IL-10与MUC5AC呈负相关（r为-0.852,P<0.05）。 结论 侵入气道的细菌致病因子可上调MUC5AC表达,引起气道黏液高分泌,其发生机制可能与失控性炎症反应有关;大鼠气道内注射LPS能成功建立气道黏液高分泌模型。     

Role of extracellular signal-regulated kinase 1/2 in cigarette smoke-induced mucus hypersecretion in a rat model

Background  Airway mucus hypersecretion is an important pathophysiological feature of chronic obstructive pulmonary disease, which is closely associated with cigarette smoking. However, the signal transduction pathway from the cell surface to the nucleus through which cigarette smoke causes upregulation of mucin gene expression is not well known. This study was designed to investigate the role of extracellular signal-regulated Kinase 1/2 (ERK 1/2) in airway mucus hypersecretion induced by cigarette smoke in rats.

Methods  A rat model of airway mucus hypersecretion was induced by exposure to cigarette smoke for 4 weeks．Rats exposed to inhalation of cigarette smoke or normal saline were given an intraperitoneal injection of U0126, a specific MEK1 kinase inhibitor, at doses of 0.25 mg/kg, 0.5 mg/kg and 1 mg/kg for 14 days. Expression of MUC5AC mRNA and protein, ERK 1/2 and phosphorylated-ERK 1/2 (p-ERK 1/2) were detected by RT-PCR, immunohistochemistry and Western blotting.

Results  Cigarette smoke significantly increased airway goblet cells metaplasia, induced the overexpression of MUC5AC mRNA and protein in bronchial epithelia, and increased the ratio of p-ERK 1/2 and ERK 1/2. U0126 significantly attentuated the expression of MUC5AC mRNA and protein induced by cigarette smoke (P <0.05). Moreover, there was a significant positive correlation between the ratio of p-ERK1/2 to ERK1/2 and the expression of MUC5AC mRNA and protein (P <0.05).

Conclusions  Inhibition of ERK 1/2 by U0126 decreased the ratio of p-ERK 1/2 to ERK 1/2 and expression of MUC5AC mRNA and protein. ERK 1/2 may play an essential role in cigarette smoke-induced mucus hypersecretion in vivo.

     

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道黏液高分泌的影响

目的 观察阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道黏液高分泌的干预作用,探究其作用机制.方法 将50只清洁级SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳和平喘颗粒低剂量组、阳和平喘颗粒高剂量组和地塞米松组,每组10只.采用卵清蛋白成功诱发大鼠哮喘后,并予相应药物干预8周.阿尔辛蓝过碘酸雪夫氏染色,光镜下观察气道杯状细胞;采用免疫组织化学法检测大鼠气道黏蛋白5AC（mucin 5AC,MUC5AC）的表达水平;采用Western blot、RT-PCR分别检测大鼠肺组织转化生长因子β1（transforming growth factor beta 1,TGF-β1）蛋白及其mRNA表达水平.结果 阳和平喘颗粒高、低剂量组及地塞米松组大鼠气管可见少量黏液分泌,未见明显杯状细胞增生;与模型组比较,阳和平喘颗粒高、低剂量组及地塞米松组大鼠气道组织杯状细胞面积和MUC5AC蛋白表达水平,以及肺组织TGF-β1蛋白及TGF-β1mRNA表达水平均显著降低（P＜0.01）;阳和平喘颗粒高剂量的效应显著优于低剂量,呈现明显的剂量依赖性（P＜0.01）.结论 阳和平喘颗粒可降低哮喘大鼠气道黏液高分泌,机制可能与其下调肺组织TGF-β1蛋白及其基因表达水平,抑制MUC5AC生成有关.     

加味麻杏石甘汤治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重的机制研究

目的探讨加味麻杏石甘汤对慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)的作用机制。方法40只清洁级Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、加味麻杏石甘汤组、克拉霉素组。空白对照组正常喂养,模型组、加味麻杏石甘汤组、克拉霉素组采取气道滴注脂多糖(LPS)联合烟熏的方法建立AECOPD模型,并连续30 d分别给予生理盐水、加味麻杏石甘汤(8.7 g/kg)、克拉霉素混悬液(50 mg/kg)灌胃。实验第31天,测大鼠肺功能,取大鼠肺组织,制作病理切片,行AB-PAS染色观察杯状细胞,并采用免疫组化法对肺组织中黏蛋白5AC(MUC5AC)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)进行检测。结果与空白对照组比较,模型组、加味麻杏石甘汤组、克拉霉素组第0.3秒用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV_(0.3)/FVC)明显下降,杯状细胞数、MUC5AC、NE表达均显著升高,具有统计学差异;加味麻杏石甘汤组与模型组比较,FEV_(0.3)/FVC明显上升,杯状细胞数、MUC5AC、NE表达显著降低,具有统计学差异;加味麻杏石甘汤组与克拉霉素组比较,FEV_(0.3)/FVC、杯状细胞数、NE、MUC5AC均无统计学差异。结论加味麻杏石甘汤可显著提升AECOPD模型大鼠FEV_(0.3)/FVC,抑制杯状细胞增生,降低肺组织中NE及MUC5AC的表达,从而减轻AECOPD气道黏液高分泌,这可能是加味麻杏石甘汤治疗AECOPD的机制之一。     

水通道蛋白1对气道高反应大鼠粘液高分泌的影响

目的:本实验观察臭氧应激后大鼠肺组织AQP1的表达对气道粘液的量和质影响。方法:30只SD大鼠随机分为3组:正常对照组;臭氧应激组;臭氧应激+地塞米松治疗组;每组10只。分组检测支气管分泌粘蛋白总量、肺组织粘蛋白基因MUC5AC表达改变和臭氧应激后肺组织AQP1的量,分析它们之间的相关性。结果:大鼠肺组织有MUC5AC表达,臭氧应激数天后,大鼠气道粘液分泌量明显增加,且MUC5AC表达随之增多,两者呈现正相关趋势。随着AQP1的表达下降,气道高反应大鼠粘液分泌量明显增多,MUC5AC的表达也增多。提示AQP1的表达与气道粘液分泌总量呈现负相关的趋势;AQP1的表达与粘液中的MUC5AC表达呈现负相关的趋势。结论:在气道高反应性过程中,粘液高分泌状态与MUC5AC的表达水平有关,AQP1的表达下调可增加支气管粘液的分泌量和MUC5AC的表达。     

辛伐他汀对大鼠气道黏液高分泌的影响和机制研究

目的了解辛伐他汀对丙烯醛引起的气道黏液高分泌的作用及其可能的机制。方法大鼠雾化吸人丙烯醛，建立气道黏液高分泌模型。将42只雄性SD大鼠按随机数字表法分为7组：对照组（A组）、辛伐他汀自身对照组（B组）、模型组（C组）、低剂量辛伐他汀组（D组）、中剂量辛伐他汀组（E组）、高剂量辛伐他汀组（F组）和甲羟戊酸组（G组），每组6只。分别用阿辛蓝-过碘酸雪夫（AB—PAS）和免疫组化染色检测气道黏蛋白和黏蛋白5ac（mucinSac，MUC5ac）的表达。RT—PCR检测MUC5acmRNA的表达。结果丙烯醛刺激可以使大鼠气道黏蛋白、MUC5ac蛋白和mRNA表达增高，使支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞数增多。结论辛伐他汀可以抑制丙烯醛所致的气道黏液高分泌，甲羟戊酸可以部分逆转辛伐他汀的作用，其机制可能是通过甲羟戊酸途径减少巨噬细胞在肺中的浸润。     

Brg1通过STAT6促进哮喘气道黏液高分泌

目的研究染色质重构复合物核心催化亚基（Brg1）对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响及其作用机制。方法将6~8周龄 雌性野生型C57bl/6小鼠和Brg1-/-小鼠（Ⅱ型肺泡上皮细胞AEC2s上特异性条件敲低Brg1的C57bl/6小鼠）随机分为4组：正常 对照组、哮喘组、Brg1敲低对照组（Brg1-/-）和Brg1敲低后构建哮喘模型组（Brg1-/-+哮喘）,每组10只。哮喘组和Brg1-/-+哮喘组用 鸡卵清蛋白（OVA）制备过敏性哮喘模型,对照组用生理盐水代替。收取标本,用ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中 黏蛋白MUC5AC和IL-13的表达。糖原染色检测小鼠气道杯状细胞的增生和黏液分泌,q-PCR和免疫组化检测各组小鼠气道 黏蛋白MUC5AC的表达和定量。Western blot检测各组小鼠肺组织中STAT6、p-STAT6的表达。结果Brg1-/-+哮喘组较哮喘组 气道杯状细胞增生和黏液分泌均显著减少,BALF中IL-13、MUC5AC表达明显降低,肺组织MUC5AC mRNA表达显著降低, 同时肺组织STAT6和磷酸化STAT6显著下调。结论Brg1-/-敲低的小鼠建立哮喘模型时气道黏液分泌较野生型小鼠减轻,其可 能通过影响STAT6从而抑制黏蛋白MUC5AC的表达,抑制支气管哮喘气道黏液高分泌,表明Brg1具有促进哮喘气道黏液高分 泌的作用。     

痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的影响?

目的：观察痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠气道黏液高分泌的影响,探讨“清热化痰”的效应机制。方法采用简单随机法将 SD 大鼠60只分为正常组、模型组和痰热清组,每组20只。采用香烟烟熏加气道内滴注脂多糖的方法建立 COPD 大鼠模型,于实验第41日开始,痰热清组予痰热清注射液、模型组及正常组予生理盐水腹腔注射,1次/d,连续10 d。运用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠肺组织中黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA 水平,并观察肺组织病理形态的变化。结果RT-PCR 检测显示,痰热清组 MUC5AC mRNA 的表达程度较模型组低(P <0.05)。病理学检测(HE 染色)示模型大鼠肺组织出现肺泡壁破裂、肺泡腔扩大、肺泡融合,并伴有炎细胞浸润。过碘酸雪夫染色(AB-PAS)下可见痰热清组大鼠支气管黏膜上皮内杯状细胞较模型组明显减少,痰热清组PAS 阳性区域面积明显小于模型组(P <0.05)。结论痰热清注射液能抑制 COPD 模型大鼠 MUC5AC mRNA 的表达,并可能藉此减轻气道黏液高分泌,改善气道阻塞。     

丙烯醛刺激小鼠气道粘液高分泌新的分子机制-p38 MAPK/MMP-9信号通路调控MUCIN5AC表达

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路及其特异性抑制剂SB203580在气道粘液高分泌中的作用,阐明p38 MAPK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粘蛋白基因转录中的相互作用机制。方法小鼠吸入丙烯醛21d建立模型,对照组采用生理盐水吸入,干预组予SB203580腹腔注射。于第7天、第21天处死动物。结果小鼠吸入丙烯醛21d后出现明显的气道粘液高分泌表现,经SB203580治疗后粘液分泌明显减轻;拮抗p38MAPK后MUCIN5ACTMMP-9蛋白、mRNA表达量下降(P<0.01)。结论丙烯醛吸入可致小鼠气道粘液高分泌,p38 MAPK信号通路可在转录水平调节MMP-9,最终调控MUCIN5AC基因表达,揭示新的引起气道粘液高分泌的分子机制和有效的治疗靶点。