单克隆抗体免疫放射测定法检测丝虫抗原

应用抗马来丝虫成虫单克隆抗体结合免疫放射测定法，对马来丝虫成早抗原，马来丝虫成虫排泄－分泌抗原，马来微丝蚴抗原及班氏丝虫病病人血清中循环抗原进行了检测。马来丝虫成虫抗原检出的最低含量为０．４８ｐｇ，ＥＳ抗原，马来微丝蚴抗原可测得抗原结合量分别为０．３５μｇ和０．０６５μｇ，班氏丝虫病人血清中循环抗原的检测结果阳性率为８０％，线虫病流行区５０份微丝蚴阴性血清及丝虫病非流行区５０份肠道蠕虫感染者血清全     

尿hGH免疫放射测定法的建立及初步临床应用

应用两株高亲和力、高特异性的hGH单克隆抗体,建立了尿hGH IRMA测定法。一株单抗以Ch-T法碘标记,另一株单克隆抗体与经溴化氰活化的Sepharose-4B交联成为固相抗体。方法灵敏度为125pg/L,平均批内、批间变异系数分别为3.8％、5.19％。稀释试验线性关系好,并通过原点。添加回收试验,回收率满意。pH值(5.0～7.4)及0～0.25mol/L氯化钠浓度,0～0.5mol/L尿素浓度对hGH的测定值无明显影响。正常青年男性(n=9),青年女性(n=9)夜10小时hGH排泄量分别为0.55±0.50ng,0.44±0.33ng,二者无显著差异;肢端肥大症患者(n=9)夜10小时hGH排泄量为58.07±35.90ng、显著高于正常人(P<0.001);8例hGH完全缺乏的侏儒症患者尿hHG皆不能测出。     

TSH双位点单抗免疫放射测定法的建立及临床应用

采用本所制备及鉴定的二株不同位点的抗ｈ－ＴＳＨ单抗１３Ｂ４和８Ｅ７，建立了高灵敏度、高特异的ｈ－ＴＳＨ免放测定法。其中经饱和硫酸铵和ＰｒｏｔｅｉｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱纯化的１３Ｂ４以Ｉｏｄｏｇｅｎ固相法进行碘标，纯化的８Ｅ７（１∶１００稀释度）作塑料管固相抗体。方法学鉴定表明，本法与生理剂量的其他糖蛋白激素ｈ－ＦＳＨ、ｈ－ＬＨ、ｈＣＧ无明显交叉反应，灵敏度达０．０２６ｍＵ／Ｌ（－ｘ±２ｓ），批内ｃｖ为１．２３～７．３０％，批间ｃｖ为１２．３％。稀释度试验示平行线性关系好，ｒ＝０．９９９。初步临床应用结果表明：甲亢６４例，ＴＳＨ值为未测得（ＮＤ）～０．３１ｍＵ／Ｌ，９５％可信限为ＮＤ～０．２６３ｍＵ／Ｌ；甲减２８例，ＴＳＨ范围为６．６～１８２ｍＵ／Ｌ；甲状腺功能正常者９８例ＴＳＨ为１．４５ｍＵ／Ｌ（Ｐ＿（５０）），９５％可信限为０．３２６～６．０５９ｍＵ／Ｌ。本法与瑞士Ｓｅｒｏｎｏ酶免药盒同时测定１２８例，两种结果的相关系数ｒ＝０．８４４（Ｐ＜０．０１）。经上海华山医院等４家医院初步临床试用，结果表明本法与国内外同类型药盒相比，测定方法简便，相关性高，临床符合率好。     

用抗牛丝虫抗体Dot—ELISA检测人体丝虫循环抗原的研究

应用抗牛丝虫抗体及抗马来丝虫抗体进行Dot-ELISA检测49例班氏丝虫微丝蚴(mf)阳性血清,CAg阳性率分别为89.7％及91.8％;36例班氏丝虫mf(—)血清,CAg阳性率分别为47.2％及50.0％;31例马来丝虫mf(+)血清,CAg阳性率分别为87.0％及93.5％,非流行区肠线虫感染44例及正常人血清40例全部阴性,华支睾吸虫感染血清70例,两种抗体检测CAg的假阳性率分别为8.5％及7.1％,囊虫病血清76例,假阳性率均为3.9％。     

单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫病人循环抗原

制备抗日本血吸虫排泄分泌抗原单克隆抗体(McAb),应用于斑点酶联免疫吸咐试验(Dot-ELISA)检测血吸虫病人循环抗原.血吸虫病人血清的阳性率为80.9％(152/188),其中EPG为1～24、25～99和≥100的病人检出率分别为76.8％、86、6％和100％。血吸虫病人经吡喹酮治疗1年以上粪检阴性者50例,均为阴性.并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人、丝虫病人和健康人血清均为阴性.McAb-Dot-ELISA操作简便,试剂用量少,肉眼判断结果,可用于血吸虫病的诊断和疗效考核。     

单克隆抗体ELISA检测班氏丝虫病人血清循环抗原

应用抗马来微丝蚴抗原4B_1株单克隆抗体(McAb)和抗马来成虫代谢抗原4B_7株McAb酶联免疫吸附试验(ELISA)检测班氏微丝蚴血症者血清中循环抗原,阳性率分别为78.46％(102/130)和87.13％(88/101);检测51例晚期丝虫病人血清,阳性率分别为3.92％和1.96％;36例经治疗后微丝蚴血症阴转者血清,阳性率分别为13.89％和8.33％。丝虫病非流行区99例肠道蠕虫感染者阳性率分别为16.16％和5.05％。结果表明抗马来成虫代谢抗原4B_7株McAb应用于诊断班氏丝虫感染的效果优于抗马来微丝螺4B_1株McAb。     

应用单克隆抗体检测蚊体内幼丝虫的实验观察

以马来丝虫感染期幼虫为靶抗原制备多株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）从中筛选出１Ｇ１、１Ｈ１单克隆抗体，检测人工感染马来丝虫的中华按蚊。当中华按蚊吸食含马来微丝蚴的兔血后，分别解剖，同时以ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测饲养不同时间的中华按蚊。结果显示，饲养９ｄ的按蚊马来丝虫幼虫阳性率，人工解剖为８６．６％，ＥＬＩＳＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法分别为８２．２％和７７．８％。经统计学处理，人工解剖与单抗检测无显著性差异，其灵敏度为每只蚊０．５条幼虫。实验证明，此ＭｃＡｂ与牛腹腔指状丝虫、猪肺丝虫抗原无交叉反应，显示了一定的特异性。     

同种和异种丝虫成虫抗原免疫动物后血清特异性抗体动态的研究

应用马来丝虫和牛丝虫成虫冰冻切片抗原作间接免疫荧光抗体试验(IFAT)和免疫酶染色试验(IEST)检测家兔经3种抗原免疫后不同时期血清抗体IgG水平,均能显示免疫动物特异性抗体水平的动态变化。IgG水平高峰(GMRT为76.11～861.08)均在动物免疫后第4wk,在第8wk时,均下降至低水平(GMRT为4.00～32.00);加强免疫后1wk时,又上升至高水平(GMRT为20.11～181.02)。     

抗弓形虫表膜抗原P30单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗弓形虫主要表膜抗原P30单克隆抗体并进行鉴定,进而为弓形虫病诊断、抗原的提纯及亚单位疫苗的制备等提供可靠依据。用弓形虫速殖子膜蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选出能够稳定分泌高滴度抗P30单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并测定单克隆抗体免疫球蛋白亚类和抗体效价,用IFAT进行单抗识别的抗原定位,并通过SDS-PAGE和Western-Blot分析鉴定。结果获得了两株抗P30抗原的杂交瘤细胞株E3和G2,其分泌的抗体与肺孢子虫、隐孢子虫等抗原均不发生交叉反应。2株单抗均属IgG1亚类,且识别的抗原定位于速殖子表膜。结果表明,制备的抗P30抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和特异性的单克隆抗体。     

马来丝虫虫体抗原检测长爪沙鼠血清抗体

长爪沙鼠实验感染马来丝虫后,用感染期幼虫、微丝蚴的超声粉碎片段抗原和成虫的冰冻切片抗原,进行间接荧光抗体试验,观察血清抗体动态变化。抗感染期幼虫抗体多于感染后前3Wk内出现,抗成虫及微丝蚴抗体多于感染后前5、6wk内出现。在微丝蚴出现前,腹腔微丝蚴阳性和阴性沙鼠抗体水平差别无显著性,而在微丝蚴出现后,抗体水平具有显著性差别。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

应用混合单抗双抗体夹心-ELISA法检测肺吸虫循环抗原

用混合单克隆抗体双抗体夹心-ELISA法检测19例痰检虫卵阳性肺吸虫病人,血清中循环抗原全部(100％)皆呈阳性反应。59例根据临床和实验室证据(三项以上免疫学试验呈阳性反应)确诊者,56例(94.9％)显示阳性。在治疗后6个月-3年患者的15例中,14例(93.3％)转为阴性,另一例仍呈阳性反应,因系采用硫双二氯酚治疗未完成疗程者。89名正常人和109例其它7种寄生虫病人,全部皆为阴性,本试验未出现任何假阳性和交叉反应。     

日本血吸虫病患者尿液中循环抗原和抗体联合检测的诊断价值

[目的 ]探讨尿液中血吸虫循环抗原和抗体检测对日本血吸虫病的诊断价值。 [方法 ]用单克隆抗体夹心 ELISA法检测日本血吸虫病患者尿液中循环抗原 ,间接ELISA检测尿液中特异性抗体。 [结果 ]10例急性血吸虫病和 6 1例慢性血吸虫病患者尿液中循环抗原的阳性率分别为 6 0 %和 40 % ,特异性抗体的阳性率分别为 80 %和 6 1 7%。两者联合检测的总阳性率分别为 10 0 %和 71 7%。 10 0例健康对照者尿液中仅 3%出现假阳性。 [结论 ]检测尿液中日本血吸虫循环抗原和特异性抗体简便、实用 ,为一种非损伤性的血吸虫病诊断方法。     

多克隆与单克隆抗体夹心ELISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原

[目的 ]检测血吸虫病患者的循环抗原。 [方法 ]用多抗与单抗夹心 EL ISA法检测日本血吸虫病患者血清循环抗原。 [结果 ]用于检测 15 0例血吸虫病患者的循环抗原 ,其敏感性平均为 84.7% (72 .0 %～ 91.0 % ) ,40例正常人未出现假阳性反应 ,74例其他寄生虫感染者中 ,有 2例并殖吸虫病患者阳性 ,其余均未出现交叉反应。 [结论 ]多抗与单抗夹心 EL ISA法是一种较为理想的循环抗原检测方法。