p53和c—myc异常表达与胃癌细胞多药耐药性关系的研究

应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法研究６７例胃标本中ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ的表达与多药耐药性（ＭＤＲ）的关系，结果显示本组胃癌中Ｐ５３阳性３２例，阳性率４７．８％；ｃ－ｍｙｃ阳性３７例，阳性率５５．２％；Ｐ－ｇｐ阳性３９例，阳性率５８．２％。Ｐ５３的异常表达与ＭＤＲ－１基因表达呈显著正相关（ｒ＝０．３７，Ｐ〈０．０５），而ｃ－ｍｙｃ和ｍｄｒ－１的表达无明显相关。提示Ｐ５３异常表达可增加ｍｄｒ－１基因的表达，     

p53基因点突变与胃癌细胞恶性程度及临床预后的关系

为进一步明确胃粘膜癌变过程中基因变异的规律，本研究以胃癌手术标本、胃镜活检标本、体外培养细胞为研究体系，利用聚合酶链反应／限制性内切酶长度多态性（ＰＣＲ／ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ／单链构象多态性（ＳＳＣＰ）、ＤＮＡ序列分析、免疫组化及原位杂交多项研究手段，系统研究了６０例胃癌、３０例异型增生和３３例肠上皮化生病变中基因的改变。这一结果提示ｐ５３基因异常与胃癌的发生、发展密切相关。     

结、直肠癌多药耐药基因与p53基因产物的关系

目的：了解结、直肠癌多药耐药基因（Multidrug Resistance Gene,MDR)与p53基因产物的关系,探讨其相互作用的机理。方法：用免疫组织化学ABC法检查51例结、直肠癌MDR1、p53基因产物的表达。结果：结、直肠癌MDR1基因产物Pgp阳性表达共43例,强度为＋－＋＋;p53阳性表达共41例,强度为＋－＋＋＋,Pgp与p53的表达结果之间的差异有显著意义（P＜0．05）。结论：结、直肠癌MDR1基因与p53基因之间存在密切的关系,p53基因对MDR1基因的调节可能在MDR1基因的转录过程中通过对MDR1基因CAT的作用而产生影响,说明可以通过用免疫组织化学的方法来检测肿瘤的基因表达产物,从而了解p53对MDR1基因的影响,由此进一步通过对p53基因的控制来调节MDR1基因的表达,提高肿瘤的治疗效果。     

实体瘤多药耐药性P—gp和p53表达的关系

目的 探讨４种常见实体瘤多药耐药性与Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及ｐ５３表达的关系。方法 采用ＭＴＴ比色法检测胃癌、大肠癌、乳癌、肺癌以１４种化疗药的耐药性；用免疫组化方法检测同一标本Ｐ－ｇｐ，ｐ５３的表达。结果 １０９例标本中多药耐药者５１例，疏水性药物耐药者５９例。各肿瘤Ｐ－ｇｐ阳性表达者４０例，ｐ５３阳性表达者共６３例。乳癌疏水性耐药组Ｐ－ｇｐ表达率为５７．１％，对照组表达率为９．０％；大肠癌多药     

RNA干扰突变型p53基因对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默人胃癌SGC7901细胞中的突变型p53基因,观察其对细胞生物学行为的影响。方法:p53小干扰RNA(siRNA)重组质粒用脂质体介导法转染SGC7901细胞,另设未转染组和对照组。RT-PCR和Western blot分别检测p53基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况及其对奥沙利铂药物敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡,平板克隆形成试验、裸鼠移植瘤成瘤实验分析细胞成瘤性变化。结果:p53 siRNA可显著下调SGC7901细胞中突变型p53基因mRNA和蛋白的表达,实验组较未转染组和对照组细胞生长曲线左移。实验组的G0/G1期细胞数较对照组和未转染组分别减少7.4%和6.7%,进入S期的细胞数增加17.2%,奥沙利铂诱导的细胞凋亡率明显降低,未转染组、对照组和实验组细胞的IC50分别为15.88μmol/L、14.32μmol/L和20.34μmol/L。与未转染组和对照组相比,实验组细胞平板克隆形成数量显著增多,裸鼠体内细胞成瘤性增加。结论:p53 siRNA可有效抑制突变型p53基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,但利用RNA干扰技术靶向突变型p53基因在胃癌的治疗上尚存在不确定性。     

抑癌蛋白p21和p53表达与胃癌细胞增殖的关系

为探讨抑癌蛋白ｐ２１和ｐ５３的表达与胃癌恶性生长的关系，选择８８例手术切除的胃癌和胃溃疡蜡块标本，用免疫组织化学方法检测上述标本中ｐ２１，ｐ５３和ＰＣＮＡ的表达。结果表明：胃癌组织中ｐ５３的突变蛋白表达率约为４０％，ｐ２１蛋白在胃粘液腺癌和低分化及未分化型腺癌表示明显低下，ＰＣＮＡ在胃腺癌中的表达水平高。提示胃癌细胞ｐ２１蛋白水平（低）和ｐ５３的突变与胃癌的发病有一定的关系，而与胃癌细胞恶性增长的     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

胃癌p53基因甲基化及其表达情况的研究

目的检测胃癌组织中p53基因甲基化状态和p53蛋白表达情况。方法选择p53基因第5外显子,应用限制性内切酶HpaII和MspI酶切胃癌组织及正常胃组织DNA,经PCR扩增和免疫组化等方法对100例胃癌患者的癌组织和癌旁组织进行检测。结果有71%的患者p53蛋白表达阳性,54%的患者具有p53蛋白基因的高甲基化,50%同时有p53蛋白表达阳性和p53基因的高甲基化。结论提示p53基因高甲基化状态引起的突变或失活是胃癌发生发展的重要因素之一。     

AEG-1在胃癌组织中的表达及与肿瘤多药耐药性的关系

目的 检测星形细胞上调基因1（astrocyteelevatedgene-1,AEG-1）的表达强度与胃癌细胞体外化疗药敏性的关系,并分析AEG-1可能参与胃癌多药耐药性的机制.方法 取58例胃癌患者的组织标本,一份应用四甲基偶氮唑盐（four methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测肿瘤细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）、顺铂（cisplatin,DDP）、紫杉醇（taxol,PTX）、表阿霉素（epirubicin,eADM）、奥沙利铂（oxaliplatin,L-OHP）的体外敏感性;另一份用免疫组织化学技术检测多药耐药相关基因AEG-1与P-糖蛋白（p-glycoprotein,P-gp）、谷胱甘肽-S-转移酶π（glutathione-S-transferase-π,GST-π）、生存素（Survivin）、Bcl-2的蛋白表达.结果 胃癌组织中AEG-1阳性表达率为81.03％ （47/58）,强表达率为55.17％（32/58）;AEG-1强表达组对5-FU、DDP、L-OHP具有更强的耐药性（P＜0.05）,而PIX、eADM对肿瘤细胞的抑制率在2组间差异无统计学意义（P＞0.05）;相关分析显示,AEG-1与P-gp、AEG-1与Survivin具有正相关性（r=0.305、0.413,P＜0.05）,AEG-1与GST-π、Bcl-2表达无明显相关关系（rs=0.225、0.138,P＞0.05）.结论 AEG-1与胃癌的MDR有关,其机制可能在于AEG-1能调节P-gp、Survivin的表达.     

胃癌患者血浆DNA p53基因突变的检测

目的:探讨胃癌患者血浆循环核酸p53基因突变检测的可行性,研究基因突变与胃癌的发生、发展、预后的关系。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增p53基因外显子7,用变性高效液相色谱技术(DHPLC)对产物进行突变分析,再与各生物参数进行相关性研究。结果:在34例胃癌患者中11例(32.4%)发生p53基因突变,突变率与组织类型、组织分化程度有关(P<0.05),与临床分期、淋巴结转移及远处转移无关(P>0.05)。结论:检测胃癌患者血浆循环核酸p53基因突变,对胃癌的恶性程度、预后评估有一定的临床价值。而DHPLC可作为一种快速简便的基因检测手段。     

腺病毒介导p53基因逆转乳腺癌耐药的实验研究

目的探讨腺病毒介导p53基因（Ad-p53）对人乳腺癌阿霉素（ADM）耐药细胞株MCF-7／ADM的耐药性及多药耐药基因1（MDR1）的影响。方法以Ad-p53转染MCF-7／ADM细胞株,流式细胞术检测p53蛋白变化;锥虫蓝活细胞拒染法观察细胞生长情况;MTT法观察MCF-7／ADM细胞对阿霉素耐药性的变化,实时荧光RT—PCR法检测MDR1 mRNA变化。结果流式细胞术观察到MCF-7／ADM细胞经MOI50的Ad-p53作用48h后,p53蛋白表达率由10．24％升高到36．20％;细胞抑制率为7．4％（P=0．003）;逆转MCF-7／ADM对ADM的耐药倍数11．6倍（P=0．001）;实时荧光RT-PCR检测结果显示MDR1 mRNA相对表达量由1．25±0．01下降至0．91±0．01（P=0．011）。结论腺病毒介导p53基因能抑制MCF-7／ADM细胞MDR1基因的表达,并能部分逆转MCF-7／ADM的耐药性,增加阿霉素化疗敏感性。     

子宫肌瘤中抑癌基因p53和Rb的表达

目的：探讨抑癌基因p53和Rb在子宫肌瘤发生发展中的作用。方法：用NorthernBlot方法检测14例子宫肌瘤和3例子宫平滑肌肉瘤中p53和Rb基因的mRNA表达。结果：p53和Rb基因在分泌期子宫肌肉中的表达水平明显高于增殖期，在子宫肌瘤中的表达水平明显低于分泌期子宫肌肉组织，在子宫肉瘤中的表达水平低于子宫肌瘤。结论：在子宫肌肉组织中，性激素对p53和Rb基因的表达可能有调节作用。推测性激素促使子宫平滑肌细胞增生的作用途径之一是影响p53和Rb基因的表达。     

胃黏膜病变演化过程中幽门螺杆菌感染与p53变异和MG-7抗原及核仁组成区相关蛋白表达的关系

目的　从胃黏膜细胞增殖、基因变异、胃癌特异性抗原表达的角度探讨幽门螺杆菌(Hp)感染 ,特别是cagA阳性Hp感染在胃黏膜病变演化中的作用。 方法　根据组织形态学和黏液组织化学检查将 10 9例临床标本分为Ⅰ型肠化、Ⅱ型肠化、Ⅲ型肠化、非典型增生和胃癌 5个组 ;用显微切割 /PCR方法检测标本中的Hp ,并将其分为cagA阳性和cagA阴性两组 ;用免疫组化方法检测 p5 3蛋白、MG 7抗原的表达 ;用组织化学银染检测核仁组成区相关蛋白 (AgNORs)的表达。结果　 (1)P5 3在各组均有表达 ,其中胃癌组P5 3的表达率明显高于其他各组 (P <0 .0 5 )。 (2 )胃癌组MG 7的总表达率与过表达率均明显高于其他各组。在各组胃黏膜病变中 ,Hp阳性与阴性标本MG7表达无明显差异。在各组病变中cagA阳性组与cagA阴性组MG7的表达无明显差异。 (3)Ⅰ型和Ⅱ型肠化→Ⅲ型肠化→非典型增生→胃癌的演变过程中 ,AgNORs平均计数明显增高 (P <0 .0 5 )。各胃黏膜病变组中Hp阳性标本AgNORs计数明显高于Hp阴性标本 (P <0 0 5 )。在Hp阳性的标本中 ,cagA阳性标本AgNORs颗粒计数明显高于cagA阴性标本 (P <0 0 5 )。 结论　Hp感染 ,特别是cagA阳性的Hp感染在胃黏膜病变演化的过程中起重要作用 ,其作用机理与促进黏膜细胞增殖有关 ;p5 3变异和MG 7     

胃肠恶性肿瘤及其切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的 探讨胃肠道恶性肿瘤及其切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达与手术切缘的安全性关系。方法 用PCR－SSCP和免疫组化S－P方法检测20例胃癌和10例大肠癌标本和切缘组织中p53基因突变和p53蛋白表达情况。结果 （1）胃肠道恶性肿瘤组织中有很高的p53基因突变率（63％）和p53蛋白阳性表达率（53．33％）。（2）肿瘤组织中p53蛋白表达是切缘组织中p53蛋白表达的前提。（3）p53基因突变和p53蛋白表达随肿瘤切缘距离的增加而呈现极显著的递减趋势。结论 就p53基因突变和p53蛋白表达而言,距离肿瘤边缘5cm可定为肿瘤的分子切缘。     

突变型p53、PCNA表达和幽门螺杆菌感染与胃黏膜病变

目的　研究突变型 p5 3、增殖细胞核抗原 (PCNA)和幽门螺杆菌 (Hp)感染与胃黏膜良、恶性病变之间的关系。　方法　采用免疫组织化学S -P法 ,对慢性浅表性胃炎 (CSG )、慢性萎缩性胃炎(CAG)、不典型增生 (GED)及胃癌 (GCA)共 115例胃镜活检标本进行突变型 p5 3、PCNA和幽门螺杆菌感染进行检测。　结果　突变型p5 3在CSG及CAG表达均为阴性 ,在GED表达阳性 2 4% ,在GCA表达阳性 5 5 % ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。PCNA反映细胞增殖活性 ,在CSG、CAG、GED、GCA的表达有显著递增性 (P <0 .0 5 ) ;幽门螺杆菌感染在CSG检出率为 36 %、CAG为 48% ,GED为 72、GCA为 80 % ,与 2 0例正常胃黏膜Hp检测率 2 0 %作对照 ,除了CSG外 ,其余几组均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。Hp感染与PCNA表达强级 (阳性细胞 >5 0 % ) ,与 p5 3阳性病例均有显著相关性 (P <0 .0 1)。 　结论　突变型 p5 3、PCNA及幽门螺杆菌感染在胃黏膜不典型增生、胃癌的发生、发展中有一定作用 ;Hp感染对胃黏膜上皮细胞过度增殖可能起促进作用     

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况.方法: 从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照.结果: 96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变.肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性.结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一.     

鼠双微粒体2/p53通路与乳腺癌的研究进展

肿瘤抑癌基因p53所编码的产物P53蛋白能调节正常细胞周期,在细胞DNA受到损伤或其他应激反应时,P53使控制细胞周期和保持细胞基因组完整的基因活化并转录,从而导致细胞周期停滞或细胞凋亡.