Livin蛋白在急性淋巴细胞白血病儿童中的表达

目的探讨Livin蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学链霉素-抗生物素-过氧化物酶复合法(SP法)检测Livin蛋白在40例ALL和同期住院20例非白血病儿童的骨髓组织表达情况,分析其与儿童ALL发生发展的关系。结果ALL患儿40例骨髓组织中Livin蛋白阳性表达率为40%,较对照组(5%)明显增高,二者比较有统计学意义(P<0.05)。化疗16例患儿骨髓组织中7例完全缓解,其Livin蛋白阳性表达率明显低于未完全缓解者(P<0.05)。结论Livin蛋白在儿童ALL骨髓组织中高表达,Livin蛋白可能参与儿童ALL的发生发展和化疗耐受机制过程。     

Livin反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Livin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡和耐药的影响.方法设计合成特异性的Livin硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),脂质体(Lip)介导转染K562细胞,实验分为Lip-ASODN组、Lip-MSODN组、Lip对照组和细胞对照组4组,采用反转录-PCR法检测Livin mRNA的表达;四甲基偶氮唑蓝法与膜联蛋白V异硫氰酸荧光素法检测Livin ASODN与K562细胞增殖、凋亡及与高三尖杉酯碱(HHT)耐药的关系.结果 Livin ASODN可显著抑制K562细胞增殖(P<0.01),且作用具有时间和浓度依赖性.终浓度为600 nmol·L-1的Lip-ASODN能明显降低Livin mRNA表达,细胞凋亡率达(36.89±1.08)% (P<0.01),而Lip-MSODN组、Lip对照组与细胞对照组之间差异均无统计学意义(Pa>0.05).Livin ASODN可增加K562细胞对HHT的耐药性,半数抑制质量浓度为(0.37±0.02)mg·L-1;与HHT及小剂量阿糖胞苷联合应用可显著抑制细胞增殖(P<0.01).结论 Livin ASODN可下调Livin基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,增加K562细胞凋亡及其对HHT的敏感性.     

儿童脑胶质瘤Ki-67抗原表达及其意义

目的 研究Ki-67抗原在儿童脑胶质瘤中的表达与不同病理分类分级、肿瘤生长部位的关系.方法 对62例不同病理分类分级的儿童脑胶质瘤进行Ki-67免疫组织化学染色,观察Ki-67标记指数及染色程度.结果 胚胎性肿瘤的Ki-67标记指数(Ki-67 LI)显著高于其他腩胶质瘤(P<0.05);幕上胶质瘤的Ki-67 LI显著低于幕下胶质瘤(P<0.05);Ki-67 LI随脑胶质瘤恶性程度级别增高呈上升趋势,其中Ⅰ、Ⅱ、Iil级的Ki-67 LI显著低于Ⅳ级(P<0.05),且Ⅰ级的Ki-67 LI显著低于Ⅲ级(P<0.01);低级别胶质瘤(Ⅰ级和Ⅱ级)的Ki-67 LI显著低于高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)(P<0.01);低级别胶质瘤(Ⅰ级和Ⅱ级)的Ki-67阳性细胞核染色程度明显弱于高级别胶质瘤(Ⅲ级和Ⅳ级)(P<0.01).结论 Ki-67抗原是反映儿童脑胶质瘤细胞增殖活性较可靠的细胞增殖指标,可以为小儿脑胶质瘤病理分类分级提供一种有效的辅助方法,有助于更加客观地评价息儿的预后.     

核苷酸交叉互补基因1和B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因1在青少年儿童脑胶质瘤中的表达与放疗疗效及预后的关系

目的 探讨儿童及青少年胶质瘤组织中核苷酸交叉互补基因1(ERCC1)、B细胞特异单克隆鼠白血病毒整合位点基因1(BMI-1)的表达与胶质瘤放疗敏感性及预后的关系.方法 收集2000年1月-2006年2月初诊接受手术、单纯放疗或同期放化疗、由中山大学肿瘤防治中心病理确诊为胶质瘤的儿童及青少年患者肿瘤石蜡标本85例.采用免疫组织化学二步法检测ERCC1、BMI-1蛋白的表达,统计分析二者与胶质瘤患者临床病理特征、放疗疗效、术后总生存率的关系.结果 ERCC1、BMI-1蛋白在85例胶质瘤组织中的阳性率分别为32.9%(28例)、37.6%(32例);BMI-1在高级别胶质瘤中的表达显著高于低级别,差异有统计学意义(P=0.027).BMI-1、ERCC1高表达患者放疗有效率明显低于低表达患者(P=0.020,0.024).Kaplan-Meier生存分析显示ERCC1、BMI-1蛋白高表达患者术后总生存时间短于低表达患者(P=0.028,0.006).多因素Cox回归分析显示病理级别、术后行为状态评分、放疗疗效、BMI-1的表达是青少年儿童脑胶质瘤患者独立的预后因素(Pa<0.05).结论 ERCC1、BMI-1蛋白表达与胶质瘤放疗疗效相关,BMI-1蛋白高表达与胶质瘤的恶性程度及预后相关,是青少年儿童胶质瘤患者的独立预后指标.     

MDM2的表达与儿童非霍奇金淋巴瘤关系的研究

目的探讨儿童非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma, NHL)癌基因MDM2(murine double minute 2)的表达与NHL的关系.方法用免疫组化S-P法,检测NHL、对照组患儿病理组织MDM2蛋白的表达,用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测NHL、对照组病理组织和NHL外周血单个核细胞MDM2 mRNA的表达.结果 (1)MDM2蛋白表达率为64.5%,MDM2 mRNA表达率为61.3%,与对照组比较均有显著意义(前者P<0.05,后者P<0.01).(2)MDM2蛋白表达率与NHL工作分类、细胞源分类、性别、临床分期、结外侵犯位点间差异没有显著性(P>0.05);与B状态、乳酸脱氢酶增高间差异有显著性(P<0.05).MDM2 mRNA表达率与工作分类、细胞源分类、性别、临床分期间差异无显著性(P>0.05);与B状态间差异有显著性(P<0.05);与结外侵犯部位、LDH增高间差异有非常显著性(P<0.01).(3)病理组织MDM2 mRNA与MDM2蛋白过表达率、外周血MDM2 mRNA过表达率间进行比较,结果存在关联性(P>0.05,kappa=0.655和0.571),病理组织MDM2蛋白过表达率与外周血MDM2 mRNA过表达率间差异也存在关联性 (P>0.05,kappa=0.609)).结论(1)儿童NHL患者MDM2基因的过度表达率较高.(2)NHL MDM2蛋白的过表达率与mRNA过表达率的结果基本一致.(3)MDM2过表达与儿童NHL患者的不良状况、不良预后有关.     

TRAIL及其受体DR5在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中的表达和意义

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体5(DR5)在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中病变不同时期的表达及与细胞凋亡的关系.方法 建立病毒性心肌炎小鼠模型,于注射病毒后第7、10、14、21、28天取心肌组织,HE染色做心肌病理积分,TUNEL法检测凋亡细胞百分率,免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中TRAIL和DR5蛋白及mRNA的表达.结果 病毒感染组小鼠和正常对照组小鼠心肌组织中均存在TRAIL和DR5蛋白和mRNA的表达.病毒感染后第14天,病毒感染组小鼠心肌组织中TRAIL蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.05)和第7天病毒感染组(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(F=9.17,P<0.01).病毒感染后第10、14、21天,病毒感染组小鼠DR5蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=13.32,P<0.01).且TRAIL和DR5蛋白的表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡率密切相关(P<0.05).病毒感染组第10天TRAIL mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=10.86,P<0.01).病毒感染组第10、14天DR5 mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=22.75,P<0.01).结论 病毒性心肌炎小鼠发病中期,TRAIL及其受体DR5在心肌组织中出现高表达,且与病理积分、心肌细胞凋亡率成正相关,TRAIL及其受体DR5可能通过调控心肌细胞凋亡参与病毒性心肌炎的病理过程.     

Bad在地塞米松抑制嘌呤霉素诱导足细胞凋亡中的表达及意义

目的 观察嘌呤霉素(PAN)诱导和地塞米松(DEX)干预后足细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Bad表达的变化.方法 体外培养小鼠足细胞,将其分为对照组、PAN组和DEX组.对照组用含二甲基亚砜的RPMI-1640培养液培养;PAN组加入PAN;DEX组同时加入PAN和DEX.处理8 h、24 h和48 h后,用实时荧光定量聚合酶链式反应及Western blot分别检测各时间点Bad mRNA和蛋白的表达;用Annexin V-FITC/PI双染色法结合流式细胞仪检测足细胞凋亡率的变化.结果 1.PAN组各时间点Bad mRNA的表达均较对照组升高,并呈上升趋势,24 h和48 h时均显著升高(Pa<0.01);8 h时Bad蛋白表达与对照组比较无明显差异(P>0.05),24 h和48 h时均较对照组明显升高(Pa<0.05);各时间点足细胞凋亡率均较对照组升高,48 h时显著升高(P<0.01).2.DEX组Bad mRNA和蛋白的表达8 h时与PAN组比较无明显差异,但24 h时明显降低(P<0.05),各时间点足细胞凋亡率均较PAN组降低,24 h时显著降低(P<0.01).结论 PAN诱导足细胞后其凋亡率明显升高,可能与Bad mRNA及蛋白的表达增高有关,而DEX可能通过降低Bad mRNA及蛋白的表达减少足细胞的凋亡而抑制PAN的诱导,起到保护足细胞的作用.     

基质金属蛋白酶-7基因在幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病儿童胃黏膜中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-7(MMP-7)基因在幽门螺杆菌(Hp)相关性胃十二指肠疾病儿童胃黏膜中的表达。方法具有上消化道不适主诉症状的患儿96例(包括慢性胃炎66例及十二指肠溃疡30例),经上消化道内镜检查获取其胃窦黏膜活检标本。根据Sydney胃炎标准对HE染色的活检组织进行胃窦黏膜慢性炎症程度评价。以血清Hp-IgG抗体检测、胃黏膜PCR、尿素酶试验及组织学检查结果作为确定Hp感染状态的依据。患儿均采用RT-PCR法及免疫组织化学法检测其胃窦黏膜MMP-7的表达。结果96例患儿的Hp感染率为51.0%。免疫组织化学染色结果显示MMP-7主要在胃上皮细胞中表达。Hp感染者的胃窦黏膜MMP-7mRNA及蛋白的阳性表达率(87.8%及89.8%)与无Hp感染者的阳性表达率(70.2%及63.8%)比较差异均有统计学意义(Pa<0.05)。Hp感染者胃窦黏膜MMP-7mRNA表达水平较无Hp感染者高(P<0.05),其表达水平与胃窦黏膜的慢性炎症程度呈正相关(r=0.312,P<0.05)。结论Hp感染诱发儿童胃十二指肠疾病胃窦黏膜中MMP-7基因的表达,推测基因表达的增高是Hp感染的早期事件,其主要作用可能是促...     

TRAF1在儿童急性淋巴细胞白血病化疗中的诱导表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗不同阶段中的表达情况及临床意义。方法SABC免疫组化技术分别检测40例ALL患儿化疗前、后骨髓细胞中TRAF1蛋白,RT-PCR技术检测儿童ALL Molt-4细胞于化疗药物作用前后TRAF1 mRNA表达的变化。结果40例ALL患儿化疗前有3例TRAF1蛋白阳性表达(7.5%),经化疗诱导缓解后,TRAF1蛋白阳性表达22例(55%),两者差异具有统计学意义(P<0.01)。临床随访40例患儿中,并发脑膜白血病、耐药或复发患儿共10例,TRAF1阳性表达率为80%(8/10例),表达强度为 4例, 4例,与其余30例患儿相比差异具有统计学意义(P<0.05),TRAF1蛋白诱导表达阳性率及强度与化疗效应具有相关性。Molt-4细胞经化疗药物作用后,TRAF1 mRNA表达上调。结论化疗可以诱导ALL细胞TRAF1的表达,可能为以后耐药复发的内在因素。     

L-精氨酸对胎儿生长受限胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白及脐动脉血流的影响

目的 观察L-精氨酸对胎儿生长受限(FGR)脐动脉血流及胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白表达的影响,探讨L-精氨酸对FGR的疗效.方法 选择FGR患者60例,随机分为常规组30例和L-精氨酸组30例.孕期定期应用B型超声监测二组胎儿脐血流参数;分娩后称新生儿体质量,10 min内取胎盘中央组织,100 g/L甲醛固定后石蜡包埋,免疫组织化学法检测各组胎盘Bcl-2、Bax凋亡蛋白的表达.采用SPSS 11.5软件进行统计学分析.结果 L-精氨酸组新生儿平均出生体质量显著高于常规组(P<0.01).治疗后,与常规组比较,L-精氨酸组快速血流比值较高(P<0.05),搏动指数、阻力指数较低(Pa<0.05).常规组较L-精氨酸组Bax表达量相对增强,而Bcl-2表达相对减弱.结论 L精氨酸可降低胎盘细胞凋亡相关基因Bax蛋白的表达,增加Bcl-2的表达,减少胎盘细胞凋亡,改善胎盘功能,促进胎儿发育.