补铁对生长发育期铅接触大鼠血脑屏障通透性的影响

目的: 探讨补铁对生长发育期慢性铅接触大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性及内皮细胞紧密连接蛋白的影响.方法: 选择 21 d龄的雄性SD大鼠38只,随机分为对照组(n=10)、染铅组(n=14)和补铁且染铅组(n=14).除对照组外,其他两组均自由饮用含400 mg/L的Pb(AC)2水溶液;补铁且染铅组以20 mg/kg浓度的FeSO4水溶液隔日进行ig,其他两组以相同的方法隔日用去离子水ig.饲养6 wk后,检测大鼠的血红蛋白和血铅含量,用硝酸镧示踪法观察血脑屏障的通透性,并测定脑组织内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达.结果: 补铁且染铅组与染铅组相比,大鼠的血红蛋白含量显著增高(P<0.05),血铅含量显著降低(P<0.05);电镜下观察可见,染铅组大鼠毛细血管内的镧盐颗粒穿过血脑屏障进入到脑组织内,而补铁且染铅组与对照组均未见镧盐颗粒渗透过血脑屏障.同时,补铁且染铅组内皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达水平与染铅组相比明显增加.结论: 生长发育期铅接触可使血脑屏障通透性增加,脑毛细血管内皮细胞紧密连接蛋白occludin表达降低可能是血脑屏障通透性改变的主要分子机制之一;铅接触的同时适量补充铁元素,可保护由慢性铅接触所造成的血脑屏障紧密连接的损伤.     

高持续性+Gz重复暴露对大鼠血脑屏障通透性的影响

观察在离心机高Ｇ值反复作用下，血脑屏障通透性的变化特点，为高Ｇ值作用下脑功能改变的解释提供生理学依据．方法：选雄性大鼠２０只，分为对照组及＋Ｇｚ暴露后不同时间组，实验组经增长率为１Ｇ／ｓ，持续３ｍｉｎ的＋１０Ｇｚ暴露３次，立即经大鼠心脏灌注镧固定液，开颅取脑，制成切片，置透射电镜下观察．结果：＋Ｇｚ重复暴露３次后即刻，即见镧颗粒通过少数开放的毛细血管内皮细胞间的紧密连接，沉积于血管外围；暴露后１ｈ及６ｈ，可见大部分毛细血管内皮细胞间的紧密连接开放，镧颗粒弥漫性地分布于神经细胞间隙，部分镧颗粒已进入神经细胞内部，分布于线粒体、内质网等细胞器的表面；暴露后２４ｈ，则见镧颗粒仅局限分布在血管腔内，毛细血管外的间隙则未见镧颗粒沉积，与对照组大鼠相似．结论：＋１０Ｇｚ／３ｍｉｎ重复作用３次可引起大鼠血脑屏障通透性增加，这种改变是可逆的．其可能在＋Ｇｚ致脑水肿的发生、发展过程中起重要作用．     

大鼠急性脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的超微结构与血清S100B蛋白水平的动态变化

目的: 研究大鼠急性脑缺血再灌注后血脑屏障通透性的超微结构与血清S100B蛋白水平的动态变化. 方法: 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注动物模型;硝酸镧示踪电镜观察血脑屏障通透性;采用ELISA方法检测血清S100B蛋白,观察其分别在脑缺血2 h再灌注0.5, 2, 6, 12, 24, 48 h时的变化. 结果: ①硝酸镧示踪电镜结果表明,再灌注0.5 h,镧颗粒出现在紧密连接处;再灌注2 h和6 h,血管内皮细胞空泡化明显,星型胶质细胞的足突与毛细血管基底膜开始分离;再灌注12 h和24 h,许多神经细胞和胶质细胞变性坏死,细胞核溶解,毛细血管基底膜的连续性受到破坏;再灌注48 h,大量的神经细胞和胶质细胞坏死、崩解,多数血管内皮细胞形态不完整. ②大鼠缺血再灌注后各组血清S100B蛋白水平与假手术组及对照组相比都明显升高,差异有显著性意义(P<0.01). 再灌注0.5 h,血清S100B蛋白开始增高;再灌注2 h和6 h,血清S100B蛋白处较高水平;再灌注12 h和24 h,血清S100B蛋白明显增高;再灌注48 h,血清S100B蛋白仍处较高水平. 结论: 脑缺血再灌注后血脑屏障通透性发生显著变化,血清S100B蛋白水平在脑缺血再灌注后的动态改变可较好的反映血脑屏障通透性的变化.     

高温对血脑屏障内皮细胞紧密连接的影响

目的探讨高温对血脑屏障内皮细胞间紧密连接的影响及其分子机制。方法利用内皮细胞与胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型。采用Millicell-ERS系统检测血脑屏障模型的跨内皮阻抗(transendothelial resistance, TER)。对内皮细胞间紧密连接采用银染的方法研究其结构的完整性。运用半定量RT-PCR的方法分析高温作用后血脑屏障内皮细胞紧密连接蛋白zonula occluden 1(ZO-1)的表达变化。结果43 ℃作用2 h后,体外血脑屏障模型TER均值由(321.30±58.59)Ω·cm2下降至(65.67±6.02)Ω·cm2。同时,内皮细胞紧密连接的银染显示,内皮细胞紧密连接完整性明显破坏。RT-PCR分析结果显示,高温条件下体外血脑屏障模型中内皮细胞ZO-1的表达水平明显降低。结论高温可以明显破坏血脑屏障内皮细胞间紧密连接的完整性,高温条件下内皮细胞ZO-1表达水平的降低是血脑屏障热损伤的重要分子机制。     

镧示踪甘露醇开放大鼠血脑屏障机制的实验研究

目的：研究甘露醇高渗性开放大鼠血脑屏障（blood—brain barrier,BBB）的机制。方法：采用静脉内注射0．5mL 2％硝酸镧作为外源性示踪剂,10min后颈内动脉注射37℃20％甘露醇3．0mL开放SD大鼠BBB,通过外源性硝酸镧透射电镜示踪法观察BBB超微结构改变,研究热点区域包括注射侧与对侧大脑皮层。结果：实验组（注射20％甘露醇组）,镧（La^3＋）在同侧大脑半球皮质区充填并通过脑血管内皮细胞（BMECs）之紧密连接（TJs）至血管腔外一脑间质裂隙内,对侧大脑半球皮质区局部有La＆3＋渗出至基底膜（BM）;对照组则完全封闭于血管腔内（P〈0．05）;各部位胞浆内均无La^3＋。结论：20％甘露醇通过开放TJs导致BBB通透性增高,同侧大脑半球强于对侧大脑半球。     

大鼠脑缺血模型血脑屏障结构和功能状态的研究

目的 探讨脑缺血再灌注后血脑屏障结构和功能改变的规律性,为相关血管源性脑水肿的防治提供形态学和功能学基础.方法 采用改良的Longa线拴法,制备大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血不同时程再灌注模型,硝酸镧心脏灌注,额顶叶取材,电镜下观察血脑屏障超微结构的变化;伊文思蓝颈总动脉注射,脑组织匀浆制备,分光光度仪伊文思蓝通透性定量分析,评价血脑屏障功能改变.结果 对照组各时间点血脑屏障无开放.脑缺血再灌注3h组,血脑屏障开放,伊文思蓝少量通透血脑屏障;6、12h组开放程度和伊文思蓝通透量逐渐增加,24h组达高峰,72h组有所减弱.结论 大鼠大脑中动脉阻塞再灌注后,血脑屏障的结构和功能呈现时程性改变,掌握改变的时程性,有助于对血管源性脑水肿发生机理的理解和早期防治.     

血栓通胶囊对氧糖剥夺/复氧致HUVEC细胞紧密连接损伤的改善作用

目的采用氧糖剥夺(OGD)致HUVEC细胞损伤模型,考察三七总皂苷(PNS)及其单体Rg1、Rb1对氧糖剥夺致血管内皮紧密连接损伤的保护作用。方法 HUVEC细胞接种于Transwell细胞小室,待细胞融合后,设立实验组别:正常对照组、模型组、PNS 10、20、40 mg/L组以及Rb1 13.52 mg/L、Rg1 12.44 mg/L组,于缺氧同时进行药物干预,氧糖剥夺6 h复氧24 h后,检测HUVEC内皮细胞电阻值以及内皮渗透性的变化;采用激光共聚焦显微镜,免疫荧光法检测HUVEC细胞ZO-1、claudin-5蛋白表达的变化。结果与正常对照组相比,HUVEC细胞缺氧6 h复氧24 h后内皮细胞间紧密连接电阻显著降低,细胞渗透性显著升高(P0.05)。PNS 20、40 mg/L组能够显著抑制模型组紧密连接电阻的降低,抑制HUVEC细胞渗透性的升高(P0.05)。人参皂苷Rb1能够显著升高OGD 6 h复氧24 h后内皮紧密连接电阻,降低HUVEC细胞渗透性(P0.05)。免疫荧光检测结果显示,正常对照组HUVEC细胞的ZO-1及claudin-5蛋白主要分布于细胞膜周围,排列连续,显示出内皮细胞的典型铺路石排列。缺氧6 h复氧24 h损伤后,模型组细胞边缘的紧密连接蛋白显著减少,环形结构断裂,甚至消失,细胞核内紧密连接蛋白呈增加趋势。PNS 20、40 mg/L及Rb1 13.52 mg/L可观察到细胞间紧密连接局部恢复,呈铺路石样结构。结论 PNS对缺血致血管内皮细胞间紧密连接损伤有保护作用。     

缺血再灌注兔心肌细胞质膜渗透性的改变及其钙通道阻滞剂对它的影响

应用镧离子示踪法于透射电镜下观察了缺血再灌注兔心肌细胞质膜渗透性的改变及其钙通道阻滞剂对它的影响。正常心肌中镧离子存在于细胞外间隙;缺血30min时超微结构改变呈可逆性,镧进入细胞并粘附于线粒体膜外面;再灌注后超微结构损伤呈不可逆性,镧进入线粒体内;再灌注前给以异搏停,再灌注损伤明显改善,线粒体内镧颗粒消失;缺血前给以异搏停,细胞膜和超微结构保存较好,细胞内镧基本消失。实验提示缺血再灌注心肌细胞中,细胞膜渗透性改变先于细胞的不可逆性损伤,而细胞膜渗透性改变又早于细胞器膜,无论是在缺血前还是于再灌注前给以导搏停,对质膜结构和功能均有一定的保护作用。     

胞质附着蛋白与血脑屏障

ZO蛋白家族是构成血脑屏障的重要蛋白,主要在上皮和内皮细胞的紧密连接处表达。作为一种胞质附着蛋白,它对紧密连接的稳定起重要作用。当ZO蛋白家族出现结构和功能上的障碍时,血脑屏障功能即随之改变。所以,研究ZO蛋白家族结构和功能的改变,为选择性开放血脑屏障提供了新的途径。本文对ZO蛋白家族的结构、功能以及对血脑屏障调节的影响进行综述。     

60Co-γ射线全脑常规照射后大鼠血脑屏障的电镜观察

目的:观察60Co-γ射线全脑常规照射后大鼠血脑屏障(BBB)的超微结构改变。方法:20只SD大鼠随机分为5组,依次为对照组、10 Gy组、20 Gy组、30 Gy组和40 Gy组,每组4只。60Co-γ射线全脑常规照射,2 Gy.次-1,5次.周-1,照射后16 h用镧示踪电镜化学技术观察大鼠BBB超微结构的变化。结果:对照组镧颗粒局限在血管腔内;10 Gy组紧密连接处见镧颗粒沉积;20 Gy组镧颗粒弥漫性地分布于神经细胞间隙;30 Gy组镧颗粒进入神经细胞内,并分布于线粒体、内质网等细胞器表面;40 Gy组镧颗粒弥漫分布于脑组织细胞间和细胞内,可见毛细血管内皮细胞及神经细胞失去正常形态,结构破坏。结论:全脑常规外照射后大鼠BBB均出现病理改变,且射线具有降低及破坏BBB功能的作用,在全脑放疗期间随照射剂量的变化而呈规律性改变,具有可预测性。     

An Ultrastructural Study on Hyperosmotic Opening of Tight Junction by Lanthanum Nitrate Tracing

A model of hyperosmotic opening of the blood-brain barrier(BBB)was successfully made by infusion of 1.4M mannitol into the internal carotidartery of rabbit.We selected lanthanum nitrate as a tracer.Ultrastructuralchanges of hyperosmotie opening of the BBB were observed through injection oflanthanum nitrate into blood vessels or through impregnation of small blocks ofbrain tissue in lanthanum solution.Electron microscopy showed that lanthanumnitrate passed through the opening of endothelial tight junction from the bloodinto the subendothelial layers and the extracellular spaces of the brain,or fromthe outside into the inside of blood vessels.The data suggest that themorphological basis of osmotic opening of BBB is the reversible widening of thetight junctions between endothelial cells,and that lanthanum nitrate infusion hasan advantage over block impregnation.     

山莨菪碱对脑损伤后血脑屏障通透性变化的影响

选用57只家兔,采用各种不同大小的胶体金(CG)微粒示踪,研究脑损伤后血脑屏障(BBB)通透性变化,并检测脑组织水含量。同时给予脑损伤兔静脉注射山莨菪碱(654—2).剂量为0.3mg/kg.观察其对脑损伤BBB通透性及脑组织水含量变化的影响。实验结果表明,脑损伤后30min BBB通透性已升高,有5nmCG微粒进入内皮小凹和微绒毛;伤后3h,10nmCG透过BBB.伤后6h.BBB通透性增高达高峰,较多15nmCG以胞饮转运或经开放的内皮细胞紧密连接处透过BBB入脑.脑组织水含量明显升高。与BBB通透性变化直接相关。山莨菪碱具有显著地降低BBB通透性的作用.有利于外伤性脑水肿的治疗。     

Effect of anisodamine on changes of blood-brain barrier permeability following brain injury in rabbits

The changes of blood-brain barrier(BBB)permeability following brain injury werestudied quantitatively by using colloidal gold(CG)particles of various sizes as tracers in 57 rab-bits.In addition,water content in brain tissues was determined.The brain-injured rabbits re-ceived intravenous injection of anisodamine in a dose of 0.3 mg/kg BW at 5rain or 3h after braininjury,and the effect of anisodamine on aherations of BBB permeability and water content of thebrain tissue after brain injury was investigated.The results indicated that an increase of BBBpermeability began at 30min after injury with only a few of 5nm CG tracers present in the endo-cytic pits and endothelial microvilli,and there were 10nm CG tracers passing through the BBB at3 h after brain injury.The increase of BBB permeability reached its peak at 6 h after brain in-jury.More 15nm CG tracers penetrated the BBB by way of pinocytotic vesicule transportationand opening of tight junctions between endothelial cells.The water content in the brain tissueincreased,which was closely correlated to the above-mentioned EBB permeability and giving ad-vantages to the treatment of traumatic brain edema in the present study.     

血脑屏障体外实验模型的建立

目的:应用培养的CBA/J小鼠脑血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVEC)构建血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的体外实验模型.方法:将BMVEC种植在明胶包被的24孔板细胞插入器的微孔滤膜上培养至汇合状态,通过4 h液面渗漏实验、扫描和透射电镜、血脑屏障形成前后膜两侧的电阻以及辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的通透性和RMP-7对血脑屏障通透性的调控作用来证实BBB的形成.结果:BMVEC培养至汇合后,4 h液面渗漏实验成为阳性;扫描电镜显示细胞形成单层,透射电镜证实细胞间形成紧密连接;跨细胞电阻(the transendothelial electrical resistance,TEER)分别为汇合前和人脐静脉内皮细胞的3.2倍和7.7倍;对HRP的通透率分别为前对照组的13.4%和6.7%;RMP-7处理使HRP在BBB的通透率增加了2.7倍.结论:构建的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性,适用于中枢神经系统药物跨BBB能力的研究.     

伽玛刀照射正常大鼠后急性期血脑屏障通透性的改变

目的：观察伽玛刀照射正常大鼠后急性期血脑屏障（blood-brain barrier,BBB)通透性的改变。方法：选择正常大鼠右侧尾状核头部为照射靶点，动物按伽玛刀最大照射剂量分为20、50、75、160Gy4组，准直器直径为4mm。于伽玛刀照射后12h至14d内应用兔多抗清蛋白行免疫组化染色半定量分析；并以硝酸镧作为示踪剂，应用透射电镜观察BBB的超微结构改变。结果：免疫组化法显示160Gy和75Gy剂量组于照射后12h，50Gy和20Gy剂量组于照射后1d靶区内出现血浆蛋白外渗；硝酸镧示踪电镜显示160Gy、75Gy和50Gy组于照射后12h、20Gy组于照射后1dBBB内皮细胞间的紧密连接开放。75Gy、50Gy、20Gy组变化高峰期出现在照射后3d，而7d后开始消散，160Gy组靶区阳性反应持续至照射后14d。结论：大鼠在伽玛刀照射后急性期存在BBB通透性改变，这种改变在20－75Gy范围内具有自限性。     

高原反应的脑病理与水通道蛋白-4(AQP4)的相关性实验研究

目的研究高原反应的脑病理变化及发病机制.方法Wistar大白鼠56只,分正常对照和实验组,实验组进入模拟5 000 m高原环境饲养,取4、24、48 h、3 d、2、4周各组各时相点动物活杀取脑作光、电镜一般形态学观察,硝酸镧示踪血管通透性观察,水通道蛋白(AQP4)和mRNA光、电镜免疫组化和原位杂交,GLU(glutamate,谷氨酸),GABA(gamm-aminobutyric,γ氨基丁酸)含量检测.结果光、电镜观察显示实验组早期(4～72 h)脑毛细血管内皮细胞出现吞饮泡增多、线粒体肿胀、紧密连接松弛、胶质足肿胀以及(24、48 h)硝酸镧漏出血管腔等病理改变,神经细胞无明显病理变化;免疫组化和原位杂交显示AQP4在血管内皮细胞、胶质纤维阳性表达,AQP4 mRNA在毛细血管内皮细胞核和胶质细胞核呈阳性表达,二者的表达情况在实验组早期增高.结论BBB病变是动物进入高原出现较早的病理变化;早期胶质细胞肿胀可能是一种保护性调节;AQP4 mRNA的表达变化可能是调节BBB通透性并维持水平衡的分子机制.     

Blood-brain barrier and treatment of central nervous system tumors.

The blood-brain barrier (BBB) separates the central nervous system (CNS) from systemic blood circulation by a continuous capillary network. The barrier's capillary endothelium has interendothelial tight junctions which prevent passage of large molecular weight, water soluble, highly polar molecules. The barrier protects the brain from toxic substances and also prevents therapeutic drugs from CNS entry. Its permeability within brain tumors is different with fenestrated endothelium resembling that of normal brain regions outside the BBB. Despite capillary changes within CNS tumors, their effect on improved therapies has not been shown. Combined chemotherapy with surgery and radiation does not significantly prolong glioma patients' survival. Discussed are new therapeutic approaches which include: osmotic, transient blood-brain barrier disruption followed by chemotherapy or immunotherapy, drug "tailoring" to render them more effective in barrier entry, and genetic glioma manipulation to make it the target of antiviral drugs which may penetrate the barrier.     

HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制探讨

HIV/SIV侵入中枢神经系统(CNS),造成严重的神经病理学改变,引发艾滋病相关的神经认知性障碍(HAND)。尽管有效地使用了高效抗逆转录病毒疗法,HAND在慢性感染者中的发病率仍然很高。通常认为,HIV/SIV在感染早期即可通过感染脑毛细血管内皮细胞或破坏内皮细胞间的紧密连接穿透血脑屏障进入CNS,但其机制尚不明确。目前有几种比较公认的假说,包括病毒直接入侵假说、单核/巨噬细胞入侵假说、T细胞诱导假说和液相入胞假说。本文将就HIV/SIV入侵血脑屏障的分子机制作一综述。     

不同用药方式对恶性脑肿瘤内抗癌药浓度的影响

本文将25例恶性脑肿瘤患者分别以3种不同方式（静脉滴注、颈动脉灌注和BBB开放加颈动脉灌注）用CDDP行术中化疗，并取肿瘤中心、边缘和正常脑组织标本，测定并比较其CD-DP浓度。结果提示：上述化疗方式以BBB开放加颈动脉灌注优于单纯颈动脉灌注，而颈动脉灌注又优于静脉化疗。