猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达

目的： 构建含猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 与猪γ 干扰素（ Ｉ Ｆ Ｎ γ） 的融合表达载体。方法： 从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃ Ｃ１ 的质粒中, 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出含酶切位点及接头的ｃ Ｃ１ 和 Ｉ Ｆ Ｎ γｃ Ｄ Ｎ Ａ, 两ｃ Ｄ Ｎ Ａ 经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌 Ｘ Ｌ Ｂｌｕｅ。结果： 经酶切分析, 表明重组载体中含１５ｋｂ 插入片段。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 显示一５２ ｋ Ｄａ 的诱导产物。结论： 猪 Ｉ Ｆ Ｎ γ和猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合ｃ Ｄ Ｎ Ａ 在大肠杆菌中获得表达。     

猪囊尾蚴抗原cC1在大肠杆菌中的克隆及高效表达

[目的 ]在大肠杆菌中克隆及高效表达猪囊尾蚴抗原cC1。 [方法 ]将cC1cDNA片段以BamHI和PstI克隆到pGEM 3Z载体 ,改换限制性内切酶位点成BamHI和PstI,加上人工接头PstI BamHI XhoI后 ,克隆到pGEX 5T ,构建重组原核表达载体pGE X5T cC1。 [结果 ]培养 3h、IPTG诱导 6h ,cC1表达量最高 ,表达量占细菌总量的 5 7% ,Westernblotting结果表明猪囊尾蚴抗原cC1蛋白与囊尾蚴病猪血清有特异性的结合条带。 [结论 ]猪囊尾蚴抗原cC1在大肠杆菌中获得高效表达。     

猪囊尾蚴抗原与猪白细胞介素-4基因融合DNA疫苗载体的构建

目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素 ４（ Ｉ Ｌ ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）,分别扩增猪 Ｉ Ｌ ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合,获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列,同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定,证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体,其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。     

猪囊尾蚴抗原与猪白细胞介素-4基因融合DNA疫苗载体的构建

目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ Ｉ Ｌ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）,分别扩增猪 Ｉ Ｌ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合,获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列,同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定,证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体,其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。     

融合蛋白胸腺素α-干扰素与干扰素α对2.2.15细胞抗原表达的影响

临床上许多学者把α干扰素（IFN-α）和胸腺素α（TA1）联合起来治疗慢性乙型肝炎,结果发现联用效果明显优于单用IFN-α或TA1[1].     

猪囊尾蚴特异抗原的基因克隆和表达

目的 寻找可用于诊断猪囊尾蚴病或可诱发宿主保护性免疫力的特异抗原。方法 用免疫血清筛选猪囊尾蚴头节λＺＡＰⅡｃＤＮＡ文库，阳性克隆基因测序，并亚克隆人表达载体ｐＥＴ２８ｂ。对重组体进行诱导表达并对表达产物进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 从ｃＤＮＡ文库中筛到２个阳性克隆Ｃｙ１和Ｃｙ４。Ｃｙ４片段在原核体系（ｐＥＴ２８ｂ）中表达，获得高产量的融合蛋白Ｃｙ４。结论 Ｃｙ１为编码     

毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究

目的 研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法 对表达产物行SDS—PAGE,FPLC离子交换层析和分子筛，等电聚焦，脱磷酸反应，N端氨基酸测序，小鼠免疫接种。结果 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大，易于纯化，等电点较理论值低，重组cC1已被磷酸化，N端携带了来自载体的4个氨基酸，免疫原性较原核的明显增强。结论 毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化，尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强，表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。     

猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达

目的　克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法　用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果　PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论　在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 ,为进一步研究打下基础     

γ-干扰素对肝癌细胞增殖和抗原表达影响的相关研究

目的探讨IFN-γ对肝癌细胞肿瘤抗原甲胎蛋白和MAGE-1表达的影响与机制。方法用重组人干扰素处理人肝癌细胞系SMMC-7721,用四氮唑比色法检测人肝癌细胞增殖活性,用间接免疫荧光检测MAGE-1表达,ELISA法检测甲胎蛋白表达,用BSP法测MAGE-1基因启动子甲基化状态,用免疫沉淀测JNK活性。结果在IFN-γ作用下,SMMC-7721细胞甲胎蛋白表达量下降,MAGE-1表达下降,MAGE-1基因启动子甲基化程度增加而JNK活性降低。结论 IFN-γ可增强MAGE-1基因启动子甲基化程度,下调MAGE-1表达,降低JNK活性,抑制细胞增殖。     

干扰素-γ与支气管哮喘

干扰素-γ是一种调节细胞功能的小分子多肽。在气道炎症反应中,Th_1细胞活化后产生的IFN-γ能抑制B细胞产生IgE、IgG_1和IgG_4参与哮喘发病。本文就IFN-γ在支气管哮喘发病及其治疗中的作用做一简要综述。     

小鼠干扰素γ诱导蛋白10的真核表达及临床意义

中晚期特别是激素抵抗性前列腺癌患者,目前尚无有效治疗手段。研究证实,T细胞介导的免疫应答在机体抗肿瘤过程中起着主导作用。干扰素7诱导蛋白10（IP-10）能够诱导活化的T细胞等趋化。另外,IP-10还能够抑制肿瘤血管生成。本实验旨在构建小鼠IP-10（mIP-10）真核表达质粒,探讨其在真核细胞中的表达,为进一步研究IP-10的生物学活性及肿瘤的基因治疗奠定基础。     

脑脊液γ-谷氨酰转移酶等的检测在脑囊尾蚴病中的意义

脑囊尾蚴病患者症状复杂,呈多样性,易与癫痫、结核性脑膜炎、脑血管疾病等相混淆,特别是以癫痫发作为主的脑囊尾蚴病与非囊尾蚴病特发性癫痫(EP)更易误诊[1].脑脊液(CSF)为中枢神经系统发挥正常生理功能提供适宜的微环境.     

抗原诱发的γ-干扰素测定

据世界卫生组织推测,世界1/3的人口已经感染了结核菌,这给全球结核病的控制造成了很大的阻碍.目前,发病率低的国家结核病控制的一个重要措施是有目的地筛检出潜在性结核感染者（LT-BI）并进行预防性治疗.在高负担国家如我国仍不得不把主要精力放在活动性结核病的诊断和治疗上,潜在性结核感染的筛查仅限于高危人群如儿童,开放性结核的密切接触者以及人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者等.近5年来潜在性结核感染的诊断成了国际上的一个研究热点并有了突破性的进展.现将研究情况及目前的认识作以总结.     

新诊断2型糖尿病与柯萨奇病毒、巨细胞病毒感染及白介素-18、干扰素-γ、干扰素-γ诱导蛋白-10的相关性

目的 探讨新诊断T2DM与柯萨奇病毒（COX）、巨细胞病毒（CMV）、单纯疱疹病毒（HSV）及EB病毒（EBV）感染的关系,分析T2DM病毒感染患者血清IL-18、干扰素-γ（IFN-γ）及IFN-γ诱导蛋白-10（IP-10）的水平及意义. 方法 选取新诊断T2DM患者（T2DM组）208例和健康对照（NC组）者240名,检测血清COX、CMV、HSV、EBV IgG抗体阳性率和炎症因子IL-18、IFN-γ及IP-10水平,比较两组病毒抗体阳性率与炎症因子水平的差异,分析T2DM病毒感染与炎症因子的关系. 结果 T2DM组COX、CMV抗体阳性率高于NC组（19.23％vs0.83％,94.71％vs83.33％,P＜0.01）,两组HSV和EBV抗体均为阴性.T2DM组IL-18、IFN-γ及IP-10水平均高于NC组[IL-18：（130.30±118.44） vs（41.69±40.39） pg/ml; IFN-γ：（103.93±110.10）vs（34.50±24.89） pg/ml;IP-10：（2215.50±3395.47）vs （234.55±64.40） pg/ml,P＜0.05或P＜0.01].T2DM COX感染者IL-18高于无COX感染者[（142.84±150.63）vs（122.04±92.59） pg/ml,P＜0.05]. 结论 COX感染与新诊断T2DM的发生发展存在一定的相关性,可能与IL-18等的作用有关.     

GST-NP1融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

通过选用大肠杆菌偏好密码子对兔抗御素基因进行改造 ,人工合成兔防御素基因构建大肠杆菌GST -NP1融合基因在大肠杆菌中表达。研究表明 :蛋白质经过亲和层析洗脱纯化 ,SDS -PAGE电泳分析 ,只在目的分子量处出现单一条带。灰度扫描分析表明 ,表达量最高可达总蛋白的 2 7 7%。     

γ-干扰素对大鼠肾成纤维细胞增殖及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察γ-干扰素(IFN-γ)对体外培养的大鼠肾成纤维细胞增殖和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞NRK-49F,分别设立对照组和浓度为1 000、2 000、3 000、4 000、5 000 U/ml的IFN-γ组,对照组使用0.9%生理盐水。采用MTT比色法检测NRK-49F细胞的增殖情况;RT-PCR和Western印迹方法检测NRK-49F细胞MCP-1mRNA和蛋白水平。结果 IFN-γ组肾成纤维细胞增殖OD值均明显高于对照组(P<0.05);IFN-γ促进NRK-49F细胞增殖呈时间依赖性(P<0.05),与浓度无关(P>0.05)。与对照组相比,IFN-γ组MCP-1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);不同浓度IFN-γ组MCP-1 mRNA表达水平无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,IFN-γ组MCP-1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);不同浓度IFN-γ组间MCP-1蛋白水平无显著差异(P>0.05)。结论 IFN-γ呈时间依赖性促进NRK-49F细胞的增殖,IFN-γ可能通过上调MCP-1参与肾间质纤维化过程。     

干扰素-γ诱导的单核因子、单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β1在变应性鼻炎的表达及其意义

目的探讨干扰素-γ诱导的单核因子(monokine induced by IFN-γ,Mig)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)在变应性鼻炎发病中的作用及变应性鼻炎患者Th1/Th2/Th3亚群的功能状态。方法抽取变应性鼻炎患者和健康对照者外周血,用ELISA法检测血清Mig、MCP-1及TGF-β1的含量。结果健康对照组血清Mig为(90.99±21.92)pg/ml,高于变应性鼻炎组的(-4.91±28.01)pg/ml及变应性鼻炎合并哮喘组的(-8.33±8.34)pg/ml(P=0.000)。变应性鼻炎患者血清MCP-1浓度为(81.16±1.40)pg/ml,明显高于健康对照组的(51.56±2.91)pg/ml(P=0.000);变应性鼻炎合并支气管哮喘患者血清MCP-1浓度为(103.31±11.32)pg/ml,较单纯变应性鼻炎患者高(P=0.003);MCP-1与速发相反应的相关典型症状,如鼻塞(r=0.380,P=0.001)、喷嚏(r=0.314,P=0.006)、流涕(r=0.417,P=0.000)、体征(r=0.455,P=0.000)呈正相关。变应性鼻炎及变应性鼻炎合并哮喘患者血清TGF-β1分别为(51.66±5.42)和(54.43±5.10)ng/ml,高于健康对照组的(44.17±7.33)ng/ml(P=0.000),TGF-β1与鼻塞(r=0.882,P=0.000)、流涕(r=0.288,P=0.013)、体征(r=0.559,P=0.000)呈正相关。健康对照组、变应性鼻炎组、变应性鼻炎合并哮喘组血清MCP-1及TGF-β1表达不存在因年龄、性别引起的统计学差异。结论变应性鼻炎和支气管哮喘存在Th2亚群强势,变应性鼻炎患者体内出现保护性(或调节性)Th3功能增强,不同年龄、性别不影响血清MCP-1及TGF-β1表达。     

脾和干扰素-γ在缺血性脑损伤中的作用

缺血性卒中后继发的免疫反应是卒中后神经损伤的重要内源性机制,脾和干扰素-γ在其中发挥着重要的作用.监测脾大小和干扰素-γ水平对卒中严重程度和转归评估具有重要的参考意义.     

猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定

目的 目的 构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法 方法 提取pET28a?cC1质粒DNA, 用xho I和 BamH I双酶切, 用Klenow酶补平xho I酶切末端, 同时提取pMV261穿梭质粒载体, 用Hind III和BamH I双酶切, 用Klenow 酶补平Hind III酶切末端, 纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接, 构建pMV261?cC1穿梭质粒, 测序验证正确后, 将 pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌, 构建重组耻垢分枝杆菌, 经热诱导后, 以猪囊尾蚴病患者血清为一抗 进行Western?blotting鉴定。此外, 比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果 结果 构 建的重组穿梭载体经酶切、 测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后, SDS?PAGE电泳分析显示, 在40 kDa处 有外源性蛋白表达, 与预期值相符。Western?blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别, 表明cC1抗原基因在耻垢分枝 杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论 结论 成功构建了表达猪囊尾蚴特 异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。     

γ干扰素及其诱导蛋白10在不同临床阶段慢性HBV感染老年患者中的表达

目的探讨γ干扰素及其诱导蛋白(IP)-10在不同临床阶段慢性乙肝病毒(HBV)感染老年患者中的表达情况。方法 160例该院诊断为慢性HBV感染的老年患者,根据疾病不同时期分为耐受组(免疫耐受期)、活动组(免疫活动期)及重型组(重型HBV)。空腹抽取静脉血检测相关生化指标及γ干扰素、IP-10水平。结果耐受组丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBil)、HBV-DNA均低于活动组与重型组(P0.05);活动组均低于重型组(P0.05)。耐受组γ干扰素及IP-10水平均低于活动组与重型组(P0.05);活动组均低于重型组(P0.05)。γ干扰素及IP-10与ALT、AST、TBil、HBV-DNA存在正相关关系(P0.05)。结论γ干扰素及IP-10通过免疫反应参与了慢性HBV感染的病理损伤过程,且与肝组织的损伤存在密切相关性,在探索性研究中可进一步深入以期寻找到更理想的治疗靶点。