内皮素-1对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响

 目的 观察内皮素-1（endothelin-1, ET-1）对紫杉醇诱导激素非依赖性前列腺癌细胞PC3凋亡的影响,并研究其机制。方法 采用人激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3,设对照组、紫杉醇组、紫杉醇＋ET-1组。流式细胞仪测定PC3细胞周期分布和凋亡细胞百分比。免疫沉淀(immunoprecipitation , IP)及Western blot检测PC3细胞Bcl-2、Bax和Bax /Bcl-2异二聚体的表达。结果 紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的G0-G1(%)高于紫杉醇组,G2-M(%)低于紫杉醇组,凋亡细胞百分比低于紫杉醇组,差异有统计学意义（P＜0.05）。紫杉醇＋ET-1组PC3细胞的Bcl-2磷酸化水平显著低于紫杉醇组,Bax /Bcl-2异二聚体水平显著高于紫杉醇组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 ET-1能逆转紫杉醇对PC3细胞的G2/M 期阻滞,并能通过影响Bcl-2磷酸化作用于细胞凋亡通路,减少细胞凋亡,从而降低激素非依赖性前列腺癌PC3细胞对紫杉醇的敏感性。     

激素非依赖性前列腺癌生物学机制的研究进展

2002年，美国前列腺癌(prostate cancer，PC)的新发病人数高达189000例。同年美国因PC死亡30200人，居该国男性癌症死亡率的第二位，近年来在中国的发病率也呈不断上升趋势。1941年，美国人Huggins和Hodges证实了施行睾丸切除术的雄激素剥夺疗法(androgen ablation theraphy，AAT)对PC有显著疗效，并因此而获得诺贝尔奖。从此，PC在治     

白黎芦醇对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3 Survivin蛋白表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(Res)对人激素非依赖性前列腺癌体外生长细胞PC-3的抑制作用及实现其抑制作用的可能途径。方法:按白藜芦醇浓度分为25,50,100和200 ttmoI/L 4个处理组和对照组(未加白藜芦醇),处理PC-3细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;MTT法检测细胞的增殖抑制情况;免疫组化sP法分析Sur-vivin蛋白的表达。结果:与对照组比较,白藜芦醇处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,白藜芦醇对PC-3细胞的增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,其中24 h组细胞存活率分别为86.2%,77.15%,60.89%和35.76%,48 h组细胞存活率分别为65.24%,59.76%,46.47%和27.77%,白藜芦醇处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对PC-3细胞的增殖抑制作用增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,Survivin蛋白在100 gmol/L白藜芦醇作用下较对照组表达明显减弱(P<0.01)。结论:白藜芦醇对体外生长的PC-3细胞有明显的抑制作用,下调Survivin蛋白表达而诱导前列腺癌细胞凋亡可能是其抑制肿瘤生长的机制之一。     

DIM增强去甲氧柔红霉素对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的 观察3,3-二吲哚基甲烷(DIM)与去甲氧柔红霉素(IDA)联合应用对人前列腺癌细胞(PC-3M)的生长抑制的作用并探讨其机制.方法 应用MTT法检测生长抑制率;流式细胞术及吖啶橙染色分析PC-3M细胞凋亡及细胞周期变化;分别用RT-PCR和Western印迹检测凋亡相关的半胱氨酸蛋白水解酶9(caspase 9)基因和蛋白的表达.结果 0.5 mg/L的IDA与60 μmol/L的DIM联用,使0.5 mg/L的IDA对肿瘤细胞生长抑制率由27.8%提高到69.9%;诱导凋亡的效应由3.2%提高到47.0%,相当10倍剂量(5 mg/L)IDA产生的效应.RT-PCR和Western印迹结果显示,两药联用明显增强caspase 9基因和蛋白的表达水平.结论 DIM能显著增强IDA对PC-3M细胞的生长抑制作用,其机制与凋亡诱导效应有关.     

光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞 PC3M的生长抑制作用

目的：探讨光活化的金丝桃素对人前列腺癌细胞PC3M的抑癌作用。 方法：用生长抑制试验和流式细胞技术观察给予金丝桃素后PC3M细胞的增殖、细胞周期和凋亡的变化。 结果：不同浓度的金丝桃素在体外可显著抑制PC3M细胞增殖（P<0.05）,药物浓度为0.5、1.0和2.0 mg•L^-1时,抑制率分别为21%、50%和91%;细胞周期出现S期阻滞,由S期进入M₂期的比例为零,并诱导PC3M细胞凋亡。 结论：金丝桃素可抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡影响

目的 观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别用0、10、20、30和40 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞存活率;选用0、5、10、20 μmol/L姜黄素作用PC-3细胞48 h后, Hoechst染色观察PC-3细胞形态的变化,Annexin V/PI检测细胞凋亡率.结果 姜黄素能显著抑制PC-3细胞的增殖(F=36.82,q=4.88～15.36,P<0.01);除0与5 μmol/L姜黄素组细胞凋亡率比较差异无显著性外,不同浓度姜黄素组之间细胞凋亡率比较差异有显著性(F=7.88,q=4.15～6.54,P<0.05).20 μmol/L 姜黄素作用PC-3细胞48 h后,倒置显微镜下可观察到部分凋亡细胞出现染色质凝集、核固缩、核碎裂等形态学改变.结论 姜黄素能显著抑制体外PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,为其应用于临床雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供了实验依据.     

吲哚-3-甲醇新衍生物I3C-6对宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的研究吲哚-3-甲醇（I3C）的一种新衍生物I3C-6对人类宫颈癌HeLa细胞生长的影响。方法采用MTT法和体外划痕法检测HeLa细胞的生长和浸润;采用流式细胞术检测对细胞周期的影响;采用DNA梯带凝胶电泳法检测细胞凋亡,采用Westernblot方法检测蛋白表达。结果I3C-6呈现剂量依赖性抑制HeLa细胞的生长,IC50剂量约为10μmol/L。I3C-6处理HeLa细胞后出现显著的细胞凋亡峰（SubG1峰）。DNA凝胶电泳结果也提示I3C-6处理的细胞出现明显的凋亡DNA片段。I3C-6可下调Bcl-2蛋白的表达,并上调Bax蛋白的表达。结论I3C-6可以抑制人类宫颈癌HeLa细胞生长,这与其诱导的细胞凋亡、细胞周期抑制以及凋亡蛋白调节有关。I3C-6可能是一种有效的抗宫颈癌药物和辅助治疗药物。     

米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌LNCaPC_(4-2)和PC3细胞的作用机制

为探讨抗孕激素药米非司酮对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 、PC3的促凋亡及生长抑制作用 ,将不同浓度的米非司酮加入到体外培养的 2株前列腺癌细胞中 ,分别在培养后 3d、5d、7d用SRB染色法检测细胞生长抑制率 ;用流式细胞仪检测加药后 2 4h、48hLNCaPC4 2 和PC3细胞凋亡情况。发现 :高浓度米非司酮 ( 2 0μmol/L)对雄激素非依赖性细胞株LNCaPC4 2 、PC3于 3d、5d、7d的细胞生长抑制率分别为 5 5 .79%、66.3 7%、71 .5 4%和 87.42 %、98.1 5 %、1 0 0 %。不同浓度米非司酮即 2 .5、5、1 0、1 5、2 0 μmol/L对LNCaPC4 2 、PC3细胞株 7d时的细胞生长抑制率分别为 1 7.0 7%、3 5 .77%、5 3 .66%、63 .41 %、71 .5 4%和 48.2 5 %、63 .42 %、82 .3 7%、95 .3 1 %、1 0 0 %。前列腺癌细胞株LNCaPC4 2 受 1 5 μmol/L米非司酮作用 2 4h和 48h细胞凋亡率分别为 1 9.3 0 %、3 0 .0 4% ;PC3受米非司酮 1 5 μmol/L作用 2 4h细胞凋亡率为 44.5 2 %。提示 :米非司酮对LNCaPC4 2 、PC3细胞株有时间和剂量依赖的生长抑制作用 ,其生长抑制作用是通过促进细胞凋亡实现的。     

DIM对胃癌细胞SGC-7901体外增殖与侵袭的抑制作用

目的 探讨3,3-二吲哚基甲烷(3,3-Diindolylmethane,DIM)对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的抑制作用.方法 用MTT法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L) DIM对胃癌细胞SGC-7901生长抑制情况;Transwell小室检测40 μmol/L的DIM对胃癌SGC-7901细胞侵袭力的影响,Western blot检测胃癌细胞中血小板源性生长因子-D(PDGF-D)和β-catenin蛋白表达的变化,ELISA法检测培养液上清中MMP-2、MMP-9的浓度.结果 不同浓度的DIM对胃癌细胞SGC-7901均有抑制作用(P＜0.05),随着药物浓度增加,抑制作用增强;但40 μmol/L和80 μmol/L差异无统计学意义(P＞0.05).40μmol/L的DIM作用24 h后胃癌细胞SGC-7901侵袭力下降75.2％(125.4 ±10.8 vs 31.1 ±4.5,P＜0.05),PDGF-D和β-catenin的表达分别下降了55.8％和52.5％(P＜0.05),培养液上清中的MMP-2、MMP-9的浓度明显下降(23.5 ±2.6 vs 13.2 ±1.9;30.4 ±2.4 vs 15.8±2.1,P＜0.05).结论 DIM对胃癌细胞的增殖和侵袭有抑制作用,其机制可能与PDGF-D、β-catenin、MMP-2、MMP-9的表达下降有关.     

吲哚-3-甲醇对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖和凋亡的影响

目的 探讨吲哚-3-甲醇(13C)对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度的I3C(100、150、200、250、300、350 μmol/L)处理细胞48 h后,显微镜下观察细胞生长状况;采用WST-1法检测细胞增殖情况,Hoehest33258染色、TUNEL染色检测细胞凋亡情况,Western blot法检测凋亡相关蛋白.结果 I3C能够抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,处理浓度在250 μmol/L以下时,细胞生长变慢;处理浓度达到300μmol/L时,大量细胞凋亡.I3C浓度高于200 μmol/L时CytC、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3蛋白表达明显增加,且随着I3C浓度的增加三种蛋白的表达也明显增加.结论 I3C在体外实验条件下可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖并诱导其发生凋亡.     

Androgen receptor functioned as a suppressor in the prostate cancer cell line PC3 in vitro and in vivo

Background Prostate cancer is one of the most common urogenital tumors in the world with an increasing incidence in China. Androgen deprivation therapy is the major therapeutic option for advanced prostate cancer. However, the role of androgen receptor （AR） in hormone-refractory prostate cancer still remains unclear. This work aimed to investigate the role of AR in an androgen independent prostate cancer cell line by in vitro and in vivo studies.
Methods The role of AR in the proliferation and invasion/metastasis ability of PC3-AR9 （a PC3 stable clone expressing human AR driven by natural human AR promoter） were examined with M-IF assay, soft agar assay, chamber invasion assay, wound healing assay, and also with orthotopic xenograft mouse model. Results Restoring androgen receptor in PC3 cells resulted in decreased proliferation and invasion/metastasis ability in MTT, soft agar, chamber invasion and wound healing assay. In the mouse orthotopic xenograft model, PC3-AR9 resulted in smaller primary tumors and metastasis tumors, with a lower proliferation rate and higher apoptosis rate.
Conclusion The AR might function as a tumor suppressor in PC3 cells both in vitro and in vivo.     

双氢青蒿素对前列腺癌PC-3细胞体内生长及Caspase-3表达的影响

目的：研究双氢青蒿素（DHA）对前列腺癌PC-3细胞裸鼠种植瘤生长的抑制作用及对半胱天冬酶_3（Caspase-3）表达的影响,并探讨其可能的作用机制．方法：采用人前列腺癌PC·3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机分为对照组,二甲基亚砜（DMSO）溶剂组,DHA0．1,0．2mmo/kg组．各组经13d干预后,计算抑瘤率;光镜及电镜观察肿瘤组织形态学变化,以Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡,免疫组织化学法检测Caspase-3的表达水平．结果：DHA0．1,0．2mmol／kg组瘤质量明显〈对照组及DMSO溶剂组（P〈0．05）,DHA0．1,0．2mmol／kg组抑瘤率分别为69．221％,63．186％．光镜及电镜可观察到典型的凋亡细胞和凋亡小体;Hoechst33258染色可见DHA0．1,0．2mmol／kg组凋亡细胞明显增多,其凋亡细胞密度显著增大（P〈0．05）;免疫组化结果显示,DHA0．1,0．2mmol/fkg组Caspase-3表达明显升高（P〈0．05）．结论：DHA能够抑制前列腺癌PC．3细胞裸鼠种植瘤的生长,其机制可能与上调凋亡相关基因Caspase-3表达有关．     

川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用及其机制

检测川陈皮素对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,探讨其作用机制。     

雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选

目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法。方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer, ADPC) 细胞株LNCaP 和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer, AIPC) 细胞株PC-3 膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC 和AIPC 患者的血清各3 例交叉孵育,行Western 印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证。结果:共获得11 个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor, Claudin-4 等);细胞免疫荧光结果显示Claudin-4 在LNCaP 和PC-3 细胞存在明显差异,在ADPC 组织中阳性表达率(34.3%) 低于AIPC 组织中阳性表达率(72.4%, P<0.05)。结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性;Claudin-4 可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

Inhibitory Effect of Matrine on the Expression of PSA and AR in Prostate Cancer Cell line LNCaP

In order to investigate the inhibitory effect of matrine on the expression of prostate specific antigen （PSA） and androgen receptor （AR） in prostate cancer cell line LNCaP in vitro, LNCaP cells were treated with matrine at different concentrations （0.5, 1.0, 1.5, 2.0 g/L） for 12-36 h. The growth activities of cancer cells were determined by MTT colorimetric assay. The AR level was measured by Western blotting. The expression of PSA was detected by using AXSYM system-chemical luciferase methods. The results showed that matrine could effectively inhibit the growth of androgen-dependent prostate cancer cell line LNCaP in vitro in a time-and dose-dependent manner （P〈0.05）. It could obviously decrease the level of AR （P〈0.01） and inhibit the expression of PSA in a dose-dependent manner （P〈0.05） in LNCaP cells. It was concluded that matrine could significantly suppress the growth of LNCaP cells and inhibit the expression of PSA and AR of prostate cancer cells.     

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用.方法 使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48 h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果 转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P＜0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30 vs 227±38;迁移:122±13、121±47 vs 277±32,P＜0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48 h时差异有统计学意义(P＜0.05),而且细胞凋亡明显增加.结论 以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据.     

丁酸钠对前列腺癌PC-3M细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究丁酸钠对前列腺癌PC-3M细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用。 方法：前列腺癌PC-3M细胞经不同剂量丁酸钠作用后,相差显微镜观察细胞形态变化,MTT测定丁酸钠对PC-3M细胞的增殖抑制率,吖啶橙/溴化乙锭染色检测凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡峰。 结果：丁酸钠对PC-3M细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性;并使PC-3M细胞产生凋亡形态学变化;细胞周期被阻滞于G₁/G₀期和G₂/M 期,S期细胞减少,有亚G₁峰出现。结论：丁酸钠对PC-3M细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。     

雄激素受体反义RNA抑制前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的研究

目的　观察雄激素受体 (Androgenreceptor ,AR)反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的影响。方法　分别用细胞平板克隆形成试验及裸鼠接种实验观察前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPNeo和LNCaPas AR 细胞致瘤性的变化。结果　LNCaPas AR细胞的克隆形成效率显著低于LNCaPNeo细胞 (P <0 .0 1)。LNCaPas AR细胞在雄性裸鼠体内形成的瘤体体积明显小于LNCaPNeo细胞并且形成瘤体的时间延长。结论　雄激素受体反义RNA可抑制前列腺癌细胞LNCaP成瘤能力。     

20(s)-原人参二醇对体外培养的人前列腺癌PC3细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：观察20 (s)-原人参二醇 (PPD) 对体外培养的人前列腺癌（PCa）PC3 细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法：将体外培养的PC3 细胞分为对照组及 20、30和40 μmol?L-1PPD组。采用PPD处理细胞48 h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖抑制情况,采用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡情况,并通过Western blotting方法检测 Bcl-2、Bax和γH2Ax蛋白的表达情况。结果：不同剂量PPD处理后,PC3细胞变圆回缩并出现碎片,AO/EB染色呈现不同程度的黄绿色;不同剂量PPD作用后,各组细胞增殖抑制率均显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量PPD作用PC3细胞48 h后,Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达变化不明显,γH2Ax蛋白表达上调(P<0.05)。结论：PPD可诱导PC3细胞凋亡,其作用机制可能与 Bcl-2、Bax信号通路以及DNA断裂基因γH2Ax蛋白表达上调有关。