小鼠胸腺上皮细胞系可自发分泌多种类型细胞因子

本室建成非转化的小鼠胸腺上皮细胞系,命名为MTEC_1。在无外源刺激下,MTEC_1细胞可自发分泌多种类型细胞因子,包括IL-1、IL-6、IL-7、GM-CSF及化学趋化因子(CF)。其中IL-6、GM-CSF及CF为高水平分泌量;IL-1为中度,IL-7为低水平分泌量。MTEC_1细胞不能自发分泌IL-3及TNFα。MTEC_1细胞系的建立,不仅可用于在体外培养中分析胸腺选择的信号需要,且可用于分析自分泌细胞因子间连接产生的网络调节。     

B细胞刺激因子(BSF)和性激素与系统性红斑狼疮(SLE)发病学的关系

1.主要研究成果:(1)活动性SLE的外周血单个核细胞(PBMC)已被活化,主要表现为:淋巴细胞自发增生增高;膜表面IL-2受体和IL-10mRNA自发表达增高;IgG和抗双链(ds)DNA抗体自发增高;IL-2、IL-6、IFN等自发分泌增高。这一工作与文献结论相同,只是我们的指标较为全面。(2)活化PBMC功能发生变化,表现为:对PHA和PWM应答反应明显低下;对组胺诱导的组胺抑制因子的能力显著低下;对核抗原、IL-2、IFN-γ的应答均明显增高。(3)活化PBMC及其细胞核或染色质是强烈的免疫原,能诱发抗ds-DNA抗体及其它核抗体生成。(4)BSF能促进SLE患者     

小鼠胸腺上皮细胞株MTSC_1自发分泌IL-8样因子

MTSC_1是本室建立的一株小鼠胸腺基质细胞,免疫组织化学及电镜鉴定为上皮细胞来源。MTSC_1能自发分泌多种细胞因子,包括IL-1,IL-6,GM-CSP。鉴于IL-1能诱导IL-8产生,我们采用Boyden盲端小室法检测了MTSC_1的培养上清。实验结果表明M-TSC_1培养上清对小鼠外周血白细胞具有强烈的趋化活性,被趋化的细胞主要为多形核白细胞。当培养上清     

粒细胞集落刺激因子对THP-1细胞Toll样受体4 mRNA表达的影响

目的　观察不同浓度不同时间下粒细胞集落刺激因子 (G CSF)刺激后 ,THP 1细胞表达Toll样受体 4mRNA以及细胞因子TNF α的变化。方法　实验采用人THP 1细胞 ,以 5 0、5 0 0及 10 0 0ng/mL的G CSF分别刺激 4和 2 4h ,继而以 10ng/mL内毒素刺激 4 5min。以RT PCR法分析Toll样受体 4 (TLR4 )mRNA水平 ,ELISA法测定细胞因子TNF α。结果　细胞经G CSF刺激后TLR4基因表达增加 ,细胞分泌TNF α上升 ,且随着G CSF刺激浓度的增加 ,TNF α分泌随之增加。刺激 2 4与 4h比较 ,TNF α分泌也有增加。结论　G CSF可刺激THP 1细胞TLR4mRNA表达及TNF α分泌 ,且其增加程度与G CSF刺激浓度及刺激时间呈正性相关     

自泌性白细胞介素6在人脑胶质瘤发病中的作用

目的：探讨原代培养的人脑胶质瘤细胞是否分泌及表达白细胞介素6(Interleukin-6，IL-6)，以及IL-6在人脑胶质瘤发病中的作用。方法：采用手术中直接获得的人脑胶质瘤组织，进行胶质瘤细胞的原代培养，并分别采用四唑盐比色分析法(MTT)及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定人脑胶质瘤细胞中IL-6的分泌及表达；再分别采用IL-6及IL-6单抗处理脑胶质瘤细胞。结果：①原代培养的人脑胶质瘤细胞可自发分泌IL-6，而正常人脑胶质细胞则无IL-6的分泌；②30例人脑胶质瘤标本中有25例表达IL-6基因，且其表达量与脑胶质瘤的恶性程度呈正相关关系；③IL-6能刺激脑胶质瘤细胞的增殖，而IL-6单抗则能抑制脑胶质瘤细胞的增殖。结论：IL-6在人脑胶质瘤中的异常分泌及表达可能是参与和维持脑胶质瘤恶性增殖的原因之一。     

白念珠菌磷脂甘露聚糖对单核细胞产生白介素-6、白介素-8的影响

目的 研究白念珠菌磷脂甘露聚糖( PLM)诱导人急性单核细胞白血病细胞系细胞(THP-1)产生的炎症反应是否依赖Toll样受体(TLR)2.方法 实时荧光定量逆转录PCR分析PLM体外刺激THP-1细胞TLR2、TLR4、前炎症因子[白介素(IL)-6]和趋化因子(IL-8)的mRNA表达水平.酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-8分泌含量.免疫印迹法分析TLR2的蛋白表达.结果 PLM可升高THP-1细胞的IL-6和IL-8 mRNA表达和分泌水平(均P＝0.0000).PLM上调THP-1细胞的TLR2 mRNA和蛋白表达水平(P＝0.0000),但对TLR4 mRNA表达无影响.PLM经β-D-甘露糖苷水解酶处理后,不能诱导上述受体及因子的表达.TLR2中和抗体能抑制PLM诱导的IL-6和IL-8产生(P ＝0.0003,P＝0.0010).结论 白念珠菌胞壁PLM依赖TLP2介导激活人THP-1细胞产生炎症反应.     

异鼠李素对LPS诱导下THP-1细胞炎症因子释放的影响

目的了解异鼠李素对LPS刺激下THP-1细胞炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α释放的影响及其抗炎特征。方法用PI单染色法检测其细胞存活率;用ELISA法检测THP-1细胞炎症因子IL-6、MCP-1、TNF-α释放。结果不同浓度的LPS均能使炎症因子IL-6释放增高,且24 h及48 h间水平无差异,但随着LPS刺激浓度的增高,细胞的坏死数量也会随之升高;不同浓度的异鼠李素能在不同时间点不同程度地抑制炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-6的释放。结论异鼠李素能抑制LPS刺激下THP-1细胞炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1的释放,并呈浓度依赖性。     

IL-1β 或TNF-α 干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2 及Th17/Treg 平衡的影响

目的：探讨IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。方法：子宫蜕 膜细胞经体外分离后,加入10–8 mol/L雌二醇(E2)+10–7 mol/L孕激素(P)培养7 d后,分别给予IL-1β或TNF-α干预24 h,收 集上清液,制备条件培养液。应用条件培养液刺激子宫蜕膜T细胞72 h后,收集上清液,ELISA 法检测上清液IFN-γ, IL-2,IL-17,IL-5,IL-10及TGF-1β的表达。收集子宫蜕膜T细胞,提取RNA,用实时定量PCR检测细胞因子mRNA的 表达。通过T细胞分泌的细胞因子水平来评估子宫蜕膜细胞对Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。结果：IL-1β或TNF-α 干预子宫蜕膜细胞24 h后,其条件培养液能够促使子宫蜕膜T细胞Th1细胞因子IFN-γ分泌增加7~8倍,IL-2分泌增加 6~7倍,Th17细胞因子IL-17分泌增加15~19倍,Th2细胞因子IL-10和IL-5的分泌无差异,Treg细胞因子TGF-1β的分泌无 差异;其条件培养液促使IFN-γ和IL-17 mRNA表达增加,而IL-10及TGF-1β mRNA的表达无差异。结论：IL-1β或TNF-α 刺激的子宫蜕膜细胞改变母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg细胞的平衡,向Th1及Th17偏移。     

聚乙烯颗粒对人单核细胞分泌促炎因子与抗炎因子的影响

[目的]探讨聚乙烯颗粒对人单核细胞分泌促炎因子与抗炎因子的影响.[方法]用Ceridust 3615 颗粒(聚乙烯颗粒)(平均直径14.27,6.39,1.74,1.01,0.54和0.28 μm)分别刺激人单核细胞,颗粒体积与细胞数的比例为100:1和10:1.在颗粒刺激细胞24 h后,运用ELISA检测培养上清液中的促炎因子(白介素-1β,白介素-6和细胞坏死因子α)及抗炎因子(白介素-10)的表达.[结果]Ceridust 3615 颗粒可刺激单核细胞分泌白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和细胞坏死因子α(TNFα),但未能引起白介素-10(IL-10)的表达.颗粒比例增高可促使单核细胞分泌更多的IL-6和TNFα,却减少IL-1β分泌,对IL-10的分泌则无影响.个体差异使巨噬细胞对同种颗粒的刺激产生不同的反应,其差异可达到30倍.[结论]个体差异是影响人工关节寿命的重要因素,聚乙烯颗粒可刺激单核细胞产生炎因子但对产生抗炎因子(IL-10)的作用不明显,提示促炎因子与抗炎因子的不平衡或许是人工关节松动不断进展的另一重要因素.     

肺炎嗜衣原体包涵体膜蛋白Cpn0147诱导单核细胞分泌TNF-α和IL-8

目的　探讨肺炎嗜衣原体（Cpn）包涵体膜蛋白Cpn0147诱导人单核细胞分泌炎症因子的分子机制。方法　用去除内毒素活性的不同浓度Cpn0147重组蛋白（1.0、10.0、30.0和50.0　μg/mL）刺激THP-1细胞0～48　h,ELISA检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-8（IL-8）的分泌水平;实时定量PCR检测TNF-α和IL-8　mRNA的表达;用Toll样受体2（TLR2）和TLR4中和抗体处理THP-1细胞,或采用TLR2和TLR4　siRNA沉默其表达,ELISA检测THP-1处理前后TNF-α和IL-8分泌的变化。结果　Cpn0147可诱导THP-1细胞表达TNF-α和IL-8的mRNA和蛋白;同时,不同时间点Cpn0147对TNF-α和IL-8的诱导水平有所不同,Cpn0147作用2～6　h后即可诱导TNF-α和IL-8分泌,12　h时达到峰值,随后逐渐下降。采用TLR2和TLR4中和抗体封闭THP-1细胞后,TNF-α和IL-8分泌水平明显减少,采用TLR2和TLR4　siRNA干扰其表达后,TNF-α和IL-8的分泌也得到了类似的结果。结论　Cpn0147　可能通过TLR2和TLR4介导TNF-α和IL-8分泌。     

小鼠粒-单系祖细胞体外培养的扫描电镜观察

用液体法培养了小鼠的GFU—GM,并对培养不同时间的集落细胞进行扫描电镜观察。CFU—GM在分化成熟过程中有如下特点:(1)粒系细胞集落细胞表面由粗糙变光滑,主要变化在其表面的微绒毛。(2)单系细胞集落在培养早期成团,细胞表面光滑,4天后变粗糙,形状由规则变成多形性,由大小均匀至大小不一;培养中期有伪足形成.(3)同一集落位于中心的细胞较周边细胞幼稚.同时还发现粒细胞集落基底多存在一个贴壁细胞.     

胆碱能受体激动剂和拮抗剂对体外CFU-GM增殖和分化的影响

用体外琼脂培养法研究胆碱能受体激动剂和拮抗剂对粒、单造血祖细胞(CFU-GM)增殖和分化的影响。结果显示,10~(-10)-10~(-6)氨甲酰胆碱均能增加CFU-GM的产率,阿托品可以阻断这种效应;氨甲酰胆碱亦能增加CFU*GM的自杀率及培养基中粒细胞集落的比例。文中讨论了CFU-GM上胆碱能受体的功能特征。     

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的：观察卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）的定向诱导分化,稳定和优化检测卵黄囊CFU-GM的方法。方法：应用体外琼脂培养法,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒-单系造血祖细胞集落形成单位的影响;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果：植入不同数量的E7.5~8.5 d的卵黄囊干细胞与CFU-GM生成数量之间呈高度正相关;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下,DMEM培养体系生成的CFU-GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数（P<0.01）;马血清（HS）组优于胎牛血清（FBS）组（P<0.01）;与GM-CSF相比,WEHI-3条件培养液（W3-CM）能明显促进卵黄囊CFU-GM的生成（P<0.01）。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒-单系细胞集落。结论：卵黄囊干细胞具有向CFU-GM分化的能力;卵黄囊干细胞CFU-GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU-GM的集落生成率;以DMEM,GM-CSF或W3-CM,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU-GM的集落生成率。     

The murine submandibular gland conditioned medium induce the development of CFU-GM and CFU-meg]

OBJECTIVE: Our purpose is to determine whether murine submandibular gland produce hematopoietic growth factors or not and which hematopoietic growth factor are produced by murine submandibular gland. METHODS: By using the techniques of culture of hematopoietic progenitor cells(CFU-GM, CFU-Meg) ex vivo, flow-cytometry, the effects of murine submandibular gland conditioned medium(SGCM) on the development of CFU-GM and CFU-Meg in mice was studied. RESULTS: SGCM can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg (without any exogeneous HGF), almost no colony in control (without any exogeneous HGF and SGCM); the promoting activity of male SGCM is higher than female SGCM's in augmenting colony formation of CFU-Meg (P < 0.05), there is no difference of CFU-GM(P > 0.05). The stimulating activity of anemic mice SGCM is higher normal mice SGCM's (P < 0.05). IL-3 can collaborate with female SGCM to stimulate proliferation of CFU-Meg. SGCM can promote bone morrow cell entiring the active proliferative phase(S/G2). CONCLUSION: Submandibular gland can stimulate the development of CFU-GM and CFU-Meg by secreting hematopoietic growth factor-like activities. Our study provide the experimental evidences for clarifying the relationship between submandibular gland and hematopoiesis.     

乳腺癌患者的粒系分化异常现象和TGF-β1 的矛盾转换调节作用

目的探讨乳腺癌患者外周血粒系分化异常的主要特点,并体外验证以转化生长因子（TGF-β1）为代表的肿瘤相关因子与 造血干细胞（HSC）粒系分化和乳腺癌血象的关系。方法回顾性对比分析52例乳腺癌患者与47例正常人的外周血粒系血象的 特点。通过小鼠脾脏HSC体外集落形成实验、流式细胞仪技术,分析TGF-β1对集落形成情况和Gr-1+CD11b+粒系细胞比例的 影响,以验证肿瘤关键因子TGF-β1在HSC粒系分化中的作用及与肿瘤血象异常的关系。结果乳腺癌患者白细胞计数、中性 粒细胞计数、粒细胞总数、粒细胞占白细胞比例、中性粒-淋巴细胞比率明显升高（P<0.05）,而嗜酸性粒细胞计数及分类显著降 低（P<0.05）。集落形成实验表明荷瘤小鼠脾细胞的粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、单核-巨噬细 胞集落生成单位显著多于正常小鼠（P<0.05）。加入TGF-β1后荷瘤小鼠脾脏HSC的粒系分化能力受促进。结论乳腺癌患者 存在明显的粒系分化异常,可能与癌组织分泌的TGF-β1等各类生长因子诱导HSC分化失衡有关。TGF-β1对脾脏HSC克隆、 粒系分化的调节存在矛盾转换现象。     

Inducing effects of macrophage stimulating protein on the expansion of early hematopoietic progenitor cells in liquid culture

Background Macrophage stimulating protein （MSP） is produced by human bone marrow endothelial cells. In this study we sought to observe its effects on inducing the expansion of early hematopoietic progenitor cells which were cultured in a liquid culture system in the presence of the combination of stem cell factor （SCF）, interleukin 3 （IL-3）, interleukin 6 （IL-6）, granulocyte macrophage-colony stimulating factor （GM-CSF）, erythropoietin （EPO） （Cys） and MSP or of Cys and bone marrow endothelial cell conditioned medium （EC-CM）. Methods Human bone marrow CD34^＋ cells were separated and cultured in a liquid culture system for 6 days. Granulocyte-macrophage colony forming unit （CFU-GM） and colony forming unit-granulocyte, erythrocyte, macrophage, megakaryocyte （CFU-GEMM） were employed to assay the effects of different treatment on the proliferation of hematopoeitic stem/progenitor cells. The nitroblue tetrazolium （NBT） reductive test and hoechest 33258 staining were employed to reflect the differentiation and apoptosis of the cells respectively. Results MSP inhibited the proliferation of CFU-GM and CFU-GEMM in semi-solid culture and the inhibitory effect on CFU-GEMM was stronger than on CFU-GM. MSP inhibited the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators. Bone marrow （BM） CFU-GEMM was 2.3-fold or 1.7-fold increase or significantly decreased in either Cys＋EC-CM, Cys＋MSP or Cys compared with 0 hour control in liquid culture system after 6 days. Conclusion MSP, a hematopoietic inhibitor, inhibits the differentiation of early hematopoietic progenitor cells induced by hematopoietic stimulators and makes the early hematopoietic progenitor cells expand in a liquid culture system.     

姜黄素对小鼠CFU—GM及WEHI—3B细胞增殖的影响

用体外半固体集落培养方法，观察不同浓度姜黄素对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞及骨髓单核系白血病干细胞增殖的影响。结果显示：姜黄素呈剂量依赖性抑制ＣＦＵ－ＧＭ和ＷＥＨＩ－３Ｂ细胞增殖，其半抑制剂量分别为１．０３６＊１０＾－５ｍｏｌ．Ｌ＾－１和１．２２０＊１０＾－６ｍｏｌ．Ｌ＾－１。表明姜黄素对ＷＥＨＩ－３Ｂ白血病细胞的抑制作用强于对ＣＦＵ－ＧＭ的作用。     

rhIL－3对人骨髓粒单祖细胞集落的影响

应用骨髓细胞体外培养技术，观察了国产重组人白细胞介素３（ｒｈＩＬ－３）对人骨髓粒单祖细胞集落的影响。结果显示，ｒｈＩＬ－３能刺激正常骨髓细胞形成由粒细胞或（和）单核细胞构成的细胞集落，这种效应在一定范围内与ｒｈＩＬ－３剂量呈依赖关系。     

Effects of different subtypes of histamine receptors on proliferation and differentiation of murine colony forming unit granulocyte-macrophage and colony forming unit megakaryocyte.

Ｅｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｓｕｂｔｙｐｅｓｏｆｈｉｓｔａｍｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｕｒｉｎｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅａｎ...