MDPG-23细胞内Smad信号途径在转化生长因子β1调控Smad7基因转录中的作用

目的研究成牙本质细胞系MDPC-23内Smad信号途径在转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)调控Smad7基因转录调控中的作用,从基因转录水平探讨成牙本质细胞内TGF-β调控Smad7基因表达的分子机制.方法培养MDPC-23细胞,通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad蛋白分子对Smad7启动子活性的影响,实验数据采用单因素方差分析.结果当Smad7启动子(-408 bp至+112bp)荧光素酶活性载体表达在MDPC-23细胞时,其基础启动子活性被TGF-β1显著诱导增加,而骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对其活性无明显影响.单独过表达Smad1、2、4、5对Smad7启动子活性无明显影响.Smad3过表达显著增强Smad7启动子活性,而Smad3与Smad4共转染进一步增强了Smad3的作用.过表达Smad3突变型载体或Smad3反义cDNA(AS-Smad3)均显著抑制TGF-β1对Smad7启动子活性的诱导作用.结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,TGF-β通过Smad3与Smad4协同调控Smad7基因转录.     

Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子β信号转导中的作用

目的研究Smad7在成牙本质细胞系MDPC-23内转化生长因子(transforming growth factor-β1, TGF-β)信号转导的作用.方法培养MDPC-23细胞,免疫组化法观察TGF-β1对MDPC-23细胞内Smad7分子定位改变.通过瞬时共转染和报告基因检测方法观察Smad7分子对TGF-β1调控目的基因转录的影响.结果MDPC-23细胞表达Smad7蛋白,主要定位于细胞胞浆,在转化生长因子β1刺激30 min后,Smad7从胞核向胞浆转位聚集.TGF-β1显著诱导p3TP-Lux基础启动子活性.过表达Smad7完全抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,而过表达Smad7反义cDNA载体则显著促进了TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导.结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad7可能作为一种抑制性Smad分子在拮抗TGF-β1信号转导过程中发挥重要的作用.     

人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1信号转导中的作用

目的：探讨人牙髓细胞内Smad 2、3在转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号转导过程中的作用。方法：原代培养人牙髓细胞，用激光共聚焦显微镜观察TGF－β1刺激初期牙髓细胞内Smad 2、3由胞质向胞核转位的现象，同时采用Western blot方法检测刺激后期Smad 2、3蛋白表达的变化。结果：TGF－β1刺激2h内，Smad2、3在胞质中表达渐弱，在胞核内表达渐强，呈现由胞质向胞核逐步转位的趋势。Smad 2蛋白总量在TGF－β1刺激前后几乎无变化，而Smad 3在刺激后24h表达量明显下降，48h后表达十分微弱。结论：Smad 2、3可能是人牙髓细胞内TGF－β1的信号转导分子。TGF－β1刺激初期Smad 2、3通过发生转位参与转导TGF－β1信号至核内，刺激后期Smad 3表达水平的下调可能与TGF－β1负反馈调节自身的信号有关。     

MDPC-23细胞内核心结合因子A1增强Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因的表达

目的 :研究转录因子核心结合因子A1(CBFA1)在Smad分子调控牙本质涎磷蛋白 (DSPP)基因表达中的作用。方法 :细胞培养 ,基因转染和报告基因检测。结果 :转化生长因子 β1(TGF β1)抑制DSPP基因启动子活性的表达。Smad3过表达显著增强了TGF β1对DSPP基因表达的转录抑制。单独过表达CBFA1对DSPP基因启动子活性无明显影响。但是 ,CBFA1与Smad3共转染显著增强Smad3对DSPP基因启动子的抑制作用 ,在TGF β1存在时 ,其作用进一步增强。结论 :在成牙本质细胞系MDPC 2 3内 ,CBFA1可能作为一种转录因子协同调控Smad3对DSPP基因转录的调控。     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

Smad3在转化生长因子β1调控人牙本质基质蛋白1基因表达中的作用

目的：观察Smad3在转化生长因子β1（TGF-β1）调控人牙本质基质蛋白1（DMP1）转录表达中的作用并对DMP1基因启动子上的结合位点进行初步定位。方法：将Smad3瞬时转染至具有矿化活性的人牙髓干细胞（HDPSC）中,观察Smad3蛋白表达和转位情况,并检测在有无TGF-β1的刺激下细胞中pGL3-P-193～＋86和pGL3-P-505～＋86启动子活性的变化。pGL3-P-505～＋86与Smad3共转染至细胞中,10ng/ml TGF-β1刺激2h后,提取细胞核蛋白,EMSA法检测DMP1基因启动子-505～-193bp区存在的Smad3结合位点。结果：HDPSC中瞬时转染Smad3后,其主要表达于细胞胞浆中,随着TGF-β1刺激不同时间后,Smad3在细胞中的表达出现从胞浆到胞核的转位。Smad3可明显加强TGF-β1下调pGL3-P-193～＋86和pGL3-P-505～＋86启动子活性的作用,在DMP1基因启动子-505～-193bp区至少有一个Smad3结合区域为-209～-201bp区的GTCTAGTCA序列。结论：Smad3是TGF-β1信号通路的下游作用分子,可介导TGF-β1下调D...     

TGF-β1对MDPC-23细胞DPP表达调控的体外研究

目的 :研究转化生长因子 β1(TGF -β1)对成牙本质细胞表达DPP的调控作用。方法 :给体外细胞培养的MDPC -2 3成牙本质细胞不同浓度的TGF -β1刺激 ,利用原位杂交的方法观察细胞内DPPmRNA的变化 ,所得结果进行图像分析和统计处理。结果 :TGF -β1刺激前后的成牙本质细胞均表达DPPmRNA ,但刺激后的成牙本质细胞DPPmRNA表达下降 ,不同浓度TGF -β1刺激成牙本质细胞后DPPmRNA表达程度不等。结论 :外源性TGF -β1下调成牙本质细胞表达DPP ,并有浓度差异。     

TGF-β1诱导小鼠成牙本质细胞系MDPC-23细胞凋亡

目的:研究转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)是否诱导成牙本质细胞系MDPC23细胞凋亡。方法:培养MDPC23细胞,用不同浓度的TGFβ1刺激培养48h后,分别用3种检测细胞凋亡的方法,包括膜联蛋白V(AnnexinV)和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)双染色法、细胞凋亡的酶联免疫分析法、以及DNA琼脂糖凝胶电泳法,检测MDPC23细胞凋亡情况。结果:TGFβ1能诱导MDPC23细胞凋亡,且呈剂量依赖性。结论:TGFβ1在成牙本质细胞凋亡过程中发挥一定的作用     

Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23中的表达及功能

目的研究Smads蛋白在成牙本质细胞系MDPC-23作为转化生长因子(TGF)β信号分子的作用。方法常规条件下培养MDPC-23细胞,在TGF-β1刺激培养1h后,观察细胞内Smad分子的定位变化。将Smads真核表达载体分别与报告基因载体p3TP-Lux瞬时共转染至MDPC-23,在TGF-β1刺激培养24h后,裂解细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测细胞裂解液中的荧光素酶活性。结果MDPC-23细胞表达Smad2和Smad3蛋白分子,主要定位于细胞质,在TGF-β1刺激1h后,Smad2和Smad3从胞质向胞核转位聚集。TGF-β1可诱导p3TP-Lux基础启动子活性,约增加13倍。过表达野生型Smad3蛋白可促进TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导,但是过表达Smad3突变体抑制TGF-β1对p3TP-Lux启动子活性的诱导。和Smad3作用相比,过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1诱导p3TP-Lux启动子活性无明显影响。结论在成牙本质细胞系MDPC-23内,Smad信号途径存在并参与介导TGF-β1诱导的转录调控。     

Smad8在成牙本质细胞系MDPC-23内BMP-2信号转导中的作用

目的：观察成牙本质细胞系MDPC-23内Smad8蛋白的表达,以及Smad8蛋白在骨形成蛋白-2（bonemorphogenetic protein-2,BMP-2）信号转导中的作用.方法：免疫组化法观察MDPC-23细胞内Smad8蛋白的表达,以及BMP-2和转化生长因子β1（TGF-β1）对MDPC-23细胞内Smad8分子定位的改变.结果：MDPC-23细胞的胞浆和胞核均有Smad8表达,在BMP-2刺激1 h后,Smad8从胞浆向胞核转位聚集.TGF-β1刺激后无类似现象发生.结论：成牙本质细胞系MDPC-23内存在Smad8的表达,且Smad8可特异性地将BMP-2的信号由胞浆转至胞核,但不能转导TGF-β1信号.     

TGF-β1和Smad7在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7在口腔鳞状细胞癌(OSCC)、正常口腔黏膜组织中的表达和意义。方法通过免疫组织化学SP法检测TGF-β1、Smad7在31例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常口腔黏膜组织中的表达,探讨TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌中的表达及相关性因素。结果 TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌中的阳性率高于正常口腔黏膜组织(P<0.05),二者在口腔鳞癌有淋巴结转移组的表达率明显高于无淋巴结转移组的表达率(P<0.05),二者在口腔鳞癌TNM分期为Ⅰ+Ⅱ期中的阳性表达率低于Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率(P<0.05),与患者年龄和性别无关。TGF-β1和Smad7在口腔鳞癌中的表达呈显著正相关(r=0.379,P<0.05)。结论 TGF-β1、Smad7在口腔鳞状细胞癌组织中呈过表达,可能作为判断口腔鳞状细胞癌预后的指标。     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF—β1信号转导中的作用的研究

目的 观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Sad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1信号转导中的作用,探讨Smad2信号途径在TGF-β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制。方法 原代培养人牙乳头细胞,Western blot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF-β1调控下的表达变化,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化。结果培养的人牙乳头细胞表达Ｓmad2蛋白,ＴＧＦ－β１能引起Ｓmad2从蛋白表达水平未见明显的改变。结论 人牙乳头细胞内存在Ｓmad2基因的表达,Ｓmad2能被ＴＧＦ－β１能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集,而BMP-2无此功能;TGF-β或BMP-2刺激作用6h、12h24h和48h,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变。结论 人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达,Smad2能被TGF-β1活化后转位至核内发挥作用,但Smad2基因的表达无明显变化,提示TGF-β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中,Smad2信号途径可能发挥一定的作用。     

转化生长因子β1及Smad7蛋白表达在口腔扁平苔藓上皮细胞中的作用

目的 通过对口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、Smad7蛋白表达和细胞凋亡情况的研究,进一步探讨OLP的发病机制.方法 对17例OLP组织分别应用免疫组化SP法定位检测TGF-β1和Smad7的表达和原位末端转移酶标记法检测细胞凋亡情况.结果 TGF-β1在OLP上皮中呈中等阳性表达,Smad7在OLP上皮中呈强阳性表达,其表达强度均明显高于对照组(P＜0.05);OLP中上皮内细胞凋亡指数[(14.26±2.32)%]明显高于对照组[(6.69±0.63)%],多局限于基底层及基底上层,且TGF-β1表达强度与细胞凋亡呈正相关(r=0.691,P＜0.05).结论 OLP中上皮内TGF-β1、Smad7表达增高提示TGF-β1-Smad信号转导通路调节紊乱,可能促使上皮细胞凋亡异常,从而导致OLP的发生.     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β_1信号转导中作用的研究

目的　观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达 ,以及Smad2蛋白在转化生长因子 β1信号转导中的作用 ,探讨Smad2信号途径在TGF β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制。方法　原代培养人牙乳头细胞 ,Westernblot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF β1调控下的表达变化 ,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化。结果　培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白 ,TGF β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集 ,而BMP 2无此功能 ;TGF β1或BMP 2刺激作用 6h、12h、2 4h和 48h ,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变。结论　人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达 ,Smad2能被TGF β1活化后转位至核内发挥作用 ,但Smad2基因的表达无明显变化 ,提示TGF β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中 ,Smad2信号途径可能发挥一定的作用。     

人牙乳头细胞内Smad2在TGF-β1信号转导中作用的研究

目的观察体外原代培养的人牙乳头细胞内Smad2蛋白的表达,以及Smad2蛋白在转化生长因子-β1信号转导中的作用,探讨Smad2信号途径在TGF-β1调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中的作用机制.方法原代培养人牙乳头细胞,Westernblot杂交方法检测内源性Smad2的表达和TGF-β1调控下的表达变化,用免疫组化方法观察Smad2细胞内定位变化.结果培养的人牙乳头细胞表达Smad2蛋白,TGF-β1能引起Smad2从胞浆转位至核内聚集,而BMP-2无此功能;TGF-β1或BMP-2刺激作用6h、12h、24h和48h,牙乳头细胞内Smad2蛋白表达水平未见明显的改变.结论人牙乳头细胞内存在Smad2基因的表达,Smad2能被TGF-β1活化后转位至核内发挥作用,但Smad2基因的表达无明显变化,提示TGF-β1在调控牙乳头细胞向成牙本质细胞分化的过程中,Smad2信号途径可能发挥一定的作用.     

TGF-β1/Smad3信号途径对牙本质涎磷蛋白基因表达的调控

目的：研究小鼠成牙本质细胞系MDPC-23中TGF-β1及其信号分子Smad3对小鼠牙本质涎磷蛋白（dentinsialophosphoprotein，DSPP）基因表达中的调控作用。方法：PCR法制备DSPP引物、构建带有DSPP启动子片段的萤火虫荧光素酶基因报告载体，通过瞬时转染入MDPC-23细胞后，检测报告基因活性。结果：在TGF-β1的作用下，Smad3可以发生转位表达，由细胞浆转入细胞核内。同时，过表达野生型Smad3可以显著增强TGF-β1对DSPP启动子活性的下调作用。结论：TGF-β1可以通过Smad3信号通路对DSPP启动子进行调控；在DSPP启动子-2525-＋54bp之间，存在TGF-β1／Smad3信号途径的结合位点，从而发挥对DSPP基因的调控作用。     

转化生长因子β1在舌白斑及鳞癌中的表达

探讨转化生长因子 β1(TGF - β1)有无作为舌癌前病变研究和治疗的生物标志物的潜力。方法　采用免疫组织化学技术对舌的癌前病变到舌癌 (2 4例舌白斑和 16例舌鳞状细胞癌 )发生的不同阶段进行了TGF - β1的表达研究。结果　TGF - β1在舌正常粘膜和舌单纯性白斑上皮中均被广泛染色 ,其染色程度和染色范围二者表达一致 ;舌白斑伴有重度异常增生病变和舌癌病变于上皮及癌巢中染色不均匀癌 ,巢上皮染色范围和染色强度均高于或大于舌单纯性白斑病变 ,差异具有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论　正常粘膜与单纯性白斑 ,单纯性白斑与异常增生性白斑 ,舌高分化鳞癌和舌低分化鳞癌之间无差异 (P >0 .0 5 )。     

Smad在牙本质涎磷蛋白基因表达中的作用

目的：研究Smad蛋白在牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)基因表达中的作用。方法：细胞培养,瞬时转染和报告基因检测。结果：转化生长因子β1(transforning growth factor-β1,TGF-β1)抑制DSPP基因启动子活性。过表达野生型Smad3蛋白显著增强了TGF-β1对DSPP基因表达的转录抑制,而过表达Smad3突变型蛋白则显著抑制了TGF-β1对DSPP基因启动子活性的影响。过表达Smad2野生型或突变型蛋白对TGF-β1抑制DSPP基因启动子活性无明显影响。结论：Smad3在介导TGF-b1对DSPP基因的转录调控中发挥重要的作用.     

Smad3基因及其产物与创伤修复

最近的研究表明,修复相关基因Smsd3及其产物对创面愈合非常重要;Smad3基因的失控可能是创面愈合延迟、不愈合或过度愈合(增生瘢痕形成)的真正原因。Smad3蛋白通过介导β转化生长因子(TGF-β)的细胞内信号传递和调节角化细胞及单核细胞的功能,发挥其生物学活性。     

转化生长因子-β-Smad信号通路在腭发育中的作用

腭发育过程的信号调节复杂,转化生长因子(TGF)-β家族在其中起重要作用。TGF-β-Smad通路是TGF-β信号调控的重要途径。下面就TGF-β家族在腭发育中的表达情况、其信号通路TGF-β-Smad的具体途径以及与腭裂发生的关系进行综述。