靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的探讨靶向PEG10的siRNA真核表达载体(psiRNA-PEG10)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响。方法建立人肝癌细胞HepG2的荷瘤裸鼠模型,在接种后第14天分别将psiRNA空载体和psiR-NA-PEG10瘤内多点注射进行治疗,观察肿瘤大小变化、组织形态学及超微病理改变。结果psiRNA-PEG10治疗组肿瘤生长受到明显抑制,与生理盐水组和psiRNA组比较差异有显著性(P<0.001),抑瘤率明显高于其他两组,电镜下可见明显的细胞凋亡。结论靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长有抑制作用。     

siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-9蛋白表达的影响

目的利用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制人舌癌Tca883细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF—siRNA真核表达载体的人舌癌Tca8113细胞（VEGF—siRNA1、VEGF—siRNA2）为实验组,以转染空载体人舌癌Tca8113细胞及未转染的人舌癌Tea8113细胞为实验对照组和空白对照组,将各组细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫细胞／组织化学法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF及MMP-9的蛋白表达。结果在培养细胞和移植瘤中,与实验对照组和空白对照组相比,VEGF—siRNA1组和VEGF—siRNA2组VEGF染色平均灰度值高,差异有统计学意义（P〈0．05）;各组培养细胞中均未见MMP-9表达;各组移植瘤MMP-9染色平均灰度值之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-9蛋白的表达无明显影响。     

PEG-PEI/Fe_3O_4纳米磁流体-TK对裸鼠移植性肝癌细胞靶向杀伤作用研究

目的研究PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-TK对人肝癌细胞系SMMC-7721裸鼠移植瘤模型的靶向性治疗作用。方法建立人原发性肝癌稞鼠皮下移植瘤模型，将荷瘤裸鼠随机分成肿瘤对照组、纯自杀基因组、PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-TK组3组。对照组不作任何处理，实验组于瘤体内分别直接注射纯自杀基因、PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-TK，同时于裸鼠腹腔内注射GCV，观察不同时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查，免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）以及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达量，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞原位凋亡。同时，用RT-PCR检测肿瘤鼠心，肝，肾的自杀基因表达情况。结果裸鼠皮下成瘤率100％；研究PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-TK组的肿瘤体积、血清AFP含量、肿瘤MVD和VEGF表达强度均明显低于对照组、纯自杀基因组（P〈0．05），细胞凋亡指数都明显高于后两组（P〈0．05），可见较多的凋亡细胞。RT—PCR测示肿瘤鼠心，肝，肾未见自杀基因表达，而肿瘤细胞则出现自杀基因表达。结论PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-TK可显著抑制肿瘤的生长，并对肿瘤治疗具有靶向性，是一种较为理想的肝脏肿瘤靶向给药系统，有望成为治疗原发性肝癌的新型生物制剂之一。     

靶向survivin的RNA干扰下调肺耐药相关蛋白逆转肝癌细胞耐药性的研究

背景 survivin和肺耐药相关蛋白（LRP）都与肝癌耐药有关,但二者之间的关系尚不十分明确。本研究的目的是观察在体外和体内survivin表达下调后,对LRP表达的影响以及逆转肝癌耐药的效果。 方法 应用RT-PCR和Western-blotting检测SMMC-7721细胞和SMMC-7721/ADM细胞中survivin的表达。应用MTT检测两种细胞对ADM的敏感程度。靶向survivin的siRNA转染SMMC-7721/ADM细胞,检测survivin的表达变化、SMMC-7721/ADM细胞对ADM的敏感程度的变化以及LRP的表达变化。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型。分别应用靶向survivin的siRNA、不同浓度的ADM以及二者联合对裸鼠肝癌皮下移植瘤进行处理,观察抑瘤效果,并观察全身毒性反应。检测瘤体内LRP的表达变化。两样本均数的比较采用t检验。 结果 SMMC-7721/ADM细胞中survivin的表达强于SMMC-7721细胞（P﹤0.05）。转染靶向survivin的siRNA后,survivin的表达与对照组相比显著下调（P﹤0.05）,肝癌耐药细胞对ADM的敏感程度明显增加,LRP的表达与对照组相比显著下调（P﹤0.05）。裸鼠皮下移植瘤转染靶向survivin的siRNA后,肿瘤体积从第8天起,与对照组相比显著减小（P﹤0.05）。联合治疗组中的裸鼠肿瘤体积与其它各组相比显著抑制（P﹤0.05）。siRNA组和联合治疗组中的裸鼠无明显毒性反应。瘤体内LRP的表达与对照组相比显著抑制（P﹤0.05）。 结论 通过RNA干扰下调survivin的表达,在体外及体内都能够增加肝癌的化疗敏感性,通过抑制LRP的表达使肝癌耐药性发生逆转。     

纳米磁性靶向药囊对人肝癌裸鼠移植瘤bcl-2/bax蛋白表达的影响

目的观察纳米磁性5-Fu药囊靶向治疗人肝癌裸鼠移植瘤对肿瘤细胞凋亡bcl-2及bax蛋白表达的影响。方法透射电镜观察各组移植瘤形态学特征，免疫组化SABC法测定bcl-2和bax蛋白表达水平。结果电镜观察可见B组（5-Fu）和D组（纳米磁性5-Fu药囊加内磁场）肿瘤组织大量癌细胞凋亡。B和D组bcl-2蛋白表达水平低于A组（生理盐水对照）、C组（纳米磁性5-Fu药囊）和E组（纳米磁小体加内磁场）（P〈0．01），D组bcl-2蛋白表达水平低于B组（P〈0．01）；B组和D组bax蛋白表达水平高于其他三组（P〈0．01），D组bax蛋白表达水平高于B组（P〈0．01）。结论纳米磁性5-Fu药囊靶向治疗能够降低bcl-2蛋白表达，增加bax蛋白表达，促进人肝癌裸鼠移植瘤细胞凋亡，提高5-Fu抗肿瘤作用。     

茉莉酸甲酯对人肝癌细胞HepG-2裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用的研究

目的通过建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，观察茉莉酸甲酯（methyiasmonate，MeJA）对移植瘤的生长抑制作用，方法实验分为对照组和MeJA组、全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）组、MeJA＋ATRA3种处理组、观测裸鼠成瘤情况和周围血甲胎蛋白以及肿瘤组织形态学变化；RT-PCR检测瘤体中Bcl-2及Bax的mRNA表达、结果与对照组比较，3种处理组移植瘤体积变小，重量减轻（P□0．05）；HE病理切片观察处理组可见癌细胞密度减少，瘤组织分化渐成熟；各处理组外周血甲胎蛋白值降低（P□0，05）；各处理组瘤体Bcl-2mRNA表达均减弱（P□0、05）、BaxmRNA表达均增强（P□0，05）．结论MeJA对人肝癌细胞HepG-2裸鼠皮下移植瘤生长具有抑制作用，其机制可能与诱导肿瘤细胞分化，启动凋亡，使肿瘤的增殖失控发生逆转，细胞表型和功能向正常转化有关、     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α治疗骨肉瘤的实验研究

目的　观察靶向缺氧诱导因子 (HIF)- 1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响。方法　针对HIF- 1α构建短发夹状siRNA真核表达载体 (pSilencer) HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS) 2。骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF -1α的基因沉默效果。四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜,原位末端标记TUNEL法,AnnexinV/PI双标记法检测细胞的凋亡。同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF- 1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果。结果　测序证实成功构建HIF- 1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer HIF,转染骨肉瘤细胞后,HIF -1α基因表达显著抑制 ( 90% )。与对照组比较,pSilencer HIF转染组骨肉瘤细胞缺氧状态下的增殖活性显著降低。缺氧培养 72h后,透射电镜、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,AnnexinV/PI双标检测转染组细胞凋亡率为 18. 71% ±0. 98%,明显高于pSilencer neo空载体转染组和未转染组 (P< 0 .01 )。裸鼠移植瘤实验显示pSilencer HIF转染组肿瘤生长减慢,成瘤率下降,肿瘤组织中可见大量坏死组织。结论　靶向HIF- 1α基因的短发夹状siRNA可以有效阻断骨肉瘤缺氧耐受转导通路,抑制骨肉瘤细胞的生长。     

健脾化瘀方对裸鼠肝癌新生血管生成的影响

目的探讨健脾化瘀方对肝癌裸鼠移植瘤新生血管生成的影响。方法裸鼠人肝癌细胞MHCC97-H模型分成健脾化瘀方治疗组（10只）及对照组（10只）。记录两组肝内移植病灶、肝内转移灶及肺转移灶的数目、瘤体大小、瘤重。用免疫组学方法检测裸鼠人肝癌细胞MHCC97-H模型中肝内移植病灶、肝内转移灶及肺转移灶中CD31、CD34的表达。结果所有裸鼠人肝癌细胞MHCC97-H模型均全部能够成瘤。健脾化瘀方治疗组肝内癌灶体积[（2180±690）mm^3]明显低于对照组[（3261±560）mm^3]（t=11．23,P〈0．01）。健脾化瘀方治疗组与对照组相比,裸鼠肝内转移率和肺转移率明显下降（P=0．033,0．011）。健脾化瘀方治疗组与对照组肿瘤组织中CD31指数分别为89．50±22．12和111．1±25．1（P〈0．05）,CD34指数分别为86．3±32．7和109．2±37．0（P〈0．05）。结论健脾化瘀方能抑制肝癌新生血管形成,明显抑制肝癌细胞生长与转移。     

双自杀基因系统诱导乳腺癌细胞凋亡的体内外实验研究

目的探讨VEGF启动子驱动的双自杀基因体系对人乳腺癌细胞MCF-7靶向治疗作用以及该体系能否诱导体内外MCF-7细胞的凋亡。方法选择表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞，用重组腺病毒Ad—VEGFP—CD／TK感染之，荧光显微镜观察其感染效率。R．T—PCR．方法检测受感染细胞目的基因的表达，给予前药GCV和5-FC后于倒置显微镜观察，采用流式细胞仪检测细胞内DNA含量的变化。建立荷人乳腺癌的裸鼠动物模型，观察各治疗组的治疗效果，应用透射电镜观察移植瘤细胞超微结构。结果携带双自杀基因和报告基因（GFP）的重组腺病毒载体，感染复数为100时，95％以上的受感染MCF-7和乳腺上皮细胞中有GFP表达。RT—PCK检测发现MCF-7细胞有目的基因的表达。而乳腺上皮细胞无表达。倒置显微镜下观察用药组细胞出现凋亡征象；用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰。在MCF-7裸鼠移植瘤模型中，治疗组裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制，其余各组肿瘤生长情况无明显差别；在透射电镜下可见治疗组多量的凋亡细胞。结论体内外实验均表明VEGF启动子可调控双自杀基因体系靶向性诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡。     

TNF—α对鼻咽癌放射增敏的体内实验研究

目的探讨TNF—α对鼻咽癌放射敏感性的影响。方法裸鼠体内移植瘤实验观察CNE-2Z、H5、S1放射后的体内增殖能力,采用HE染色观察各组裸鼠移植瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率,免疫组织化学染色和图像分析法检测不同方法处理的s1裸鼠移植瘤组织中Caspase-3和Survivin的表达。结果鼻咽癌细胞CNE-2Z存在放射敏感性异质性,S1细胞是具有放射抵抗潜能的亚克隆株。TNF-α联合放射治疗对s1裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用（P〈0．01）,TNF—α联合放射治疗组中瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率与生理盐水联合放射治疗组比无明显差异（P〉0．05）。TNF—α联合放射治疗组S1裸鼠体内移植瘤细胞核中Caspase-3表达高于单独TNF—α处理组（P〈0．05）;各组S1裸鼠移植瘤细胞浆中Caspase-3及Survivin的表达无明显差异（P〉0．05）。结论TNF—α联合放射治疗可能通过影响胞核中Caspase-3表达抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

颅咽管瘤切除术后并发症的处理

目的　讨论颅咽管瘤切除术后并发症的处理原则。方法　分析 36例颅咽管瘤切除术后并发症的临床资料。结果　术后并发尿崩症者 14例、高热 11例、电解质紊乱 8例、消化道出血 3例、癫痫 5例 ,死亡2例。结论　颅咽管瘤术后并发症较多 ,加强早期监测和处理 ,可进一步提高该病的治愈率     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

碱量法测定壳多糖脱乙酰度的方法探讨

目的：评价壳多糖脱乙酰度测定的减量法的影响因素。方法：通过实验评价碱量法的精准度及样本含潮量等因素对测定结果的影响,并对汪氏推荐计算公式和本文作者提出的改良公式作出评价。结果：碱量法测定壳多糖脱乙酰度受样本性状、含潮率、反应体系中酸量的影响。改良公式更能反映样本实际脱乙酰度。结论：碱量法简便易行,评价指标在可接受范围,可用于壳多糖研制中的质量评价。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。