腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转移对大鼠脑损伤后细胞凋亡的影响

目的 研究腺病毒介导的脑源性神经营养因子（BDNF）基因转移对脑损伤后细胞凋亡的影响。方法 将重组腺病毒载体4μl注入承受单侧大脑皮质重锤打击伤的海马区,对照组注射病毒缓冲液。伤后3h,1,3,7,14d利用免疫组化单标和（或）双档染色、原位杂交－免疫组化双标染色、DNA末端原位标记以及流式细胞仪等方法,检测伤侧大脑皮质、海马区BDNF及凋亡相关信号表达的改变。结果 与对照组相比,注射病毒载体组动物术后3,7d海马CA1、CA3区BDNF神经元显著增多,而凋亡细胞显著减少（P＜0．01）;表达BDNF的神经元较少并同时表达凋亡相关信号。结论 腺病毒介导的BDNF基因转移对海马神经元具有保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠脑损伤

目的探索移植转染胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因的大鼠神经干细胞（NSCs）能否促进脑损伤大鼠的神经功能修复。方法利用阳离子脂质体转染GDNF基因到大鼠NSCs，在脑立体定向仪引导下分别将PBS、NSCs、转基因NSCs移植到脑损伤大鼠局部损伤灶边缘，通过观察记录大鼠行为能力的变化，评价移植细胞后大鼠神经功能的修复情况。结果转染后72h，荧光蛋白大量表达。转基因细胞移植后可以在14d时仍表达GDNF基因，各实验组于移植后3d时行为学指标差异无统计学意义（P〉0．05），而在移植后7d，移植转基因NSCs组和NSCs组即与对照组在行为学指标上差异有统计学意义（P〈0．05）；在移植后14d，移植转基因NSCs组与其余两组在行为学指标上差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论转基因NSCs移植后可以分泌GDNF并促进脑外伤大鼠神经功能的恢复。     

脑源性神经营养因子与糖尿病

脑源性神经营养因子 (Brain -derivedneurotrophicfactor,BDNF)不但在神经系统的发育和功能维持上起重要作用 ,而且对血糖调节也有重要影响。外源性BDNF可降低Ⅱ型糖尿病大鼠血糖浓度 ,其作用可持续 2周 ,包括治疗剂量在内的一定剂量范围 (2 0～ 2 0 0mg·kg-1)的BDNF对正常大鼠血糖无明显影响。外源性BDNF还可减少I型糖尿病大鼠的胰岛素用量。BDNF对糖尿病大鼠血糖的调节与改善胰脏和肝脏的功能及恢复机体组织对胰岛素的敏感性有关 ,而且对中枢神经系统中某些调节部位也可能起一定作用。与神经营养素 - 3(NT - 3)、睫状神经营养因子 (CNTF)和胰岛素样生长因子 (IGF)相比 ,BDNF降糖作用稳定。     

脑源性神经营养因子与脊髓损伤

脊髓损伤 (ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ ,ＳＣＩ)是一种严重威胁人类生命健康的疾患 ,一旦发生将给患者直至整个社会带来沉重的负担。令人沮丧的是 ,虽经百余年来全世界神经科学研究者的孜孜努力 ,ＳＣＩ的治疗效果仍远不尽人意。究其原因 ,乃是由于中枢神经系统 (ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ ,ＣＮＳ)极其有限的再生能力。目前有学者认为 ,哺乳动物外周神经系统之所以远比ＣＮＳ有更强的再生能力 ,原因之一即为ＣＮＳ缺乏为其自身损伤提供足够营养支持 (ｔｒｏｐｈｉｃｓｕｐｐｏｒｔ)的能力 ;而营养支持主要来源之一…     

腺病毒介导脑源性神经营养因子基因转移对神经根损伤后神经元的保护和促轴突再生作用

目的：探讨腺病毒向脊髓内转移脑源性神经营养因子（BDNF）基因能否在脊髓水平修复神经根损伤。方法：在大鼠神经根切断吻合模型基础上，通过显微注射法在立体定位仪上将2μl复制缺陷型重组腺病毒载体（AxCA-BDNF)直接注入大鼠神经根损伤部相应的脊髓腹角。观察伤后脊髓尼氏染色神经元和轴突计量及形态学改变。结果：与单纯损伤组比较，注射AxCA-BDNF可明显增加神经根伤后尼氏染色阳性神经元的百分率、有髓神经纤维数目以及髓鞘厚度。结论：神经根重建结合BDNF基因治疗可明显减少神经根伤后尼氏染色神经元的死亡以及促进轴突再生，是一种新的有效的治疗神经根损伤方法。     

胶质细胞源性神经营养因子基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的：分离胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＧＤＮＦ）基因,并在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。方法：从人多形性成胶质细胞瘤细胞株ＢＴ３２５ 中提取总ＲＮＡ ,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分离ＧＤＮＦ基因,构建表达载体ｐＢＶ－ＧＤＮＦ,转化大肠杆菌,温控诱导ＧＤＮＦ的表达。结果与结论：分离得到的人ＧＤＮＦ基因,在大肠杆菌中得到高效表达,表达产物占全菌总蛋白的２４．７％ ,初步纯化后纯度达９０％ 以上。     

高压氧、脑源性神经营养因子联合治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 观察高压氧(HBO)、脑内注射脑源性神经营养因子(BDNF)联合治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBI)的疗效。方法 7d龄SD大鼠左侧颈总动脉结扎联合低氧吸入形成HIBI后，即刻脑室注射BDNF(0．5μg)并行HBO治疗(A)或常氧高压氮处理(B)，设单纯HIBI组(C)、假手术组(D)和正常组(E)，观察对脑水肿、皮层和海马脂质过氧化物(MDA)水平和细胞凋亡百分率的影响。结果 A，B组脑水肿程度、MDA和细胞凋亡百分率水平均显著低于C组；脑水肿程度、细胞凋亡百分率A组显著低于B组，尤以脑水肿降低更明显，接近于D组，MDA水平两组相差无显著意义。结论 联合应用HBO及脑室注射BDNF治疗可显著减轻HIBI后的脑损伤，其效果优于BDNF 常氧高压氮处理组，表明在HIBI的治疗中HBO与BDNF联合应用起到了协同作用。     

脑源性神经营养因子在视网膜神经细胞bcl-2蛋白动态表达中的作用

目的探讨脑源性神经营养因子在视网膜神经细胞bcl-2蛋白动态表达中的作用。方法选择新生小牛视网膜神经细胞进行传代培养,当传至第2代时随机分为观察组及对照组,两组神经细胞个数相同,观察组在接种后的第3天加入脑源性神经营养因子(浓度为50μg/L),对照组不加入任何营养因子。分别于给药后的第2、4、6天应用Western blotting法检测两组视网膜神经细胞中bcl-2蛋白的表达情况。结果观察组给药后第2天bcl-2蛋白表达灰度值为0.451±0.049、给药后第4天bcl-2蛋白表达灰度值为0.376±0.043、体外培养1个月神经元细胞存活数为13.10±1.35、NSE阳性表达细胞数10.53±1.12,均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);给药后第6天bcl-2蛋白表达灰度值为0.291±0.037,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在短时间内,脑源性神经营养因子对视网膜神经细胞bcl-2蛋白的表达具有促进作用,能够在一定意义上保护视网膜神经元细胞。     

脑源性神经营养因子复合导管的制备及其性能评价

目的制备脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)复合导管并对其性能进行评价。方法采用聚乳酸(PLA)作为支架材料,利用溶剂挥发法制备BDNF复合导管并对其浸入溶液前后的形态进行观察,利用万能材料实验机研究其力学性能,接触角测试仪检测其亲疏水性,ELISA测定释放液中BDNF的浓度并评价其体外释药特性。结果与结论 BDNF导管的拉伸强度为1.80 MPa,断裂伸长率为204.17%,接触角为65.4°,药物缓慢释放可达90 d,累积释放率约70%。表明制备的BDNF复合导管具有一定的柔韧性、亲疏水性和缓释特性。     

脑源性神经营养因子基因转染雪旺细胞移植于脑干网状结构损伤区的实验研究

目的　观察阳离子脂质体转染脑源性神经营养因子 (BDNF)基因对神经组织的保护和促进髓鞘再生作用。　方法　体外培养大鼠雪旺细胞 ,用阳离子脂质体介导人真核细胞质粒(PCDNA3) -BDNF重组体转移到雪旺细胞。然后将其移植到大鼠脑干网状结构损伤区 (Ⅰ组 ) ,同时设置单纯细胞移植组 (Ⅱ组 )、转染空载体细胞移植组 (Ⅲ组 )和注射等渗盐水组 (Ⅳ组 )。通过酶联免疫吸附试验检测脑内BDNF水平 ,免疫组化方法检测脑干内髓鞘碱性蛋白 (MBP) ,电镜观察髓鞘再生情况。　结果　移植后 1周 ,Ⅰ组的BDNF水平明显高于其他组 (P <0 .0 5 ) ,在免疫组化切片上可以见到Ⅰ组的MBP表达比其他组明显增多 ,透射电镜显示Ⅰ组髓鞘数量比其他组明显增多(P <0 .0 5 )。　结论　转染BDNF基因的雪旺细胞移植于损伤的脑干网状结构 ,可能有保护神经组织、促进髓鞘再生的作用     

NGF对体外培养人血管内皮细胞细胞周期和PCNA表达的影响

 目的研究神经生长因子(Nerve growthfactor,NGF)对人血管内皮细胞的细胞周期和对增殖细胞核抗原(Prolifer-ating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.方法将NGF作用于体外培养的HUEVC 304细胞,利用流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量的变化,利用免疫组织化学的方法检测对PCNA表达的改变.结果NGF作用组出现C0～G1期细胞数量明显减少,S期细胞、G2～M期细胞明显增加,DNA相对含量无明显变化,PCNA表达明显增加(P＜0.05).结论NGF能明显促进HEVC增殖.     

＋GZ重复暴露对大鼠脑组织神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子基因表达的影响

目的了解＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织神经生长因子（ＮＧＦ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）基因表达的变化,探讨两种生长因子在＋ＧＺ暴露所致脑损伤中的作用和意义。方法２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分成对照组、＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ四组,每组６只。对照组大鼠Ｇ值为＋１ＧＺ,实验组大鼠在动物离心机上经历了３次＋１０ＧＺ／３ｍｉｎ（两次间间隔３０ｍｉｎ）作用。分别于暴露后３０ｍｉｎ、６ｈ和２４ｈ处死大鼠取脑,提取总ＲＮＡ,用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ＧＺ重复暴露后大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ表达水平。结果＋ＧＺ重复暴露后３０ｍｉｎ和６ｈ,大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ明显升高,２４ｈ降至正常。结论＋ＧＺ重复暴露可诱导大鼠脑组织ＮＧＦ和ｂＦＧＦｍＲＮＡ的表达增加,这两种生长因子的表达增加可能对神经细胞具有保护和损伤修复作用,是脑的自身保护机制之一。     

联合应用神经生长因子和睫状神经营养因子治疗大鼠坐骨神经损伤

目的 探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。方法 切除120只大鼠左侧6mm长坐骨神经，随机分为4组，每组30只，分别行NGF CNTF、CNTF、NGF、等渗盐水(NS)靶肌肉注射。伤后行坐骨神经功能指数(SFI)、形态学和S—100α、神经中丝200(NF200)免疫组化检查。结果 联合应用NGF和CNTF组SFI有髓神经纤维直径、数目和S—100α、NF200阳性轴突计数均明显优于单独用药组。结论 联合应用NGF和CNTF可明显促进大鼠坐骨神经损伤后的再生与功能恢复。     

小鼠神经生长因子cDNA的克隆及核苷酸序列分析

用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶在限制性内切酶ＳｍａＩ存在下，将神经生长因子ｃＤＮＡ片断克隆到具有双向转录启动子的载体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其核苷酸顺序表明，所克隆的ＮＧＦｃＤＮＡ片断，长３６３ｂｐ，包含了成熟神经生长因子的全部编码。该重组质粒可分别用于制备ＮＧＦｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，是研究ＮＧＦ基因结构及表达调控等方面的重要工具。     

神经生长因子在位听神经核内的定位分布

 目的 采用免疫细胞化学方法,观察正常豚鼠耳蜗神经核及前庭神经核内神经生长因子(Nerve growth factor,)精确定位,为进一步研究打下基础。方法 采用免疫组化法。结果 NGF-ir免疫阳性产物见于前庭核所属的内侧核,密集,上、外、下核呈散在分布,在4个亚核之间阳性神经纤维分布较多。耳蜗核的腹、背侧核团内阳性细胞相差不多,背略多于腹侧核。结论 提示NGF在豚鼠位听神经核团内,具有营养、保护及维持正常神经功能作用。     

肝细胞生长因子修复周围神经损伤研究

目的 探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对周围神经损伤修复的作用.方法 以Wistar大鼠坐骨神经挤挫伤为动物模型,神经损伤局部肌肉注射腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF),与无注射HGF组对照,通过步态分析、肌肉湿重测定、计算机图像分析等指标评价神经损伤后再生效果.结果 术后4周,在坐骨神经指数、肌肉湿重恢复、计算机图像分析等再生指标的比较中,注射HGF组明显强于对照组(P<0.05).结论 HGF能促进大鼠坐骨神经损伤后的有髓纤维再生和功能恢复,是一种有效的治疗周围神经损伤的神经营养因子.     

神经生长因子对大鼠爆震性听力损伤的保护作用

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠爆震性听力损伤的保护作用。方法 制作强脉冲噪声致聋大鼠模型30只，10只肌肉注射NGF4周(爆震前l周至爆震后3周)，10只注射等量的生理盐水作对照，10只作正常对照，测定爆震前后脑干听觉诱发电位(auditory brain-stem response,ABR)阈值及扫描电镜观察耳蜗毛细胞变化。结果 爆震后3dNGF组ABR反应阈恢复较生理盐水组显著快，2ld后，NGF组ABR已恢复正常水平，而生理盐水组未能恢复正常水平。扫描电镜示：爆震后3h：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛排列扭曲、倒伏、紊乱、融合及部分缺失，NGF组大鼠外毛细胞静纤毛有轻度紊乱及松散；爆震后3d：生理盐水组大鼠外毛细胞静纤毛病变无明显恢复，NGF组大鼠外毛细胞静纤毛病变已不明显；爆震后lld：生理盐水组病变减轻，NGF组病变基本恢复；爆震后2ld：生理盐水组病变减轻，但有部分病变没有完全恢复，NGF组病变完全恢复。结论 NGF能防止受损的毛细胞进一步变性坏死，对听觉有明显的保护作用。     

细胞凋亡和氧化应激在大鼠创伤性脑损伤后应激性肝损伤中的作用

目的 探讨细胞凋亡和氧化应激在大鼠创伤性脑损伤(TBI)后应激性肝损伤中的作用.方法 改良Allen法建立TBI模型.40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为5组:正常对照组、TBI后6,12,24,48 h组.测定血清肝酶、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率.光镜及电镜观察肝组织学变化.结果 TBI后血清ALIT和AST显著进行性升高,肝组织SOD减少,丙二醛增加;TBI早期即6 h,电镜下可见凋亡细胞,细胞凋亡率显著增加且达峰值;病理显示TBI后肝组织进行性损伤.结论 TBI后出现应激性肝损伤,细胞凋亡和氧化应激可能参与其发病过程.