苏木醇提取物治疗实验性重症肌无力小鼠的临床疗效及对其T淋巴细胞功能的影响

目的 采用中药苏木醇提取物治疗实验性重症肌无力（EAMG）小鼠,观察其临床疗效及T淋巴细胞功能变化,探讨其防治重症肌无力的作用机制.方法 采用乙酰胆碱受体（AChR）加等量福氏佐剂多次免疫小鼠,复制EAMG小鼠模型,EAMG治疗组小鼠胃内注入苏木醇提取物,其余对照组给予等量0.9%氯化钠溶液,观察治疗前、后小鼠体重及临床症状变化,并于治疗30 d后处死小鼠,检测其T淋巴细胞功能.结果 EAMG治疗组小鼠体重较治疗前显著增加,临床症状明显缓解（P＜0.05）;T淋巴细胞增殖反应受到明显抑制,与EAMG对照组间差别有显著性意义（P＜0.05）.结论 苏木能明显缓解重症肌无力症状,促进神经功能恢复,部分机制是通过下调T淋巴细胞功能,从而抑制N2AchR抗原诱导的特异性免疫反应而起到治疗作用.     

鼻腔给予乙酰胆碱受体治疗实验性自身免疫性重症肌无力

实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)是由乙酰胆碱受体(AChR)加弗氏完全佐剂(CFA)免疫动物后制成的人类重症肌无力(MG)动物模型。业已证明EAMG和MG都是针对神经肌肉接头后膜烟碱型AChR的自身免疫性疾病,AChR抗体的产生受AChR特异性CD4~+T辅助细胞调节。 MG临床上至今尚无特异性治疗方法。     

实验性重症肌无力大鼠模型的研究

目的 从丁氏双鳍电鳐的电器官分离乙酰胆碱受体(AChR)免疫大鼠,建立实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型.方法 参照徐氏法从丁氏双鳍电鳐的电器官提取AChR蛋白,并采用Folin-酚试剂法及酶联免疫吸附法检测提取蛋白的含量及活性;以提取的蛋白主动免疫Lewis大鼠,每天观察其临床表现,并于免疫后7周进行低频重复电刺激、单纤维肌电图及血清中AChRAb水平的检测.结果 提取蛋白的含量为35.4 mg/mL,AChR提取物可以与阳性血清中的AChRAb发生结合反应.免疫后1周左右,实验组有3只大鼠出现轻度的肌无力症状,持续2～5d自行缓解;免疫后5周左右实验组8只大鼠均表现出不同程度的肌无力症状.实验组大鼠低频重复电刺激阳性率达75%,其衰减率明显高于对照组.实验组大鼠单肌纤维动作电位平均连续差(MCD)值与正常对照组比较明显延长(P＜0.01),而福氏完全佐剂(CFA)对照组与正常对照组间MCD值无明显差异.实验组大鼠AChRAb水平明显高于CFA对照组(P＜0.01);实验组7只大鼠AChRAb的P/N值＞2.1,而CFA对照组P/N值均＜1.4.结论 从丁氏双鳍电鳐的电器官提取的AChR蛋白成功地诱导EAMG动物模型,可为重症肌无力进一步研究创造条件.     

转染TGF-β1基因的树突状细胞对重症肌无力大鼠T细胞IFN-γ和NO分泌的调节

目的：探讨TGF—β1基因转染的树突状细胞（TGF—β1-DC）对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠T细胞IFN-γ和NO分泌的调节作用．方法：近交系、8～10wk龄、雌性Lewis大鼠25只,随机分为5组：正常组、EAMG组、DC对照组、TGF—β1-DC治疗组、生理盐水治疗对照组．除正常组外,其余各组均采用丁氏双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体蛋白二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型．初次免疫后第5日分别皮下注射2×10^6的DC,TGF—β1-DC及等体积的生理盐水,EAMG组不接受任何治疗．初次免疫后7wk,分离脾脏T细胞体外培养48h后分别应用ELISA和化学方法检测T细胞IFN-γ和NO的分泌水平．结果：正常大鼠T细胞体外培养48h后,其上清液中IFN-γ的含量很少,而EAMG组大鼠T细胞培养上清液中IFN-γ的含量显著增加（P〈0．01）．TGF—β1-DC治疗组、DC对照组、生理盐水对照组IFN-γ的含量与EAMG组比较均无统计学差异;正常大鼠T细胞体外培养的上清液中NO的含量很少,EAMG组大鼠T细胞培养上清液中NO的含量明显增加（P〈0．01）．TGF—β1-DC治疗组NO的含量较EAMG组明显增加（P〈0．05）,DC对照组、生理盐水对照组与EAMG组比较无统计学差异．结论：调节EAMG大鼠体内IFN-γ和NO的分泌可能是TGF—β1-DC的治疗机制之一．     

实验性自身免疫性重症肌无力小鼠免疫功能状态的研究

目的：探讨实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）模型小鼠免疫应答特点。方法：根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,检测其免疫功能状态的改变,包括血清中乙酰胆碱受体抗体（AchRab）的水平,脾脏CD4^＋T细胞数量,用淋巴细胞增殖试验检测脾细胞经刀豆蛋白A（ConA）活化的非特异增殖能力,检测脾脏T细胞因子白细胞介素4（IL-4）,干扰素γ（IFN-γ）分泌水平。并与弗氏佐剂（CFA）对照组及正常对照组进行比较。结果：与未成模组、弗氏佐剂对照组及正常对照组相比,成模组小鼠AchRab显著增高,脾脏CD4^＋T细胞数升高;外周脾细胞对ConA刺激的非特异性增殖能力显著升高;脾脏T细胞细胞因子IL-4,IFN-γ显著升高,（均P〈0.01）,IFN-γ升高的程度高于IL-4（P〈0.01）。结论：EAMG发生是一个自身免疫应答参与的过程,体液免疫、细胞免疫应答参与了EAMG的发生。     

一氧化氮供体对自身免疫性重症肌无力大鼠的作用

最新研究表明,对细胞免疫介导的实验性自身免疫性脑脊髓膜炎动物模型给予一氧化氮(NO)供体取得了肯定疗效。但NO供体对抗体介导的实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用迄今报道较少,我们在乙酰胆碱受体(AChR)致敏大鼠的同时,给予NO供体3-吗啉-斯德酮亚胺(SIN-1),研究其对EAMG大鼠的作用及机制。     

炙马钱子对自身免疫性重症肌无力大鼠免疫调节机制研究

目的：探讨炙马钱子对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠的免疫调节机理。方法：采用鼠源乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段方法免疫Lewis大鼠建立实验性重症肌无力模型，观察实验大鼠的临床表现，并将建模成功的EAMG大鼠随机分为模型组，强的松组，炙马钱子低剂量、中剂量和高剂量组，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测正常对照组和成模各组大鼠血清中体液免疫指标AChRab与细胞免疫指标IL-6的含量情况并比较各组之间的差异。结果：大鼠EAMG模型组血清中AChRab和IL-6含量相比正常组显著升高（P＜0.01），药物干预后各组含量都有所下降。炙马钱子高剂量组AChRab含量比中、低剂量组下降更显著（P＜0.01），与强的松组比无显著差异（P＞0.05）；炙马钱子各剂量组IL-6含量均低于强的松组，特别是中、高剂量组更明显低于强的松组，差异有统计学意义（P＜0.01）；炙马钱子中、高剂量组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：炙马钱子能降低EAMG大鼠血清中AChRab和IL-6含量，抑制T、B细胞活化，减轻对突触后膜AchR的损害，缓解EAMG病情，一定剂量范围内的炙马钱子在免疫调节方面表现优于强的松。     

CTLA4-Ig改善EAMG大鼠脑功能障碍的分子机制研究

目的：探讨CTLA4-Ig对实验性自身免疫性重症肌无力（experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）大鼠脑功能障碍的改善作用及可能涉及的分子机制。方法：采用乙酰胆碱受体（acetylcholinereceptor,AChR） α97-116肽免疫35只Lewis大鼠制作EAMG大鼠模型,然后用地塞米松和CTLA4-Ig处理大鼠。ELISA法检测血清AChR IgG和AChR IgG2b水平及后肢肌AChR含量;Lennon临床评分评价各组大鼠临床症状;避暗实验观察大鼠空间学习记忆的变化;紫外分光法测海马丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、Caspases-3、Caspases-9和Caspases-12活性;RT-PCR测海马Caspases-3、Caspases-9、Caspases-12及Trx-1 mRNA表达;Western-blot测海马Trx-1蛋白表达。结果：模型成功率为85.7%,与正常对照组比较,EAMG大鼠模型组Lennon临床评分显著...     

实验性重症肌无力小鼠模型的研究

目的:采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors, AChR)免疫小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)动物模型.方法:以亲和层析法从电鳐电器官提取和纯化AChR,并用其免疫接种BALB/C和C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状、电生理变化以及血清AChR抗体水平的情况.结果:与对照小鼠相比,发病小鼠出现临床肌无力症状,重复神经电刺激(repetitive nerve stimulation, RNS)显示动作电位波幅衰减,血清AChR抗体水平升高.结论:用电鳐电器官提纯TAChR作为免疫原,成功诱导产生EAMG小鼠模型,C57BL/6小鼠较BALB/C小鼠易感.     

探讨补脾强力复方干预亚甲减合并实验性自身免疫性重症肌无力大鼠下丘脑-垂体-甲状腺-胸腺轴功能损伤机制研究

目的 探讨补脾强力复方对亚甲减合并实验性自身免疫性重症肌无力（experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG）大鼠下丘脑-垂体-甲状腺-胸腺（HPTT）轴功能的修复作用,为补脾强力复方从神经-内分泌-免疫角度治疗重症肌无力及其共病寻找理论依据。方法 实验通过甲巯咪唑灌胃45 d及含鼠源性AchRsα亚基97-116肽段序列（R97-116）免疫乳剂皮下注射建立合并亚甲减的EAMG大鼠模型,随机分为模型组（M组）、泼尼松组（P组）、补脾强力复方低剂量组（LBD组）、补脾强力复方中剂量组（MBD组）、补脾强力复方高剂量组（HBD组）,加上正常大鼠作为对照组（C组）。C组和M组灌胃等量0.9%氯化钠溶液,其余各组大鼠给予相应药物28 d,同时进行行为学观察后分别处死取血,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清AchR-Ab、促甲状腺激素（TSH）、促甲状腺激素释放激素（TRH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、游离甲状腺素（fT4）含量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-4(IL...     

Familial autoimmune myasthenia gravis

Familial Autoimmune Myasthenia Gravis (FAMG) is rarely reported. We present a mother and son with late-onset mild to moderate ocular disease, low acetylcholine receptor antibody titre and the absence of a thymoma. Both responded well to low doses of anticholinesterase. HLA typing revealed that they did not share the usual HLA antigens or haplotypes with that previously reported in Caucasian and Chinese sporadic Myasthenia Gravis. Chinese FAMG may be associated with HLA antigens different from that of sporadic MG.     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

张怀亮教授六法辨治重症肌无力临床经验

张怀亮教授认为重症肌无力具有多病因、多病机、病势缠绵、胶着难愈的特点。病因方面,多由先天禀赋异常,后天不知养慎,或七情太过,或劳逸不节,或感触外邪,失治误治,导致元气匮乏,脏腑气机紊乱而形成。病机方面,本病的形成与演变和脾肾虚衰有着密切的关系。张教授治疗重症肌无力以调补脾肾为主,兼顾疏利肝胆气机,根据不同病因病机,创制六种治法,分别为甘温益气法、化湿健脾法、培土疏肝法、泻南补北法、益火燠土法、转运枢机法,临床疗效显著。     

抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7诱导实验性重症肌无力

目的:探讨抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7(Anti-AChR mAbA7)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用.方法:Lewis大鼠腹腔注射5ml 20倍浓缩的含Anti-AChR mAbA7培养上清液,建立EAMG被动转移模型.对照组腹腔注射同体积的PBS.每8 h监测体重和临床症状评分.48h后处死实验动物.用放射免疫法检测AChR,并计算出AChR的损失率.结果:Anti-AChR mAbA7诱导的EAMG模型AChR损失率高,为24.3%～45.2%.而且AChR损失率与临床症状评分相关(r=0.74,P＜0.01).Anti-AChR mAbA7攻击的位点在终板的AChR上.结论:Anti-AChR mAb A7可用作诱导EAMG模型而应用于重症肌无力的研究.     

眼肌型重症肌无力的治疗进展

眼肌型重症肌无力引起上睑下垂和(或)复视等临床症状,影响患者的日常生活和工作。它被认为是一种轻型的疾病,但临床上约有一半的眼肌型患者肌电图表现为全身神经肌肉功能紊乱,且44%~53%的眼肌型患者有可能进展为全身型的重症肌无力。有资料证实应用免疫抑制疗法减少了眼肌型患者进展成全身型的频率。在权衡免疫抑制疗法的利弊后可根据患者的情况制定个体化的治疗方案。     

重症肌无力相关细胞因子研究

重症肌无力及其动物模型——实验性自身免疫性重症肌无力是一种抗体介导,具有细胞免疫依赖的,神经肌肉接头处信号传递障碍的自身免疫性疾病。细胞因子通过复杂的机制参与重症肌无力发病与进展。撰文综述了与重症肌无力有关的几类细胞因子(干扰素、白细胞介素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、粒-巨细胞集落刺激因子),并对近年来基于细胞因子和细胞因子传导通路治疗重症肌无力的临床、实验研究进行探讨。     

重症肌无力肌群耐力评分量表信度效度评价

目的评价重症肌无力肌群耐力评分量表（Myasthenia Gravis muscular endurance scale,MGMES）在中国重症肌无力（myasthenia gravis,MG）患者中的信度与效度。 方法选取MG患者60例,固定由2~3名MG专科医师,应用重症肌无力定量评分(Quantitative Myasthenia Gravis Score,QMGS)、重症肌无力复合量表(Myasthenia GravisComposite,MGC)、重症肌无力绝对和相对评分法(Absolute and Relative Score of MG,ARS-MG)和MGMES进行检查评分。量表内部一致性通过Cronbach′s α系数进行评价,量表重测信度通过组内相关系数(intraclass correlation efficient,ICC)进行评价,量表结构效度通过KMO(Kaiser-Meyer-Olkin)检验、Bartlett球型检验和因子分析法进行评价;校标关联效度和量表之间的相关性通过Spearman相关系数进行评价。 结果MGMES具有良好的内部一致性(Cronbach′s α为0.854)和重测信度(ICC为0.987,P<0.01)。有4项公因子,累积方差贡献率69.51％,结构效度良好。与QMGS高度相关（r=0.806,P＜0.01）,与MGC、ARS-MG中度相关(r=0.745、0.675,P<0.01)。 结论MGMES具有良好的信度和效度,能够较全面、准确体现MG的严重程度,可以进一步在临床应用中推广。     

Suppression of experimental autoimmune myasthenia gravis by nasal administration of acetylcholine receptor

Experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) is a well established animal model, which can be induced in various animal species and strains with acetylcholine receptor (AChR) and represents an experimental counterpart of human myasthenia gravis (MG). Current im-munotherapies to both EAMG and MG are non specific and limited by their toxicity. Recently, toler-ance to EAMG has been achieved by oral administration of milligram quantities of Torpedo AChR. In the present report we demonstrate that nasal administration of microgram doses of Torpedo AChR to female Lewis rats prior to immunization with Torpedo AChR and complete Freund's adjuvant resulted in the prevention of subsequently induced EAMG, the suppression of serum anti - AChR antibody levels, the decrease of delayed -type hyersensitjvity responses to AChR, as well as the suppression of AChR -specific IgG secreting cells, AChR -reactive IFN -r secreting cells and T cell proliferation in peripheral lymphoid organs, particularly in popliteal and ing     

小剂量阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的治疗作用

目的 探究阿托伐他汀对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫调节机制。方法 用人工合成的大鼠乙酰胆碱受体α亚基97-116肽段免疫Lewis大鼠制造重症肌无力(MG)模型,随机分为阿托伐他汀治疗组和对照组,采用Lennon评分标准评价大鼠病情, 采用双盲法隔天评估大鼠肌力并记录体质量;免疫组化检测大鼠胸腺抑制性转录调节因子Foxp3的表达,以此反映调节性T细胞(Treg)的数量;CCK-8检测淋巴结单个核细胞增殖;ELISA检测细胞培养上清液IL-4及血清抗R97-116抗体的水平。结果 阿托伐他汀治疗组大鼠临床症状较对照组明显缓解,胸腺Foxp3的表达及细胞培养上清液IL-4的水平均高于对照组,血清抗R97-116抗体水平低于对照组。结论 阿托伐他汀通过上调Treg和Th2型细胞因子IL-4的水平,从而降低血清中抗R97-116抗体水平,缓解EAMG病情。     

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的　采用双类似物 (Lys2 6 2 Ala2 0 7)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药 ,观察临床发病变化 ,并评价疗效 ,探讨其控制EAMG临床发病作用机制。方法　应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型 ,并在致敏前 10天 (A组 )及致敏当日 (B组 )鼻腔给药。观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化。结果　①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组 ,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组 ,P均 <0 .0 5 ;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组 ,P均 <0 .0 5。结论　Lys2 6 2 Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病 ,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据。