葛根素对火药烟雾致支气管上皮细胞损伤的防护效应

目的 研究火药烟雾损伤支气管上皮细胞模型中炎性细胞因子IL-8和IL-6的变化,以及葛根素对上述损伤的防护作用.方法 用不同浓度(100、50、25、12.5μg/ml)的葛根素预处理细胞后,建立火药烟雾损伤支气管上皮细胞(BEAS-2B)模型.采用MTT法检测火药烟雾对细胞存活率的影响,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8和IL-6的浓度.结果 以正常对照组细胞存活率作为100％,火药烟雾刺激后,BEAS-2B细胞的存活率下降至48.53％±4.44％,加入葛根素后细胞存活率明显提高,且呈剂量依赖性;细胞培养上清液中IL-8(P＜0.05)、IL-6(P＜0.01)浓度升高.加入葛根素后,IL-8、IL-6浓度逐渐下降(P＜0.05),亦呈浓度依赖性.结论 火药烟雾可致体外培养支气管上皮细胞存活率降低并促进炎性细胞因子IL-8和IL-6分泌,中药葛根素可逆转这种损伤效应.     

葛根素对黑火药烟雾诱导支气管上皮细胞IL-8和IL-6基因表达的抑制作用

目的研究葛根素对黑火药烟雾诱导支气管上皮细胞表达IL-8及IL-6基因的抑制作用。方法用黑火药烟雾刺激支气管上皮细胞,用实时PCR方法定量检测黑火药烟雾刺激后支气管上皮细胞中IL-8及IL-6基因表达水平的变化;黑火药烟雾刺激前支气管上皮细胞培养液中加入葛根素,观察葛根素对黑火药烟雾刺激支气管上皮细胞表达IL-8及IL-6基因的抑制作用。结果烟雾刺激24 h后,IL-6及IL-8基因表达分别增加1.534±0.653倍和2.231±0.054倍;支气管上皮细胞在烟雾刺激前8 h加入不同浓度葛根素培养,黑火药烟雾诱导IL-6和IL-8的基因表达被显著抑制,并呈剂量依赖性。结论黑火药烟雾可诱导支气管上皮细胞炎性细胞因子IL-6、IL-8 mRNA表达增加,葛根素可抑制黑火药烟雾刺激支气管上皮细胞炎性细胞因子IL-6、IL-8 mRNA表达。     

葛根素对支气管上皮细胞和中性粒细胞共培养体系中黏附分子表达的影响

目的 探讨葛根素抑制支气管上皮细胞(BEAS-2B)与中性粒细胞(NEU)的相互作用进而调控气道炎症反应的机制.方法 实验分为BEAS-2B单独培养组、NEU单独培养组、BEAS-2B+NEU共培养组、BEAS-2B+NEU+50μg/ml葛根素共培养组、BEAS-2B+NEU+100μg/ml葛根素共培养组、BEAS-2B+NEU+200μg/ml葛根素共培养组,应用流式细胞术检测BEAS-2B和NEU两种细胞中胞间黏附分子ICAM-1、ICAM-3蛋白的表达,Real-time PCR检测两种细胞中ICAM-1、ICAM-3 mRNA的表达.结果 与单独培养组相比,BEAS-2B+NEU共培养组中BEAS-2B细胞ICAM-1、ICAM-3及NEU细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达均明显增强(P＜0.05,P＜0.01),而NEU细胞ICAM-3蛋白和mRNA表达无明显改变(P＞0.05).在BEAS-2B+NEU共培养体系中分别加入50、100、200μg/ml葛根素干预后,流式细胞术检测显示仅葛根素浓度为200μg/ml时BEAS-2B细胞ICAM-1蛋白表达显著低于BEAS-2B+NEU共培养组(P＜0.05),余与BEAS-2B+NEU共培养组比较差异均无统计学意义,而Real-time PCR检测显示,除NEU细胞的ICAM-3 mRNA与BEAS-2B+NEU共培养组比较差异无统计学意义外,余均显著低于BEAS-2B+NEU共培养组(P＜0.05,P＜0.01).结论 葛根素可有效抑制BEAS-2B与NEU共同培养诱导的BEAS-2B及NEU细胞ICAM-1、ICAM-3基因和蛋白的表达.     

葛根素对支气管上皮细胞和中性粒细胞共培养体系VCAM-1表达的影响

目的探讨葛根素抑制支气管上皮细胞(BEAS-2B)与中性粒细胞(NEU)相互作用调控气道炎症反应的机制。方法应用流式细胞仪(FCM)检测BEAS-2B细胞和NEU细胞表面血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的蛋白质合成;应用实时PCR方法检测上述细胞中VCAM-1的基因表达。结果 BEAS-2B细胞和NEU细胞共同培养组中BEAS-2B表面的VCAM-1平均荧光强度显著高于BEAS-2B单独培养组,共同培养组中NEU表面的VCAM-1平均荧光强度也显著高于NEU单独培养组。共同培养组中BEAS-2B细胞和NEU细胞各自VCAM-1基因表达水平均明显上调。不同浓度葛根素干预后BEAS-2B细胞和NEU细胞的VCAM-1基因表达显著下调,BEAS-2B细胞和NEU细胞表面VCAM-1蛋白质相应减少。结论葛根素可有效抑制BEAS-2B与NEU共同培养诱导的BEAS-2B细胞和NEU细胞中VCAM-1基因及降低其细胞表面蛋白质平均荧光强度。     

肿瘤坏死因子在内毒素诱导小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡中的作用

肺泡上皮细胞具有许多重要的功能 ,包括调节表面活性物质代谢、离子转运以及损伤后肺组织修复等[1 ] 。细菌内毒素 (ＬＰＳ)是革兰阴性菌引起的急性肺损伤的重要致病因素。研究表明 ,急性肺损伤可导致肺血管内皮细胞和上皮细胞凋亡[2 ] 。然而 ,ＬＰＳ对肺泡Ⅱ型上皮细胞 (ＡＥＣⅡ )的损伤效应和机制尚有待阐明。继往研究提示 ,肿瘤坏死因子(ＴＮＦ)在体外可诱导内皮细胞凋亡[3 5] 。但ＴＮＦ在ＬＰＳ诱导的ＡＥＣⅡ凋亡中的作用至今仍不清楚。笔者旨在明确内源性ＴＮＦ在ＬＰＳ诱导ＡＥＣⅡ凋亡中的作用。一、材料与方法1.试剂和实验动物 …     

吸入一氧化氮对犬烟雾吸入性损伤早期治疗的影响

吸入一氧化氮对犬烟雾吸入性损伤早期治疗的影响齐顺贞杨宗城刘志远何保斌傅琼芳黎鳌近年来，吸入一氧化氮（ＮＯ）治疗某些肺部疾病的研究取得了可喜进展［１］．为评价其治疗效果，笔者观察了吸入０．００４５％（４５ｐｐｍ）ＮＯ对犬烟雾吸入性损伤早期的影响．材料与...     

H2S对烟雾吸入肺损伤大鼠的抗氧化作用研究

1 资料与方法 1.1 实验动物及分组 清洁级健康成年雄性SD大鼠24只,体重150～250g,由军事医学科学院实验动物中心[SCXK-(军)-2012-0004]提供,海军总医院实验动物中心[SCXK-(军)-2012-0012]饲养.按照随机化原则将动物分为对照组、烟雾组、烟雾+H2S 3h组、烟雾+H2S 6h组,每组6只.     

黑火药烟雾致吸入性肺损伤大鼠模型的建立与评价

目的 构建黑火药烟雾所致吸入性肺损伤大鼠模型并对其进行评价.方法 分析黑火药烟雾成分,建立吸入性肺损伤大鼠模型.42只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和建模后1、2、6、24、48、96h组(n=6),检测各组大鼠动脉血气的变化,测定肺湿/干比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及蛋白含量,并取肺组织行大体及镜下病理组织学观察.结果 黑火药烟雾成分主要为CO2和CO,且12min内浓度稳定.大鼠吸入烟雾后表现为低氧血症,COHb于吸入后1h达峰值(P＜0.05),W/D于2h达峰值(P＜0.05),吸入后24h内BALF白细胞数呈进行性增加(P＜0.05),蛋白含量显著增高(P＜0.05).病理观察可见肺组织出血、水肿及炎性细胞浸润,呈急性肺损伤表现,至吸入后96h仍未恢复.结论 通过黑火药烟雾暴露可成功建立大鼠吸入性肺损伤模型,且具有易复制、稳定、可靠的优点,可用于战场环境下吸入性肺损伤的实验研究.     

中药组合物对氡暴露小鼠肺组织及支气管上皮细胞损伤的防护作用

目的:在体内外实验中探讨中药组合物夏丹芪(冬虫夏草、丹参、黄芪)对小鼠氡暴露肺组织损伤的防治效果。方法:建立氡暴露小鼠模型,分为健康对照组、氡暴露组和夏丹芪干预氡暴露组,每组6只。HE和Masson染色观察120 WLM时各组小鼠肺组织病理变化,免疫组织化学法检测肺组织α-SMA蛋白和Vimentin蛋白表达;超氧化物...     

幽门螺杆菌的致病因子致胃上皮细胞凋亡的研究进展

胃上皮细胞凋亡与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染有关。H.pylori感染诱发胃粘膜上皮细胞凋亡是一个由多种因素引起、多种分子参与的复杂过程,到目前为止,其机制尚未完全阐明。本文就近年来国内外有关H.pylori的致病因子在胃上皮细胞凋亡中的作用机制作一综述。     

人气道上皮细胞的体外原代培养研究

目的 探索简单有效的人原代气道上皮细胞培养方法 .方法 以人肺叶或肺段支气管为取材对象,用蛋白酶ⅩⅣ消化 机械刮刷法分离肺叶或肺段支气管上皮细胞,并与蛋白酶ⅩⅣ消化 机械剥离法、胰酶消化 机械刮刷法比较分离的细胞数、纯度及成活率,同时比较含必需营养因子的DMEM/F12无血清培养与有血清培养时的细胞纯度及成活率.角蛋白AE1/AE3免疫组化鉴定培养的细胞.结果 蛋白酶ⅩⅣ消化 机械刮刷法组分离的细胞数为(9.37±1.62)×105,而蛋白酶ⅩⅣ消化 机械剥离法组为(5.20±0.75)×105,二者比较差异显著(P＜0.01);蛋白酶ⅩⅣ消化 机械刮刷法组分离的细胞成活率及纯度均高于胰酶消化 机械刮刷法组(94.3% vs 85.7%,92.5% vs 83.0%,P＜0.05);无血清培养的成活率及纯度均高于有血清培养(90.7% vs 82.1%,95.5%vs 83.0%,P＜0.01);培养的细胞角蛋白AE1/AE3染色阳性.结论 蛋白酶ⅩⅣ消化 机械刮刷法分离肺叶或肺段支气管上皮细胞,并用含营养因子的DMEM/F12无血清培养是一种简单有效的人原代气道上皮细胞培养方法 .     

葛根素联合依达拉奉对烟雾所致吸入性肺损伤大鼠的治疗作用

目的探讨葛根素联合依达拉奉对黑火药烟雾所致吸入性肺损伤大鼠的治疗作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(N组)、吸入性肺损伤组(X组)、葛根素组(P组)、依达拉奉组(E组)、联合用药组(L组),每组8只。除正常对照组外,其余各组大鼠使用自制发烟装置构建吸入性肺损伤模型,依达拉奉组造模成功后30min腹腔注射依达拉奉(9mg/kg)1次,第2天给药1次,共2次;葛根素组造模成功后30min注射葛根素(100mg/kg)1次,每天给药1次,共6次;联合用药组造模成功后30min注射依达拉奉(9mg/kg)1次,第2天给药1次,共2次,注射葛根素(100mg/kg)1次,每天给药1次,共6次;正常对照组和吸入性肺损伤组腹腔注射生理盐水(12ml/kg),每天1次,共6次。建模后第6天大鼠腹主动脉取血,检测动脉血气指标,并采用ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10的水平;留取肺组织制备肺组织匀浆,测定其蛋白含量及髓过氧化物酶(MPO)活性;取部分右肺组织,HE染色后观察肺组织病理学变化。结果血气分析结果显示,P﹑E﹑L组大鼠Pa O2均明显高于X组(P<0.05),且E、L组明显高于P组(P<0.05),而L组Pa CO2水平明显低于X组及E组(P<0.05)。P﹑E﹑L组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10水平及肺组织匀浆蛋白含量、MPO活性均明显低于X组(P<0.05),且E﹑L组血清TNF-α、IL-6水平及肺组织匀浆蛋白含量、MPO活性明显低于P组,血清IL-10水平明显高于P组(P<0.05),L组血清TNF-α、IL-6水平及肺组织匀浆蛋白含量明显低于E组(P<0.05)。光镜观察显示,与X组比较,P﹑E、L组肺组织水肿减轻,炎性细胞浸润减少,且L组更显著。结论依达拉奉联合葛根素可能通过减少部分炎症介质的产生和释放,减轻烟雾吸入性肺损伤大鼠体内的炎症反应,对肺组织起到一定的保护作用,且联合用药比单独用药的效果更好。     

α粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D癌变克隆的细胞遗传学分析

目的 :分析α_粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化细胞克隆的核型 ,探讨辐射致癌的细胞遗传学变化规律。方法 :1.5Gyα粒子照射BEP2D细胞恶性转化后进行亚克隆 ,用G带显示法分析亚克隆细胞核型。结果 :分析了 5个恶性转化亚克隆细胞 (BERP35T_1,_2 ,_4 ,_5 ,_6 ) ,基本核型与亲本细胞BEP2D相近 ,但有着明显的染色体缺失差异。BERP35T癌变细胞系缺失 1条 13号染色体和Y染色体 ;1条 2号染色体的长臂增加 ;缺失正常的12号染色体 ,出现 1条长臂增加的 12号染色体。此外 ,2株癌变细胞 (BERP35T_2和BERP35T_4 )多倍体高达 4 0 % ,明显高于BEP2D细胞。结论 :染色体缺失 (尤其是 13号染色体缺失 )是辐射致癌的一个显著遗传学特点 ,2号和 12号染色体长臂增加可能导致某些肿瘤相关基因的扩增或激活 ,促进细胞的恶性转化。     

爆炸及火药燃烧致吸入性肺损伤大鼠实验模型的建立

目的建立一种爆炸及火药燃烧致大鼠吸入性肺损伤的动物模型。方法在火灾模拟平台基础上改装并设计制作爆破箱及致伤室,在线进行烟雾分析;观察动物的临床表现、肺含水率、动脉血气分析、肺大体观及病理改变,了解肺损伤程度。结果烟雾成分包括CO、SO2、NO、NO2,致伤时烟雾中CO浓度(505±23)ppm,SO2浓度(67±4·8)ppm(1ppm=1×10-6,v/v),致伤时间为4min。多数大鼠伤后立即出现呼吸急促,随后呼吸减慢,呼吸困难。伤后早期为代谢性酸中毒,后期为代谢性酸中毒合并呼吸性酸中毒。肺含水率逐渐增加,6h达到高峰,24h仍未恢复正常。肺大体观及病理证实为肺损伤,且4h时出血明显,6h时水肿达高峰,24h仍未恢复。结论成功地建立了爆炸及火药燃烧致大鼠吸入性损伤的动物模型,该模型保证了伤情的稳定,且具有易于复制、重复性好的优点,适用于各种吸入性损伤的实验研究。     

活性氧在热打击诱导肠上皮细胞凋亡中的作用

目的 观察热打击对大鼠肠上皮细胞(IEC-6)氧化应激反应、溶酶体损伤及细胞凋亡的影响,探讨中暑热损伤过程中肠道损伤的机制.方法 将IEC-6细胞分为对照组(细胞仅置于37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育)、热打击组(细胞置于43℃、5%CO2细胞培养箱中1h,之后分别置于正常细胞培养箱中继续孵育0、1、3、6、12h)、药物干预组(于热打击前分别采用溶酶体抑制剂E-64和活性氧清除剂NAC预处理细胞1h).采用DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)的表达,吖啶橙(AO)染色法检测溶酶体膜稳定性,AnnexinⅤFITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,CCK-8法检测细胞活力.结果 与对照组比较,热打击后复温1h即导致IEC-6细胞活力下降,凋亡增加,且在复温后12h时最为明显(P<0.05);热打击后即刻即引起细胞内ROS表达及"苍白细胞"数量增加,且在复温后12h时最为明显(P<0.05).与热打击组比校,采用NAC对细胞进行预处理可明显提高热打击后细胞活力,减轻溶酶体损伤,并降低细胞凋亡率(P<0.05);采用E-64对细胞进行预处理可明显提高热打击后细胞活力,并降低细胞凋亡率(P<0.05).结论 ROS介导了热打击诱导肠上皮细胞凋亡的调控,这可能是中暑导致肠道黏膜屏障功能损伤的重要机制之一.     

氡与香烟烟雾染毒诱发BEAS-2B细胞的体外转化

目的 通过氡与香烟烟雾体外染毒诱发细胞恶性转化,建立氡与吸烟致肺癌发生的细胞模型。方法 将永生化人支气管上皮细胞系BEAS-2B 分为对照组(C 组)、氡染毒组(Rn 组)、烟雾染毒组(Sm 组)、联合染毒组(Rn+Sm 组),细胞以每孔1×10⁵ 个接种于Transwell 培养皿,氡或香烟烟雾持续泵入直接对细胞染毒。检测细胞恶性转化情况。结果 BEAS-2B 细胞经氡及香烟烟雾和联合染毒后发生形态学改变,细胞生长失去接触抑制,染氡组、烟雾染毒组、联合染毒组第5 染毒代细胞传代20 代后获得对血清诱导末端分化的抗性,克隆形成率相对值由0.31±0.18 上升至1.92±0.27、2.03±0.14、2.95±0.60,同时该代细胞锚着独立性生长能力也由(0.01±0.02)% 上升至(4.89±0.30)%、(8.36±0.50)%、(11.74±0.69)%。染氡组、烟雾染毒组、联合染毒组第5 染毒代细胞传代20 代后凋亡率由(11.76±0.17)%降低至(4.62±0.42)%、(8.63±0.15)%、(3.68±0.33)%。结论 氡与香烟烟雾单独及联合染毒均能诱发 BEAS-2B 细胞体外转化,且联合染毒导致损伤效应更加显著,可作为研究氡及吸烟致肺癌的细胞模型。