丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响.方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,经不同浓度丹参酮ⅡA作用后,用MTT法检测细胞增值;流式细胞仪及Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学SP法及灰度测定表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达;放射免疫法检测EGF含量.结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,以0.5 μg/ml作用终浓度抑制效果最明显,其48 h的抑制率为72.5%,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测显示:0.5 μg/ml丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达高峰,随后逐渐下降[24 h,48 h,72 h凋亡率分别为(4.06±0.27)%、(7.58±0.56)%、(5.23±0.13)%],与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P<0.01);Hoechst33342染色可见凋亡细胞皱缩,核染色质浓缩,核碎裂,亦可见典型的凋亡小体;免疫细胞化学SP法显示:随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,EGF及EGFR表达下调,其0.5 μg/ml组48 h的高表达率分别为10%,20%,灰度值分别为181.52±1.63,179.37±1.59,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);放射免疫法显示:丹参酮ⅡA作用组细胞培养上清液中EGF含量明显下降.结论:丹参酮ⅡA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内EGF及EGFR表达下调有关.     

性激素与促性腺激素对卵巢癌SKOV3细胞体外生长调控及其机制的研究

目的性激素和促性腺激素对卵巢癌的影响一直存在争议,文中研究性激素和促性腺激素对卵巢癌细胞株的体外生长的调控,并探讨可能机制,为进一步的临床研究提供理论依据。方法将不同浓度雌激素、孕激素、人绒毛促性腺生长激素(human chorionic gonadotropin,hCG)作用于卵巢癌细胞株SKOV3,利用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色法检测细胞在24、48、72h的增殖情况,流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率及细胞周期的改变,实时荧光定量PCR检测用药前后各组细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Bcl-2、Bax mRNA的表达量。结果孕激素和浓度为10-4mol/L的雌激素抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,作用细胞72h其EGFR、Bcl-2 mRNA表达量显著下调;10-4mol/L的雌激素作用72 h后细胞周期分布以S期为主,孕激素作用72 h后大量细胞阻滞在G0/G1期;hCG和浓度小于10-6mol/L的雌激素促进细胞增殖,作用细胞72 h其EGFR、Bcl-2 mRNA表达量均上调显著,细胞周期分布G2/M期增多。结论孕激素和高浓度的雌激素能抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过将细胞分别阻滞于G0/G1、S期,下调EGFR和Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的。HCG和低浓度的雌激素能刺激卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过上调EGFR和Bcl-2的表达而抑制细胞凋亡来实现的。     

EGF诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化实验

目的 利用表皮生长因子 (EGF) 及表皮生长因子受体 (EGFR) 抑制剂西妥昔单抗 (Cetuximab) 诱导和阻断诱导结肠腺癌HCT-116细胞神经内分泌分化 (NED) , 探讨诱导和阻断诱导后肿瘤细胞生物学变化特点及相关因素.方法 通过HE和免疫组化染色, 观察肿瘤细胞裸鼠种植成瘤后及NED诱导前后肿瘤细胞形态变化特点和免疫组化表达情况;低密度平板克隆实验检测肿瘤细胞克隆形成率;流式细胞术检测肿瘤细胞生长周期;MTT法绘制肿瘤细胞生长曲线.结果 结肠腺癌HCT-116裸鼠种植后成肿瘤细胞明显异型;经EGF及EGFR作用前后HCT-11肿瘤细胞形态无明显变化;EGF组克隆形成率增加 (P>0.05) , 肿瘤细胞Cg A、Ki-67、Bcl-2表达增强, 增殖活性增高, EGF作用后肿瘤细胞与其它各组相比差异有显著统计学意义 (P<0.01) .而CEA、CA19-9、CDX2、COX2、Syn、NSE在各组表达差异无统计学意义 (P>0.05) .结论 EGF可诱导结肠腺癌细胞HCT-116 NED;肿瘤细胞增殖活性增加、抗凋亡能力增强;EGFR可阻断EGF诱导HCT-116 NED及相应生物学特性变化;而CEA、CA19-9、CDX2、COX2对肿瘤细胞NED和增殖凋亡无明显调节作用.     

Mfn2基因过表达对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及EGFR、EGF蛋白表达的影响

目的 通过使人乳腺癌MCF-7细胞过表达线粒体融合素基因-2(Mfn2),研究外源性Mfn2基因对MCF-7细胞增殖及对表皮生长因子受体(EGFR)、表皮生长因子(EGF)蛋白表达的影响.方法 实验分为对照组、转染空质粒pEGFP-N1组、转染Mfn2质粒的pEGFP-Mfn2组.转染48 h后,检测各组细胞的转染效率、Mfn2mRNA及Mfn2蛋白表达.检测各组MCF-7细胞增殖情况、各组MCF-7细胞周期分布情况.同时检测各组EGFR及EGF蛋白表达情况.结果 转染48 h后pEGFP-N1组及pEGFP-Mfn2组转染效率分别为(49.15±2.04)％及(51.10±2.18)％,高于对照组[(0.58±0.21)％,P＜0.05];pEGFP-Mfn2组的Mfn2 mRNA及Mfn2蛋白表达均显著高于对照组及pEGFP-N1组(P＜0.05);pEGFP-Mfn2组MCF-7细胞增殖抑制率显著高于其余两组(P＜0.05),细胞周期主要阻滞于G0/G1期;pEGFP-Mfn2组EGFR和EGF蛋白表达水平显著低于其余两组(P＜0.05).结论 Mfn2基因过表达可显著抑制MCF-7细胞增殖,其机制可能与Mfn2基因过表达导致了EGFR及EGF表达下调有关.     

EGF 对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论 :EGF诱导ODC基因表达可能是其促进前列腺细胞增殖的分子机制之一     

表皮生长因子受体单抗诱导人肺癌SPC A1细胞凋亡

目的观察表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体是否可诱导人肺癌SPCA1细胞凋亡,以进一步说明EGFR单抗所具有的抗肿瘤作用。方法以不同浓度的EGFR单克隆抗体干预培养人肺腺癌SPCA1细胞株72h,收集癌细胞并提取DNA,采用凝胶电泳法和流式细胞仪分析细胞凋亡现象。结果凝胶电泳显示,单抗浓度为1.0μmol/L时,可见明显的凋亡梯状条带出现。流式细胞仪分析发现,在EGFR单抗干预培养的各SPCA1细胞样本存在低荧光的亚G1细胞群,而在空白对照和正常非相关IgG对照样本均未见低荧光细胞群存在。结论表皮生长因子受体单克隆抗体可诱导人肺癌SPCA1细胞出现凋亡。     

AAV-HGFK1抑制EGFR磷酸化拮抗大肠癌细胞生长

目的：研究腺相关病毒‐肝细胞生长因子K1（AAV‐HGFK1）对KRAS、BRAF野生型和突变型大肠癌细胞株的生长影响。方法选择人源的细胞株 KRAS和BRAF野生的SW48,KRAS突变的 Lovo ,KRAS突变且不表达表皮生长因子受体（EGFR）的SW620,BRAF突变的HT29,实时荧光定量PCR（RT‐PCR）测定EGFR基因转录水平,分别用5×104 vg/细胞的腺相关病毒（AAV）感染以上细胞株,荧光显微镜和流式细胞仪测定AAV‐EGFP感染率。加入或不加表皮生长因子（EGF）的情况下,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EGFR、磷酸化EGFR（p‐EGFR）和β‐actin ,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测细胞增殖。结果Lovo和 HT29高表达EGFR ,而SW48表达EGFR较低,加入EGF促进了以上3种细胞的 EGFR磷酸化,AAV‐HGFK1抑制EGFR磷酸化,从而显著降低其增殖。EGF对SW620增殖无显著影响,但AAV‐HGFK1感染抑制了胎牛血清培养的SW620细胞。结论 AAV‐HGFK1可能直接作用于EGFR ,抑制其磷酸化从而阻断EGF促进细胞增殖,并可能通过其他通路对KRAS或BRA F基因野生或突变的大肠癌细胞都有抑制作用。     

大黄素对人肺肿瘤细胞(H522)增殖与凋亡的效应及作用机制

目的 探讨大黄素(Emodin)对人非小细胞肺肿瘤细胞(H522)增殖与凋亡效应及作用机制.方法 用不同浓度(0、5、20、100μmol/L)的大黄素处理H522细胞24 h、48 h与72 h,用CCK-8法检测大黄素对H522细胞增殖的影响,用流式细胞术检测大黄素对H522细胞凋亡及其细胞周期的影响,用荧光染色检...     

高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠表皮干细胞增殖的影响.方法 利用Ⅳ型胶原的快速黏附法分离培养小鼠表皮干细胞,观察其形态学;通过免疫荧光法检测表皮干细胞标志物β1整合素和K19来鉴定表皮干细胞;将小鼠表皮干细胞分别放在葡萄糖浓度为5.6、15和30mmol/L的培养基里培养;MTT法检测细胞增殖情况,免疫印迹法检测细胞凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平.结果 体外培养的小鼠表皮干细胞呈克隆样生长,增殖速度较快,细胞形态呈铺路石样,边缘细胞呈梭形,细胞核质比较大;免疫荧光法检测到培养的小鼠表皮干细胞β1整合素和K19呈阳性表达且阳性表达率均为100％;MTT法检测到与对照组（5.6mmol/L浓度葡萄糖）相比,15mmol/L浓度葡萄糖刺激72h后检测到细胞增殖速度无明显改变,而30mmol/L浓度葡萄糖刺激24、48和72h后检测到细胞增殖速度降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blot法检测到与对照组相比,30mmol/L浓度葡萄糖刺激48h后凋亡蛋白Bax的蛋白表达量明显增加而抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）.结论 本研究结果表明较高浓度（30mmol/L）葡萄糖可以明显抑制小鼠表皮干细胞的增殖,从干细胞角度进一步为糖尿病创面难愈的原因提供了实验室依据.     

鼻咽癌CNE-2细胞株胰岛素样生长因子-1受体和表皮生长因子受体沉默的放疗增敏机理

目的:评价RNA干扰(RNAi)同时沉默胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和表皮生长因子受体(EG-FR)后生物学特性变化及对鼻咽癌CNE2细胞株放疗敏感性的改变。方法:构建荧光标记的靶向IGF-1R及EGFR信使RNA真核表达质粒,质粒转染鼻咽癌CNE2细胞株,共聚焦显微镜观察细胞转染结果,行平板克隆实验检测细胞存活分数;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western-blot法检测细胞周期相关蛋白cdk4/6,cyclin D1和c-myc。结果:成功构建真核表达质粒;siRNA-IGF-1R和EGFR组的细胞存活分数显著降低(P<0.05),与对照组相比,凋亡率显著增高(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增多,而S期和G2/M期细胞比例明显减少,细胞周期相关蛋白cdk4/6,cyclin D1和c-myc蛋白表达降低(P<0.05)。结论:RNA同时干扰沉默IGF-1R和EGFR可以引起鼻咽癌细胞周期蛋白表达降低,细胞周期阻滞,促进细胞凋亡。     

Effect and Mechanism of Epidermal Growth Factor on Proliferation of GL15 Gliomas Cell Line

The effects of epidermal growth factor (EGF) on proliferation of G15 glioma cells and the possible mechanisms were investigated. GFAP and EGFR expression was detected by immunohisto-chemical method. After the cells were treated with EGF at different concentrations, cell count method was used to determine the proliferation of glioma cells, cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry (FCM), and laser scan confocal microscope (LSCM) was used to measure the cyto-plasmic free calcium. The results showed that GFAP was diffusedly expressed in GL15 cells and EGFR was over-expressed. EGF at doses of≤1 ng/mL could significantly stimulate cell proliferation, cells in phase G0/G1 decreased, and those in phase S increased. EGF at doses of 10 and 100ng/ml could inhibit the cell proliferation significantly, and the apoptosis ratio in high dose of EGF group was higher than in control group. EGF could significantly induce a quick rise of intracellular free calcium, but the peak value of intracellular free calcium activated by high dose of EGF was higher than by low dose of EGF. It was suggested that EGF had a dual effect on gliomas: low dose of EGF could stimulate the cell proliferation of gliomas, but high dose of EGF could induce the cell apoptosis and inhibit the proliferation of gliomas, which might be contributed to the difference of intracellular free calcium.     

缬沙坦对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞活性损伤的干预作用

目的 探讨缬沙坦对高糖诱导的大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响与机制.方法 利用高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1损伤,并给予不同浓度的缬沙坦.Western blot检测增殖凋亡相关蛋白细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(...     

氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用

目的 探讨氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用及其机制。方法 不同浓度的氯化两面针碱作用于GH3细胞,培养不同时间后分别检测其作用效果:CCK-8检测各组GH3细胞存活率;Annexin V/PI凋亡试剂盒染色后,采用流式细胞术检测各组GH3细胞凋亡率;PI染色后采用流式细胞术进行细胞周期分析;实时定量PCR检测凋亡相关基因Bax、 Bcl-2,以及细胞周期相关基因Cyclin B1、CDK1、p21和p27的mRNA表达水平;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Cyclin B1和CDK1蛋白,以及丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路蛋白的表达水平。结果 氯化两面针碱可抑制GH3细胞增殖,促进GH3细胞凋亡及细胞周期阻滞于G2/M期;氯化两面针碱能够抑制AKT及ERK信号通路的激活。结论 氯化两面针碱有效抑制垂体腺瘤GH3细胞的增殖和促进其凋亡,可作为有效治疗垂体腺瘤的潜在药物。     

去氢木香内酯对人肝星状细胞增殖及凋亡的影响研究

目的 探讨去氢木香内酯(Dehy)对人肝星状LX-2细胞增殖及凋亡的影响,分析其可能的作用机制.方法 人肝星状LX-2细胞经不同浓度Dehy处理后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术检测LX-2细胞增殖和周期分布,Hoechst 33342染色法及AV-PI双染法检测LX-2细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白的表达.结果 给予不同浓度的Dehy作用48 h后,能够明显抑制LX-2细胞的增殖,阻滞细胞周期于S、G2/M期,同时诱导LX-2细胞的凋亡,呈浓度依赖性;Western blot结果显示,Dehy可促进P27、Bax的表达上调,Bcl-2的表达下调.结论 Dehy通过调节Bax、Bcl-2和P27的表达诱导人肝星状LX-2细胞的凋亡和周期的阻滞.     

奥曲肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的：观察不同浓度的奥曲肽(octreotide)单药或联合氟尿嘧啶(Fu)对人胃癌细胞SGC-7901生长的影响及能否阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡；同时探讨其对P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法：分别或联合应用奥曲肽或Fu作用于SGC-7901细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察细胞生长抑制，应用流式细胞技术检测细胞周期、凋亡及P-gp的表达。结果：奥曲肽可抑制SGC-7901细胞生长，其抑制作用呈浓度和时间依赖性，并具有饱和性；各浓度组奥曲肽均未引起细胞周期阻滞和凋亡；联合用药产生拮抗作用；奥曲肽能显著下调SGC-7901细胞P-gp的表达。结论：奥曲肽可能通过非凋亡途径抑制SGC-7901细胞增殖，由于拮抗作用因而不主张与Fu合用，奥曲肽有可能通过下调肿瘤细胞P-gp的表达而逆转耐药。     

表皮生长因子增强大肠癌细胞Caco-2对5-FU的敏感性

目的 通过观察表皮生长因子(EGF)与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合使用对大肠癌细胞Caco-2的作用效果,进一步研究EGF潜在的抗肿瘤特性.方法 通过MTT比色法检测EGF、5-FU及其联合使用对肿瘤细胞生长的影响,同时Western blot检测EGF对肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,以及流式细胞周期检测分析其对细胞周期变化的影响. 结果 EGF能够诱导肿瘤细胞增殖,随着其浓度的升高,G0期细胞明显减少,PCNA表达明显增加,100 ng/mL和1 000 ng/mL组与对照组比较差异具有统计学意义(均P＜0.05),并且联合治疗组对肿瘤细胞的抑制率明显高于单独使用5-FU组(P＜0.05).结论 EGF与5-FU联合使用增加了化疗敏感性,可能与其诱导静止期细胞增殖有关.     

JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响

目的 研究JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响。方法 不同浓度JS-K 处理 HCT116 细胞48 h 后,采用MTS 法检测JS-K 对HCT116 细胞增殖活性的影响;PI 单染流式细胞术检测 JS-K 对HCT116 细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测JS-K 对HCT116 细胞凋亡的 影响;Texas Red-X 鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架形态;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2 家族基 因mRNA 表达。结果 JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P <0.05）。 JS-K 诱导HCT116 细胞被阻滞在G2/M 期（P <0.05）。JS-K 可致HCT116 细胞发生晚期凋亡（P <0.05）。 JS-K 可改变HCT116 细胞骨架形态、微丝结构与分布。随着JS-K 浓度增加,促凋亡基因Bax、Bik、Bim、 Puma mRNA 相对表达量上调,抗凋亡基因Mcl-1 mRNA 相对表达量下调（P <0.05）。结论 JS-K 对人结肠 癌HCT116 细胞增殖有明显抑制作用,通过调节Bcl-2 家族基因表达,阻滞细胞G2/M 期,促进细胞发生晚 期凋亡。     

微小RNA-134-5p靶向作用于EGFR对卵巢癌SKOV3和A2780细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-134-5p(miR-134-5p)靶向作用于表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌细胞生长的影响.方法 以卵巢癌细胞系SKOV3和A2780为研究对象,根据处理方法分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-134-5p).采用qRT-PCR和Western blot检测EGFR基因及下游靶蛋白的表达量;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测卵巢癌细胞增殖能力.结果 实验组EGFR基因及下游靶蛋白表达显著下调,其中SKOV3细胞中EGFR mRNA下调至48％(P＜0.05),A2780细胞中EGFR mRNA下调至47％(P＜0.05).实验组细胞的细胞周期明显受到抑制(P＜0.05),miR-134-5p通过EGFR靶蛋白诱导细胞凋亡(P＜0.05).实验组细胞的增殖活性和集落形成能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 miR-134-5p可通过靶向抑制EGFR基因,促进细胞周期停滞和细胞凋亡,降低卵巢癌细胞的增殖能力.     

曲古抑菌素A对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制

目的本研究探讨曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌细胞的杀伤作用和机制.方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的膀胱癌BIU-87细胞株;采用MTT法检测细胞生长抑制率;以流式细胞术(FCM)测定不同浓度的TSA作用前后膀胱癌细胞的凋亡情况及细胞周期变化;应用RT-PCR分析了TSA作用前后膀胱癌细胞中p21^WAF1 mRNA表达的变化.结果 TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制膀胱肿瘤细胞增殖,FCM结果表明TSA能显著诱导细胞发生凋亡且主要诱导G1期细胞发生凋亡而出现凋亡峰,RT-pCR结果示TSA处理能显著诱导p21^WAF1 mRNA表达.上述结果都呈现出明显的量-效与时-效关系.结论 TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人膀胱癌细胞生长,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21^WAF1蛋白水平实现的.