中药安迪对HL-60细胞分化的诱导作用

目的　探讨安迪粉针剂 (Andi)对 HL- 60细胞分化的诱导作用 .方法　采用人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,分为不加任何药物的对照组 (C组 )、安迪粉针剂 (Andi)组、阳性对照药维甲酸 (RA)组和苦参 (KS)组 ,进行体外培养和诱导分化 ,观测细胞生长曲线、细胞形态、硝基蓝四氮唑(NBT)还原和吞噬能力等指标 .结果　 2 mg· L-1 Andi可显著地抑制 HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有 NBT还原能力和吞噬功能 ;Andi为 68.0 % ,RA为 61 .5% ,KS为 59.0 % ,C组还原能力仅6.0 % (P<0 .0 1 vs C) .其形态的改变和吞噬能力与阳性对照药维甲酸 (RA)和苦参 (KS)相似 ,分别为 52 .0 % ,45.5%和56.5% (P>0 .0 5) ;均明显高于空白对照组 .C组吞噬功能仅7.5% (P <0 .0 1 vs C)其 NBT还原能力与 KS相当 (P >0 .0 5) .结论　 Andi对 HL - 60细胞具有显著的诱导分化作用     

普乐林诱导HL-60细胞分化和凋亡研究

目的 :研究中药葛根的提取物普乐林对HL 6 0细胞的诱导分化和促凋亡作用。方法 :采用硝基苯唑氮兰(NBT)还原、NBT/MTT值及细胞表面抗原CD11b表达 ,观察细胞分化程度 ;通过细胞形态、DNA片段电泳、流式细胞(FCM)DNA含量分析检测细胞凋亡。结果 :80 μg .ml 1,16 0 μg .ml 1和 32 0 μg·ml-1普乐林对HL 6 0细胞具有诱导分化效应 ;且 32 0 μg .ml 1普乐林与 1μmol.L 1全反式维甲酸效果相当。 32 0 μg .ml 1和 6 40 μg.ml 1普乐林分别作用HL 6 0细胞 36h ,可出现典型的细胞凋亡形态。DNA凝胶电泳出现片段化的梯状带谱 ;普乐林同时可影响HL 6 0细胞的细胞周期进展 ,且随其浓度的增高 ,亚G1期细胞所占比例增加。结论 :普乐林具有诱导HL 6 0细胞分化及凋亡的双重作用。     

正常骨髓基质细胞促进ATRA分化HL-60细胞的研究

目的 研究正常骨髓基质细胞(BMSCs)对全反式维甲酸(ATRA)诱导分化HL-60细胞的影响及其可能机制.方法 体外分离培养BMSCs,与HL-60细胞共培养.ATRA诱导悬浮的HL-60细胞分化,检测甲基蓝四氮唑(NBT)还原率,流式细胞仪测定CD11b、CD33抗原表达.结果 BMSCs与HL-60细胞共培养体系中,悬浮的HL-60细胞NBT还原率由原单独ATRA诱导分化的(84.36±4.22)%升高到(93.23±2.66)%(P＜0.05);CD11b表达由(65.97±3.18)%增至(90.54±0.97)%(P＜0.01);CD33表达由(78.79±0.83)%降至(52.25±2.21)%(P＜0.01).而基质细胞条件培养液(SCM)共培养体系中以上指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 BMSCs增强ATRA对HL-60细胞的诱导分化作用,并非通过分泌可溶性细胞因子,而可能是通过BMSCs与HL-60细胞间的相互作用,从而起到促进作用.     

人参炔醇对HL-60细胞体外诱导分化作用的研究

目的 通过细胞形态学和增殖动力学研究人参炔醇对HL—60细胞诱导分化作用。方法 采用台盼蓝染色及细胞计数器测定细胞存活量，流式细胞仪检测人参炔醇对细胞周期和分子标志表达的影响，观察信号通路阻断剂对人参炔醇诱导细胞分化的影响。结果 人参炔醇使HL—60细胞倍增时间延长，诱导HL—60向单核细胞分化，细胞集中于G1期，显著上调细胞表面CDl4分子表达，并中度上调CDllb分子表达，RpcAMPS及H7均可使人参炔醇诱导的HL—60细胞NBT阳性率降低。结论 人参炔醇诱导HL—60向单核细胞分化，与细胞内腺苷酸环化酶(cAMP)，蛋白激酶C(PKC)信号通路活化有关。     

中药抗癌制剂对HL-60细胞的分化诱导研究

以人早幼粒白血病细胞株 (HL - 60 )为靶细胞 ,运用中药抗癌制剂对其进行体外培养和诱导分化 ,发现剂量在 2 0ul/ml时 ,可显著地抑制HL - 60细胞增殖 ,使原始细胞分化为中幼以下的成熟细胞 ,分化后的细胞具有NBT还原能力和吞噬功能。其形态的改变和吞噬能力与对照组维甲酸和中药苦参相似 (P >0 0 5 ) ;其NBT还原能力与苦参相当 (P >0 0 5 ) ,但稍低于维甲酸 (P <0 0 5 )。上述结果表明该制剂对HL - 60细胞具有较好的分化作用。     

二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的细胞周期时相性研究

目的:探讨二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)诱导分化的HL-60细胞周期变化,进一步揭示细胞分化在细胞周期中特定的时相。方法:以分化诱导剂DMSO(终浓度为2.5%,v/v)影响下不同时间点的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志;碘化丙啶染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态,从而对已分化细胞进行确认;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态,进一步揭示药物诱导的细胞分化在细胞周期中的时相特异性;应用流式细胞术检测G₁期Ki67的表达水平。结果:随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大;48h后,被DMSO诱导细胞开始表达分化标志物CD11b,并出现细胞核型的变化。被诱导的HL-60细胞的细胞周期图出现G₀/G₁峰升高,S期水平下降。随着药物诱导时间的延长,G₁期Ki67的表达水平逐渐下降。只有在G₁期细胞中可见到已分化细胞。结论:DMSO可以诱导HL-60细胞周期的G₁早期→G₁晚期阻滞,并诱导HL-60沿着粒系方向分化,细胞分化完成于细胞周期中的G₁早期。     

HL-60细胞分化与凋亡关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞分化与凋亡的初步关系,指导白血病的联合化疗.方法NBT还原试验检测细胞分化、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及bcl-2、c-myc蛋白的表达,观察分别经ATRA、TPA诱导分化的HL-60细胞对VP-16的凋亡反应.结果与对照组相比,经ATRA、TPA分化的HL-60细胞bcl-2、c-myc蛋白表达都明显降低(P＜0.05),其中以TPA下调c-myc蛋白的幅度最大(76%);对VP-16的诱导反应,经TPA分化的HL-60细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),而经ATRA分化的细胞凋亡率则无明显变化(P＞0.05).结论HL-60细胞对VP-16的凋亡诱导反应与bcl-2、c-myc蛋白的下调表达程度有关;分化诱导剂ATRA与低剂量的VP-16联合应用可望改善AML的化疗效果,并且以后者先用效果更好.     

小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及增殖抑制作用

目的 研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响。方法 应用锥虫蓝排染法、生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长的影响；细胞分化根据细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来判断；细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，IC50为5．29(24h)，2．65(48h)，0．74(72h)mg／L。选择1，2，4，8mg／L小檗碱作用于HL-60细胞，动态观察发现HL-60细胞向成熟细胞分化：细胞核变小，核浆比减少；NBT还原能力显著增强；CD11b表达升高，4mg／L组CD11b阳性率高达85．1％。细胞周期分析发现，小檗碱处理后细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞明显减少。结论 盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖，并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化。     

HL-60细胞诱导分化过程中酸性磷酸酶活性的变化

研究结果表明,经 DMSO 诱导的 HL—GO细胞酸性磷酸酶活性升高不到2倍,出现第Ⅰ组同工酶;经 TPA 诱导后 AcP 活性升高4～5倍,并出现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组同工酶。超微结构观察发现,DMSO 处理的 HL—60细胞 AcP 活性局限在溶酶体及粗面内质网;TIPA 诱导的细胞 AcP 反应在溶酶体、粗面内质网、核周界及高尔基复合体膜囊等处均为阳性。结果提示,HL-60细胞 AcP 酶活性变化,对研究白血病细胞诱导分化有重要意义。     

骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察

利用透射电镜技术观察正常人骨髓造血基质细胞对HL－60细胞的逆转分化作用，从而探讨基质细胞对异常实质细胞的调控作用。结果表明：正常人骨髓造血基质细胞对人急性早幼粒白血病HL－60细胞株有逆转分化作用，表现在促分化和抑制增殖作用两方面。其机理主要以直接接触而发挥其调控作用。     

心脉隆注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 探讨心脉隆注射液体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经元样细胞分化的可行性。方法 采用贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,免疫细胞荧光法检测诱导后巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白2(MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果 流式细胞仪检测显示CD29、CD90阳性,CD34、CD45阴性。实验组诱导4、12h后Nestin阳性表达率分别为(81.0±1.6)%、(22.5±1.9)%,36h后Nestin阴性;诱导4h后NSE、MAP2阴性,12、36h后NSE阳性表达率分别为(73.5±2.2)%、(94.3±1.8)%,MAP2阳性表达率分别为(80.0±2.2)%、(96.4±2.8)%;诱导4、12、36h后GFAP阴性。结论 心脉隆注射液可在体外快速、高效地诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化。     

黄芩甙诱导大鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的研究

目的　探讨中药单体黄芩甙体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞的可行性。方法　以黄芩甙作为主要诱导剂 ,诱导成年大鼠骨髓基质细胞 6d。采用免疫细胞化学染色、蛋白质印迹 (WesternBlot)、逆转录PCR(RT PCR)法检测神经细胞、胶质细胞标记蛋白和mRNA的表达 ;原位末端标记染色评价细胞凋亡率 ;绿色荧光蛋白转染后 ,进行同种异体脑移植 ,观察诱导后细胞在脑内存活情况。结果　黄芩甙诱导 6d后 ,骨髓基质细胞形成较典型的神经细胞形态。诱导前骨髓基质细胞不表达神经细胞、胶质细胞标记蛋白和mRNA ;诱导 6h ,nestin出现暂时表达 ,诱导 6d表达神经细胞标记蛋白和mRNA ,不表达胶质细胞标记蛋白和mRNA。细胞凋亡率为 12 2 %± 2 8%。同种异体脑移植 14d ,移植物存活良好。结论　黄芩甙可以定向诱导骨髓基质细胞分化为神经细胞。     

大蒜油对环磷酰胺化疗小鼠白细胞减少症的预防作用

目的 探讨大蒜油 (GO) 对环磷酰胺（CP）化疗荷瘤小鼠白细胞减少症的预防作用。方法 60只昆明小鼠随机分为荷瘤模型组（Model组）、CP组、25μg/g GO+CP组（GO1+CP组）和50μg/g GO+CP组（GO2+CP组）,共4组。右侧腋窝下接种H22瘤细胞,连续给药13d 。观测体质量、瘤重、脾重、脾结节计数、外周血象、骨髓DNA含量、骨髓有核细胞计数及骨髓嗜多染红细胞微核率变化。结果 与Model组相比,CP组瘤重减少60.5%（P<0.05）,白细胞计数降低65.9%（P<0.05）,脾脏指数、脾结节计数、骨髓DNA含量、骨髓有核细胞计数分别降低了34.8%,63.1%,50.1%,64.3%（P<0.05）,骨髓微核率升高到40.2‰（P<0.05）。GO1+CP组和GO2+CP组抑瘤率分别为58.1%、62.0%,与CP组差异无统计学意义（P>0.05）。与CP组比较,GO2+CP组白细胞计数显著增加（P<0.05）,脾脏指数、脾结节计数、骨髓DNA含量、骨髓有核细胞计数分别升高了60.0%,161.3%,39.7%,140%（P<0.05）,其骨髓微核率降低至28.6‰（P<0.05）。结论 大蒜油在保证环磷酰胺抑瘤作用下,可明显减轻白细胞减少症等化疗副作用。     

维生素K2对HL-60细胞生长及凋亡、分化的诱导作用

目的：观察维生素K2(VK2)对HL-60细胞生长及凋亡、分化的诱导作用。方法：通过四氮唑蓝比色,细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察VK2对HL-60细胞的影响。结果：HL-60细胞经10／μmol/L以上浓度的VK2作用后增殖受到抑制,10μmol/L、20μmol/L VK2作用72h后,细胞形态呈现凋亡细胞的特征。5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L VK2作用于HL-60细胞72h凋亡率分别为7．16％、11．31％、20．36％,与对照组相比差异显著。G0/G1期细胞阻滞,CD14的表达与对照组相比无差异性。结论：VK2对HL-60细胞有生长抑制作用,能诱导HL-60细胞发生凋亡,具有一定的量效和时效关系,单独使用VK2的分化作用不显著。     

大蒜油在小鼠体内抗流感病毒作用

目的 探讨大蒜油在小鼠体内抗流感病毒的作用。 方法 小鼠经口给予低、中、高3个剂量［25、50、100 mg/(kg·d)］的大蒜油,之后接种流感病毒,分别为低、中、高剂量大蒜油组;同时设空白对照组、病毒对照组、溶剂对照组和阳性药对照组。观察大蒜油对小鼠流感模型的一般活动状态、体质量、肺脏、死亡率和平均存活时间的影响。 结果 与病毒对照组相比,低、中、高剂量大蒜油组和阳性药对照组的小鼠一般状态较好,体质量增加,肺部病变较轻,死亡率较低;与溶剂对照组比较,低、中、高剂量大蒜油组和阳性药对照组的小鼠平均存活时间较长(P<0.05)。 结论 大蒜油在小鼠体内有一定抗流感病毒作用。     

鼠尾草酸联合1,25-二羟基维生素D3诱导HL-60细胞分化作用的研究

目的 研究鼠尾草酸与1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]联合应用对HL-60细胞分化的影响.方法 通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,光学显微镜观察细胞形态,应用流式细胞仪测定细胞周期及成熟单核细胞分化标记CD14的表达,观察联合应用鼠尾草酸与低浓度1,25(OH)2D3对HL-60细胞的影响.结果 低浓度1,25(OH)2D3(1nmol/L)抑制HL-60细胞增殖、诱导细胞分化的作用与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).同浓度1,25(OH)2D3与10μmol/L鼠尾草酸联合处理HL-60细胞72h后,细胞形态具有成熟单核细胞特征、细胞增殖明显受抑制、细胞阻滞于G0/G1期、CD14的表达率为57.624%;其作用效应与对照组比较有显著性差异(P＜0.01),与单独应用高浓度1,25(OH)2D3(100nmol/L)组比较作用相似,无统计学意义(P＞0.05).结论 鼠尾草酸可增强1,25(OH)2D3对HL-60细胞的诱导分化、抑制增殖作用.     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。