高脂饲料诱发C57BL/6小鼠肥胖性Ⅱ型糖尿病

目的 通过饲喂高脂饲料诱发C57BL/6小鼠Ⅱ型糖尿病(T2DM),探讨不良饮食对T2DM以及肥胖症的影响.方法 以C57BL/6小鼠为模型,饲喂脂肪供热60％的高脂饲料12周,检测小鼠高脂饲料饲喂前后空腹血糖(FBG)及体质量,并通过口服糖耐量试验(OGTT)反应胰岛β细胞功能受损情况和机体对血糖调节能力的改变.结果 与对照组比较,从第4周开始C57BL/6小鼠的空腹血糖显著上调(P＜0.001),同时体质量稳步增长直至第12周形成肥胖症(P＜0.001),分析显示空腹血糖与体质量的变化存在显著相关性(P＜0.001).口服糖耐量试验结果表明,高脂饲料饲喂12周后C57BL/6小鼠血糖调节能力严重受损(P＜0.001).结论 C57BL/6小鼠高脂饲料饲喂12周后可成功建立肥胖型T2DM模型.该模型可良好再现因不良饮食习惯所引起T2DM的发生,为糖尿病的研究提供有力工具.     

精氨酸加压素翻转脂多糖引起大鼠发热反应及其与棕色脂肪产热变化的关系

目的 研究外周给精氨酸加压素（AVP）对脂多糖（LPS）引起大鼠发热和棕色脂肪产热以及血清中IL-1β和PGE₂水平的变化。方法 实验用成年雄性SD大鼠,在23℃环境温度下,明暗时间各12h。用无线遥测系统连续测量大鼠体核温度（Tc）、棕色脂肪温度（T_BAT）和活动。10：00时或11：30时分别给大鼠腹腔注射LPS （50μg/kg）、AVP （10μg/kg）或V1a受体阻断剂（30μg/kg）。用ELISA法测定血清IL-1β和PGE₂的含量。结果 腹腔注射LPS后T_BAT升高出现在Tc升高之前。腹腔V1a受体阻断剂能提高LPS引起发热反应。AVP能抑制LPS引起发热大鼠血清中IL-lβ和PGE₂水平升高反应。结论 BAT产热在LPS引起的发热中有重要的作用。外周给AVP可通过抑制棕色脂肪产热和降低血液中IL-lβ和PGE₂的浓度而翻转LPS发热反应。内源性AVP也有限制LPS发热的作用。     

高脂饮食加低剂量链脲霉素建立小鼠2型糖尿病模型

目的高脂饮食加低剂量链脲霉素(Streptozotocin,STZ)建立小鼠2型糖尿病模型。方法5周的雄性C57BL/6J小鼠,随机分为正常饲料组、正常饲料加STZ组、高脂饲料组和高脂饲料加STZ组。相应饲料喂养5周后,按照100 mg/Kg的剂量腹腔注射STZ,然后继续喂养4周。在第5周和第9周末测定小鼠的体重、收缩压、血糖、血胰岛素、血甘油三脂和胆固醇水平。结果STZ注射前各组小鼠的体重、血压、血糖、血胰岛素、血脂和血甘油三脂无明显差异(P0.05)。STZ注射后4周时,高脂饲料加STZ组小鼠的体重、血糖、血胰岛素、血压和血脂水平明显升高(P0.05);而其他三组的这些指标无明显改变或仅部分升高。结论高脂饮食加低剂量链脲霉素可建立小鼠2型糖尿病模型,该模型具有人2型糖尿病的主要表型特征和相似的发病过程。     

中链甘油三酯对C57BL/6J小鼠棕色脂肪组织的影响

目的观察中链甘油三酯（MCT）对C57BL/6J小鼠棕色脂肪组织的影响。方法选择4-5周龄C57BL/6J雄性小鼠30只,随机分为中链甘油三酯高脂组（MCT）,大豆油高脂组（LCT）及普通饲料对照组,每组10只,喂饲15周。观察研究前后各组间小鼠体质量、饲料消耗量及食物功效比、棕色脂肪组织重量差异以及解偶联蛋白-1（UCP1）表达水平的变化。结果研究结束时,MCT高脂组小鼠的体质量、体脂肪量显著低于LCT组（P〈0.05）,饲料消耗量MCT组和LCT组之间无统计学差异（P〉0.05）,MCT组棕色脂肪组织重量及UCP1蛋白表达量显著高于LCT组。结论 MCT可促进棕色脂肪组织增殖,提高棕色脂肪组织UCP1的表达,增强棕色脂肪组织的产热功能,从而抑制高脂饲料诱发的C57BL/6J小鼠体质量增加和体脂肪积累。     

C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠行为学实验研究

目的:通过水迷宫实验、自主活动实验、听源性惊厥实验和悬尾实验来研究C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠的行为学差异.方法:通过胚胎复苏获得3只雌性杂合的C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠后与C57BL/6小鼠进行繁殖,最终得到纯合的雌性和雄性C57BL/6 FMR1基因敲除小鼠各10只进行行为学实...     

雄性C57BL/6J小鼠不同部位脂肪组织功能的差异

目的:研究雄性C57BL/6J小鼠各部位脂肪组织的棕色化功能差异?方法:分离雄性C57BL/6J小鼠各部位脂肪组织,荧光定量PCR检测脂肪组织棕色化?成脂功能的标志基因?脂肪细胞因子?炎症因子表达情况?Western blot检测棕色化功能蛋白解偶联蛋白1(uncoupling protein-1,Ucp1)表达?结果:以肩胛间和肩胛下棕色脂肪为比较标准,其中甲状腺上?下部位脂肪的棕色化功能标志基因表达量最高,接近肩胛间和肩胛下;在肩胛间白色脂肪?腋下脂肪和肾周脂肪,上述棕色化标志基因表达量低于甲状腺周围脂肪;腹股沟皮下?附睾旁及肠系膜脂肪的上述棕色化标志基因表达最低?成脂功能的标志基因在皮下脂肪表达量明显高于附睾旁?肠系膜周围脂肪?脂肪细胞因子在白色脂肪特性的脂肪组织中表达量明显高于有棕色脂肪特性脂肪;附睾旁脂肪?肠系膜脂肪中炎症因子表达量显著升高,皮下脂肪炎症因子表达量最少?结论:甲状腺上?下部位脂肪的棕色化程度接近经典棕色脂肪?肩胛间白色脂肪?腋下脂肪和肾周脂肪较甲状腺周围脂肪的棕色化程度弱,成脂功能?脂肪细胞因子?炎症因子与肩胛间?肩胛下棕色脂肪基本一致且均较强?腹股沟皮下?附睾旁及肠系膜脂肪具有白色脂肪特性?皮下脂肪大量分泌脂肪细胞因子,炎症因子表达量小,成脂功能强?附睾旁脂肪?肠系膜周围脂肪细胞因子表达量较少,但炎症因子分泌相对较高且脂解作用较强?     

C57BL/6J小鼠脂肪组织总RNA提取及周脂素基因的克隆

目的 用改进后的方法提取高质量的RNA,以此为模板,应用T-A克隆法克隆C57BL/6J小鼠周脂素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对.方法 在试剂说明书基础上,改进提取脂肪组织RNA的方法,从C57BL/6J附睾脂肪组织提取高质量的总RNA,用RT-PCR扩增出周脂素编码区基因,并将目的基因编码区克隆入pMD18-T载体中,转化E-coli JM109后,筛选阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对.结果 用改进后的方法成功提取出了高质量的总RNA,并且成功提取构建的重组载体中含有周脂素基因的全长序列,与GenBank公布的序列一致.结论 改进的后的脂肪组织RNA提取方法是可行的,并获得周脂素基因的cDNA.为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

高脂饮食C57BL/6小鼠PAI-1表达及罗格列酮干预效果研究

目的:研究正常体重和肥胖C57BL/6小鼠血浆纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)水平、内脏和皮下脂肪组织mRNA的表达情况及罗格列酮(RSG)的干预效果。方法:雄性C57BL/6小鼠按体重随机分为对照组、高脂组和RSG组,分别喂饲不同饲料12周,测定血脂、血清PAI-1水平及附睾、皮下脂肪组织PAI-1mRNA的表达情况。结果:RSG组小鼠体重显著高于高脂组和对照组,RSG干预可降低总甘油三酯水平。高脂组血清PAI-1水平显著高于对照组,RSG干预可降低血清PAI-1水平。3组小鼠附睾脂肪组织PAI-1mRNA表达均显著高于皮下脂肪组织;RSG干预可显著降低皮下脂肪组织PAI-1表达,而对附睾脂肪组织却无明显影响。结论:正常体重与肥胖小鼠血清PAI-1水平及内脏、皮下脂肪组织PAI-1的表达均存在差异,RSG有助于改善血脂、降低血清PAI-1水平及皮下脂肪组织PAI-1 mRNA表达。     

链脲佐菌素诱导C57BL/6J小鼠2型糖尿病模型研究

目的建立与2型糖尿病(非胰岛素依赖型糠尿病、NIDDM)病人临床特征和发病过程相似的NIDDM动物模型.方法用高脂肪饲料喂养C57BL/6J雄性断乳小鼠3周,腹腔注射链脲佐菌素(STZ),继续喂养4周,测定给药前和给药后1、3、4周非空腹血糖、实验结束时非空腹胰岛素水平,观察胰腺形态学变化.结果喂养3周后(给药前)高脂饲料-STZ组及高脂饲料-柠檬酸组血糖浓度(7.0±0.39)mmol/L、( 6.8±0.45)mmol/L高于普通饲料-STZ组及普通饲料-柠檬酸组(5.3±0.40)mmol/L、(5. 4±0.39)mmol/L,P＜0.05;实验结束时,高脂饲料-STZ组血糖浓度(13 .1±2.01)mmo/L高于高脂饲料-柠檬酸(6.9±0.46)mmol/L、普通饲料-柠檬酸组(6.0± 0.46)mmol/L和普通饲料-STZ组(7.1±0.62)mmol/L(P＜0.05),各组间血浆胰岛素浓度、体重及饮水量差异无显著性,P＞0.05;实验过程中高脂饲料STZ组和柠檬酸组小鼠每天进食热量(64.49±9.2)kJ/只,(70.7±9.6)kJ/只, 显著高于普通饲料STZ组和柠檬酸组(52.7±7.9)kJ/只,(57.3±11.7)kJ/只;各组小鼠胰腺和胰岛细胞形态正常.结论高脂肪饲料和STZ是用C57BL/6J断乳幼鼠建立NIDDM模型所必须的,100mg/kg体重STZ对普通饲料小鼠血糖无影响;用高脂饲料和STZ 处理的小鼠血糖升高、胰岛素浓度正常,与NIDM病人临床特征和发病过程相似;C57BL/6J小鼠易得,建模方法简便,费用低,是在NIDDM实验研究中能广泛使用的较理想的非遗传性NID DM动物模型.     

SPF级C57BL/6J小鼠生长发育和繁殖性能指标的测定

目的 在SPF级动物饲养条件下，对本中心饲养的SPF级C57BL／6J小鼠生长发育和繁殖性能指标进行测定。方法 挑选80～90日龄C57BL／6J小鼠40只（雌、雄各半），采取1：1间歇同居，兄妹近交繁殖，并统计其生长发育和繁殖性能参数指标。结论 SPF级C57BL／6J小鼠离乳后体重增长较慢；第2、3胎繁殖性能较好，第5胎最差，种鼠连续繁殖5胎后要更换。     

IRS-1的表达和泛素化在KKAy及C57BL/6J小鼠糖尿病发展过程中的意义

目的:探讨胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达和泛素化水平在糖尿病发展过程中的作用。方法:20只8周龄C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(正常饲料喂养,n=10)和胰岛素抵抗组(高脂饲料喂养,n=10)。8周龄KKAy小鼠8只,高脂饲料喂养,为2型糖尿病组。检测各组小鼠体重、血糖和血胰岛素水平。12周后免疫印迹检测各组动物肝组织IRS-1的表达量,同时采用剥离免疫印迹法检测肝组织IRS-1的泛素化水平。结果:高脂喂养12周后C57BL/6J小鼠出现胰岛素抵抗,KKAy小鼠出现肥胖和糖尿病。2型糖尿病组IRS-1的表达显著低于正常对照组和胰岛素抵抗组(P<0.05),而IRS-1的泛素化水平则显著高于胰岛素抵抗组(P<0.05),与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论:2型糖尿病时IRS-1的表达下调,IRS-1泛素化水平增加是导致胰岛素信号转导障碍的重要原因。     

高脂饲料对C57BL/6J小鼠血脂及转氨酶的动态影响

目的观察高脂饲料诱发的C57BL/6J小鼠高脂血症模型血脂的动态变化。方法C57BL/6J小鼠分成基础饲料组、高脂饲料组,在给予高脂饲料0、1、2、3、4、5、7、9、11、17周采血检测TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、BUN,并且部分动物取心、肝、肾甲醛液固定,HE染色作病理学检查,剩余部分动物继续给予普通饲料,21周时采血检测血浆指标。结果给予高脂饲料后1周小鼠血脂和ALT显著升高,3~11周后稳定,此后稍有下降。BUN水平没有明显变化。心、肝脏显示明显病理学损伤,肾脏病理学检测正常。但是停止饲喂高脂饲料,小鼠血脂和ALT水平很快下降至正常。结论高脂饲料引起C57BL/6J小鼠血脂升高迅速、明显。     

自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的定量与乙酰化修饰蛋白质组学特征

目的 获取自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学特征。方法 采用串联质谱标签标记定量与液相色谱-串联质谱联用技术,获取生理状况下2月龄与18月龄C57BL/6J雄性小鼠肝脏的蛋白质组学与乙酰化修饰蛋白质组学数据,开展生物信息学分析。结果 蛋白质组学共定量4712个蛋白质,其中,年轻、年老小鼠中有195个差异表达蛋白质;乙酰化修饰蛋白质组学共定量4818个位点,对应1367个蛋白质,其中,年轻、年老小鼠中有113个表达位点有差异,对应76个蛋白质。衰老相关的上调蛋白质主要与脂肪酸代谢、环氧合酶P450途径、药物分解代谢、有机羟基化合物代谢、花生四烯酸代谢等生物学过程相关,下调蛋白质主要与基因沉默、核小体组装、蛋白质异源四聚、干扰素反应、蛋白质-DNA复合物组装等生物学过程相关。伴随衰老上调的乙酰化修饰位点所在蛋白质主要与辅因子代谢、小分子分解代谢、磷酸核糖代谢、核糖核苷酸代谢、嘌呤代谢等生物学过程相关,含下调乙酰化位点的蛋白质主要与含硫化合物代谢、未折叠蛋白反应、氨基酸代谢等生物学过程相关。结论 本研究客观展示了自然衰老C57BL/6J雄性小鼠肝脏的定量和乙酰化修饰蛋白质组学特征,为衰老相关机制探索和干预研究提供了可资参考的数据集。     

裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠肾脏组织结构及超微结构比较

目的 比较新型实验动物裸鼹鼠与常用啮齿类实验动物小鼠肾脏的组织结构和超微结构的差异.方法 采用成年裸鼹鼠与C57BL/6J小鼠,处死后取肾脏,制作组织标本和电镜标本,利用光学显微镜和透射电镜观察其结构.结果 与C57BL/6J小鼠比较,裸鼹鼠肾小管上皮较薄,肾脏皮、髓质内存在较多的病理性钙化灶;肾小管上皮细胞内线粒体出现扩张甚至崩解,内质网扩张明显.结论 裸鼹鼠肾脏组织在结构上与C57BL/6J小鼠存在明显差异;裸鼹鼠肾小管上皮存在渐进性病理损伤,同时也存在较强的自我修复能力.     

炎症上调SREBP-1致C57BL/6J小鼠肝脏脂质积聚

目的：研究炎症是否通过影响核转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)而致C57BL/6J小鼠肝脏脂质的异常聚集。方法：将8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和炎症组(n=6)组,两组均喂以高脂饮食,炎症组小鼠皮下注射酪蛋白建立慢性炎症模型,对照组注射相应量磷酸盐缓冲液,18周后处死,测定血清中炎症介质水平及肝脏中的脂质水平,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时定量PCR和Western blotting检测肝脏炎症因子TNF-α、MCP1及脂肪酸合成相关基因SREBP1、ACCα、FAS的基因和蛋白水平。结果：与对照组相比,炎症组血清中的炎症因子IL-6和SAA水平以及肝脏中炎症因子MCP1 和 TNF-α的mRNA和蛋白水平均显著上升(P<0.05)。炎症状态下,肝脏甘油三酯和游离脂肪酸含量显著高于对照组(分别为0.21?0.07 vs 0.40?0.14mg/mg,P<0.05;3.80?0.58 vs 5.38?1.38nmol/mg,P<0.05)。油红O结果显示,炎症使脂质积聚更显著。SREBP1及其下游与脂肪酸和甘油三酯合成相关的基因ACCα,FAS的mRNA和蛋白水平在炎症组均显著上升(P<0.05)。结论：炎症可能通过上调SREBP1,加重脂质在肝脏的聚集。     

Expressions of insulin receptor and its related substrate genes in the muscle of C57BL/6J mice fed on different diets

MOle and more evidences show that obesity, insulinresistance and hyper-inSulinenda are risk fartoIS for manyc~c ac,.asesll]. EPide~al studies have shownan association between the fatty acid comPOSition of thediet and the incidence of Obesity, diabetes and comneqheart disease. ConsUmption of a diet high in satulated fatty acids i.nduced Obesity and insulin resistance. However,the molecular mechanism was still unknown. Insulin inihates its biological effectS by binding to cell s~e receptor …     

美金刚对脂多糖致 C57 BL／6 J 小鼠空间学习记忆能力下降的影响

目的：认知功能障碍的发病机制尚不明确。探讨美金刚对脂多糖所致C57BL／6J小鼠空间学习记忆能力的影响。方法36只C57BL／6J小鼠随机列表法分为对照组、脂多糖组、美金刚组,每组12只。3组分别连续7 d腹腔注射等容量等渗盐水,脂多糖和美金刚混合溶液。于第8天进行Morris水迷宫实验,记录登台潜伏期及平均靶象限活动时间。取海马组织测定淀粉样蛋白β（amyloid βprotein, Aβ）、糖原合成激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β）及雷帕霉素靶蛋白（mammalian tar-get of rapamycin, mTOR）的含量。结果脂多糖组较对照组登台潜伏期显著延长[（71．01±13．21）s vs （50．56±9．89）s, P＜0．05]、平均靶象限活动时间显著缩短[（42．58±7．85） s vs （63．74±12．43） s, P＜0．05]、海马Aβ及GSK-3β表达显著增加[（1．75±0．43） vs （1．27±0．23）,（184．0±18．6）％ vs （100．0±12．1）％, P＜0．05],但mTOR明显下降[（75．0±13．5）％ vs （100．0±10．3）％, P＜0．05];美金刚组较脂多糖组登台潜伏期显著缩短[（61．45±7．65）s vs （71．01±13．21）s, P＜0．05]、平均靶象限活动时间显著延长[（58．25±9．02）s vs （42．58±7．85）s, P＜0．05]、海马Aβ及GSK-3β、mTOR明显下调[（1．35±0．28） vs （1．75±0．43）,（92．4±10．8）％vs （184．0±18．6）％,（97．0±14．3）％vs （75．0±13．5）％, P＜0．05]。结论美金刚可改善脂多糖所致小鼠空间学习记忆能力下降,可能与海马组织中GSK-3β及mTOR的表达变化有关。     

C57BL/6J小鼠PASG基因敲除后多器官异常表型初探

目的探寻PASG基因敲除对脑等多器官发育的影响，为研究胶质瘤发生的分子病因奠定基础。方法采用经典的基因敲除法选择性缺失小鼠PASG基因第10～l2外显子，并以组织学及Western bolt法检测基因敲除鼠的中枢神经细胞形态和基因改变。结果PASG基因敲除小鼠显示出脑、肺、肾和骨等器官一系列表型变化，尤其是脑发育延缓，海马区组织结构异常，及相关基因表达水平改变等。结论PASG是调控细胞增殖发育相关基因，它的缺失可导致多器官功能异常，尤其是脑海马区细胞的变化与神经干细胞关系密切，可为进一步研究胶质瘤发生的分子病因提供线索。     

中链脂肪酸对高脂肪饲料诱导的肥胖C57BL/6J小鼠脂肪组织中转录因子的影响

目的观察中链脂肪酸（medium chain fatty acid,MCFA）对高脂肪饲料诱导的肥胖C57BL/6J小鼠脂肪组织中转录因子的表达,探讨中链脂肪酸降低体重、体脂肪的可能机制。方法 30只C57BL/6J肥胖小鼠按空腹体重随机分为两组,每组15只,分别给予含2%MCFA和长链脂肪酸（long chain fatty acid,LCFA）的高脂饲料喂养12周,测定小鼠体重、体长,取小鼠肝脏、肠系膜周围脂肪垫、附睾周围脂肪垫及肾周脂肪垫并称重。采用BCA法测定附睾周围脂肪组织（white adiposetissue,WAT）蛋白浓度,采用ELISA法测定小鼠WAT中肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（peroxisome proliferators-activated receptor-γ,PPAR-γ）水平,采用Real-time PCR法检测WAT中PPAR-γ、甾醇调控元件结合蛋白-1（sterol regulatory element-binding protein-1,SREBP-1）和CCAAT/增强子结合蛋白（CCAAT enhancer binding protein-α,C/EBP-α）的mRNA表达。结果 MCFA饲料组肥胖小鼠体质量、体长、肝脏质量、肾周脂肪质量、附睾周脂肪质量以及WAT中TNF-α水平、SREBP-1和C/EBP-α的mRNA表达量均显著低于LCFA饲料组（P〈0.05）。PPAR-γ水平及其mRNA表达量,两组之间无统计学差异（P〉0.05）。结论 MCFA可能通过下调脂肪组织中TNF-α、SREBP-1及C/EBP-α水平和mRNA表达,抑制脂肪细胞分化。     

Sca-1+Lewis肺癌细胞成瘤实验的研究

目的 探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)细胞株中Sca-1 细胞的成瘤特性.方法 以Sca-1作为磁珠分选细胞的表面标志,从LLC细胞中分离Sca-1 细胞,流式细胞仪鉴定分离的纯度.将分选的Sca-1 细胞、Sca-1-细胞及未分选细胞分别以1×106、5×105、1×105、5×104、2×104密度接种于C57BL/6小鼠腋窝下,观察成瘤时间,4 周后处死小鼠,统计成瘤率、平均瘤重及体积.结果 分选前Sca-1阳性细胞百分比为(8.06±1.03)%,分选后Sca-1阳性细胞百分比为(93.92±1.07)%.Sca-1 细胞组在2×104个细胞时可以成瘤,而Sca-1-细胞组最少需要5×105个细胞.相同接种量(1×106),4周后处死小鼠,Sca-1 细胞组的瘤重及体积均大于Sca-1-细胞组(P<0.01).结论 Sca-1 细胞的成瘤性较Sca-1-细胞强.