水通道蛋白—2及加压素的调控——水通道蛋白—2在内淋巴囊的表达和调控

水通道蛋白－2（AQP2）是一种加压素调控的四聚体通道蛋白，是水转运的特异性通道，主要表达于肾脏集合管主细管腔铡（顶端）的细胞膜上和细菌质内。研究发现不论是人类还是大鼠的内耳组织，水通道蛋白－2仅在内淋巴囊表达，其它内耳组织则未见表达；而AQP2是肾脏尿液的重吸收，充血性心衰的水潴留等生理、病理机制的重要环节。这个发现无疑对有关内耳水代谢疾病的研究，如梅尼埃病，开辟了一个新的方向。APQ2在肾脏和肉淋巴囊的特异性表达，进一步揭示了耳肾相关的机制，也提示了要巴囊在耳肾相关中的重要地位。     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(aquaporin，AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法 用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体，采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果 在耳蜗组织中，AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域，如血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节等，AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外，其余区域的表达与AQP1和AQP4相似，AQP2则仅表达于Reissner膜。在内淋巴囊组织中，AQP1、AQP3和AQP4在内淋巴囊上皮细胞和上皮下纤维组织均呈强阳性表达，只是AQP3的表达强度稍弱于AQP1和AQP4，而AQP2在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织均呈阴性表达。结论 水通道蛋白1、3、4以相似的方式广泛分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中，而AQP2则仅表达于Reissner膜，提示不同亚型的AQP可能在不同区域协同作用参与内淋巴的调节，从而保持内耳内环境的稳定。     

水通道蛋白-2在大鼠内耳的定位及其意义

目的：探讨水通道蛋白-2(Aqp-2)在大鼠内耳中的定位，分析其在内耳水代谢中的作用机制。方法：使用正常成年SD大鼠15只，制备颞骨组织标本，采用SP免疫组织化学技术，检测Aqp-2蛋白在大鼠内耳的表达情况。结果：Aqp-2在大鼠的内淋巴囊、血管纹、螺旋神经节有较强表达，在Corti器、基底膜、螺旋缘的前庭唇和鼓唇、盖膜、螺旋凸也有表达。结论：Aqp-2主要分布在与内淋巴代谢有关的结构(内淋巴囊和血管纹)，它在Corti器的表达为膜迷路积水时伴有的听力下降提供了又一解释；Aqp-2在螺旋神经节的表达，提示它可能与正常听觉的维持有关。     

水通道蛋白1在小鼠内淋巴囊的超微结构定位

目的研究水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）在小鼠内淋巴囊表达的精确定位，进一步探讨AQP1在内淋巴囊的作用。方法选取正常昆明小鼠30只，断头分离内耳内淋巴囊，应用冰冻切片免疫荧光染色法研究AQP1在内淋巴囊的组织分布情况，借助免疫电镜观察AQP1在内淋巴囊的超微结构定位。结果AQP1在内淋巴囊上皮下结缔组织层有表达。在纤维细胞胞膜特别是细胞突起的胞膜上可见大量胶体金颗粒标记，而上皮细胞的胞膜未见胶体金颗粒的标记。结论富含AQP1的内淋巴囊上皮下组织可能与内淋巴的吸收及平衡调节密切相关。     

水通道蛋白-1,2在大鼠内耳中表达的研究

目的 通过研究水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）和水通道蛋白2（aquaporin 2,AQP2）在大鼠内耳组织中的表达及分布,为临床治疗梅尼埃病提供实验依据.方法选取6只健康雄性SD大鼠,断头后行内耳组织切片,用兔抗大鼠AQP1和AQP2的特异性多克隆抗体分别进行免疫组织化学染色,观察AQP1和AQP2在内耳组织中的表达情况.结果 AQP1在内耳组织中的分布有一定的规律,主要分布于血管纹的中间细胞,螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞,基底膜以及圆窗膜,染色强度为中重度,前庭阶及鼓阶的外淋巴表面的细胞呈现较弱的阳性反应,其余部位为阴性反应.AQP2主要表达于螺旋韧带Ⅱ、Ⅳ及Ⅴ型纤维细胞,呈中重度染色反应,圆窗膜也有轻度表达,其余部位为阴性反应.结论 AQP1和AQP2分布于内耳中水及离子代谢的重要部位,提示两种蛋白可能参与内耳内环境稳态的调节.     

水通道蛋白在内淋巴囊和肾脏的表达及加压素对水通道蛋白表达的影响

目的　从形态学上直接验证水通道蛋白 (aquaporin ,AQP) 2、3、4在内淋巴囊上皮的表达 ;观察加压素 (anti diuretichormone,AVP)及血管加压素受体 2 (V2receptor,V2 R)受体促效剂去精氨酸加压素 [(deamino Cys1,D Arg8) vasopressin ,dDAVP]对AQP2在内淋巴囊上表达的变化 ,并与肾脏比较 ,为耳肾相关提供参考。方法　成年大鼠 5只 ,经活体心脏灌注 ,取双侧颞骨 ,按石蜡包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认AQP2、3、4在内淋巴囊的表达 ;使用成年大鼠 10只观察AVP及DDAVP对AQP2在内淋巴囊和肾脏上表达的变化。结果　荧光显微镜下 ,AQP 2、3、4一抗在内淋巴囊上皮胞膜胞浆显示荧光染色 ,肾脏集合管主细胞胞膜胞浆有稳定清晰染色反应。AVP组 (B组 )和DDAVP组 (C组 )的内淋巴囊上皮胞膜胞浆AQP 2的表达明显较阴性对照组 (A组 )降低 ,表现为荧光减弱 ,图像分析示灰度明显减弱 (P <0 0 1) ;B组和C组AQP 2的表达则差异无显著性。B组和C组肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP 2的表达明显较A组增强 ,表现为棕黄色颗粒染色明显加深 ,图像分析示灰度明显减弱 (P <0 0 5 ) ,密度明显增加 (P <0 0 5 ) ,总积分密度 (totalintegrateddensity,IOD)明显提高 (P <0 0 5 ) ,面积明显增加 (P <0 0 5 ) ;B组和C     

水通道蛋白2在内淋巴囊上皮和肾脏中表达的研究

目的 探讨水通道蛋白2(Aquaporins 2,AQP-2)和加压素(anti-diuretic hormone,AVP)在内耳水代谢中的作有机制.方法 15只(30耳)成年大鼠,随机分为三组,每组5只(10耳).A组(对照组):腹腔注射生理盐水;B组(AVP组):腹腔注射AVP(0.2 U/g),C组(DDAVP组):尾静脉注射V2受体促效剂去精氨酸加压素([deamino-Cys1,D-Arg8]-Vasopressin,DDAVP)1 ng/只.采用间接免疫荧光法标记内淋巴囊(endolymphatic sac,ES)中AQP-2的表达,ABC法标记肾脏中AQP-2的表达.结果 AQP-2-抗在内淋巴囊上皮胞膜胞浆显示荧光染色,B组和C组的内淋巴囊上皮胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组降低(P＜0.01);B组和C组AQP-2的表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).B组和C组肾脏集合管主细胞胞膜胞浆AQP-2的表达明显较A组增强(P＜0.05),B组和C组AQP-2表达则差异无显著统计学意义(P＞0.05).结论 AVP促进肾脏表达AQP-2,提高肾脏重吸收的功能,同时抑制内淋巴囊上皮表达AQP-2,从而降低内淋巴囊上皮对水的重吸收;AVP对肾脏和内淋巴囊AQP-2表达的调节可能是通过AVP-V2R-cAMP-AQP2途径实现.     

正常豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的：检测正常豚鼠内耳组织中水通道蛋白（aquaporins,AQPs）的表达,探讨其在内耳液体平衡中的意义.方法：用免疫组织化学方法,以兔抗大鼠AQP0、1、2、3、5、7、8的多克隆抗体,检测正常豚鼠内耳组织中水通道蛋白亚型0、1、2、3、5、7、8的表达.结果：水通道蛋白亚型0、1、2、3、5、7、8在豚鼠内耳有不同程度、不同模式的表达,其中AQP0仅在血管纹上皮细胞、螺旋神经节细胞有较弱的表达,AQP1的分布见于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节细胞等.AQP2表达在血管纹、Corti器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中.AQP3、7、8的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中均有表达,其中Corti器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋神经节表达较强,在螺旋韧带、螺旋缘纤维细胞表达较弱.AQP5则在Corti器、内外螺旋沟、螺旋神经节细胞表达较强,在螺旋韧带纤维细胞表达稍弱.结论：在正常豚鼠内耳中,尤其是膜迷路中有多种水通道蛋白亚型,以不同的方式表达,他们可能在维持膜迷路液体平衡中起着协同作用.     

抗分泌因子与水通道蛋白1和2在大鼠内耳中的表达及其相互作用

目的研究抗分泌因子（antisecretory factor，AF）与水通道蛋白1、2（aquaporin-1，2，AQP1，2）在大鼠内耳中的表达及其相互作用。方法选取6只健康雄性SD大鼠，采用Envision二步法免疫组化技术，观察AF、AQP1和AQP2在大鼠内耳中的表达情况；选取20只健康雄性SD大鼠，分别取其前庭及耳蜗组织，运用免疫共沉淀结合蛋白质印记方法，用抗AQP1的单克隆抗体和抗AQP2多克隆抗体分别特异性地沉淀前庭和耳蜗组织中的蛋白抗原，用抗AF的特异性抗体检测沉淀物。结果AF在内耳分布广泛，耳蜗血管纹边缘细胞、螺旋韧带Ⅰ-Ⅴ型纤维细胞、前庭膜、基底膜、壶腹嵴等部位呈轻中度阳性反应，圆窗膜呈中强阳性反应，耳蜗螺旋神经节及前庭、耳蜗神经纤维均有阳性分布；AQP1主要分布于血管纹的中间细胞、螺旋韧带Ⅲ型纤维细胞、基底膜以及圆窗膜，染色强度为中重度；AQP2主要表达于螺旋韧带Ⅱ型、Ⅳ及Ⅴ型纤维细胞，呈中重度阳性染色反应，圆窗膜也有轻度表达。以AF特异性抗体分别检测AQP1及AQP2特异性抗体沉淀物中有清晰的阳性条带，相对分子质量约60000，与AF的相对分子质量吻合，而未加AQP1及AQP2特异性抗体的对照实验中无反应条带出现。结论AF、AQP1及AQP2在内耳组织中的分布有一定的规律，多位于与内淋巴关系密切的部位，提示三种蛋白可能参与内淋巴中水的调节。AF的分布区与AQP1及AQP2均有重叠，AQP1、AQP2与AF之间均存在相互结合作用。     

正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白的表达及意义

目的检测正常和膜迷路积水豚鼠内耳水通道蛋白（aquaporins,AQPs）的表达,探讨其机理和意义。方法 20只健康豚鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组（膜迷路积水模型组）豚鼠腹腔注射醋酸去氨加压素,4μg&#183;kg-1&#183;d-1,共1周,诱导其内耳膜迷路积水,对照组豚鼠腹腔注射等量生理盐水。用免疫组化方法检测两组豚鼠内耳水通道蛋白的表达,并进行比较。结果对照组豚鼠内耳中有AQP0、1、2、3、5、7、8的表达,其中AQP0仅在血管纹和螺旋神经节细胞有较弱的表达;AQP1分布于包绕骨迷路、内淋巴囊、内淋巴管的纤维细胞,基底膜鼓阶面细胞、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘纤维细胞、Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、椭圆囊壁、球囊壁、螺旋神经节等;AQP2表达在血管纹、Corti’s器、螺旋神经节细胞和内淋巴囊中;AQP3、7、8三者的分布类似,在螺旋神经节和包绕膜迷路的组织中表达,包括Corti’s器、内外螺旋沟、血管纹、螺旋韧带纤维细胞、螺旋缘、椭圆囊壁、球囊壁、内淋巴囊等;AQP5则表达在Corti’s器、内外螺旋沟、螺旋神经节、螺旋韧带纤维细胞。实验组豚鼠内耳中,血管纹AQP2的表达与对照组较正常豚鼠表达增加,其它亚型AQPs的表达与对照组无明显差异。结论正常豚鼠内耳中有多种AQPs表达,膜迷路积水后豚鼠内耳中AQP2的表达增强,提示膜迷路积水可能与AQP2表达上调有关。     

血管加压素-水通道蛋白2调控通路与内耳膜迷路积水

在肾脏集合管,血管加压素(arginine vasopressin,AVP)通过AVP-血管加压素受体2(vasopressin type 2 receptor,V2R)-环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-水通道蛋白2(aquaporin2,AQP2)调控通路引起AQP2表达改变,实现对肾集合管水通透性的调节,参与人体水电解质的调节机制改变。膜迷路积水是梅尼埃病的重要病理特征,AVP-AQP2调控通路功能失常与膜迷路积水的病理生理学改变密切相关。本文综述了近年来AVP-AQP2调控通路的研究进展,并重点讨论其在梅尼埃病膜迷路积水发生发展中的作用。     

水通道蛋白在耳鼻咽喉的研究进展及糖皮质激素对其影响

水通道蛋白（aquaporin，AQP）是一类与水的通透有关的蛋白，目前在哺乳动物已发现至少13种水通道蛋白，即AQP0～AQP12。近年来，随着对AQP研究的不断深入，发现耳鼻咽喉科部分疾病和水通道蛋白表达异常有关。糖皮质激素是目前临床应用较广泛的一类药物，在耳鼻咽喉科已广泛用于鼻息肉、变应性鼻炎、中耳积液、内耳疾病等的治疗。     

水通道蛋白-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊的表达

目的:检测水通道蛋白(AQP)-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法:运用免疫组织化学二步法及免疫荧光染色检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP-1,3的表达。结果:AQP-1主要表达于耳蜗螺旋韧带基底部、Corti器基底膜及鼓阶内侧上皮面及内淋巴囊上皮细胞下的基质组织中;AQP-3主要表达于血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节细胞及内淋巴囊的上皮细胞及其下的基质成分中。结论:AQP-1,3在豚鼠耳蜗及内淋巴囊中存在广泛表达,但其功能仍未明确。     

阿米卡星对小鼠内耳水通道蛋白4表达的影响北大核心CSCD

目的观察阿米卡星对小鼠内耳水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)表达的影响,探讨AQP4在阿米卡星耳毒性机制中的可能作用。方法 60只CBA/CaJ小鼠随机分为实验组和对照组,每组30只,实验组小鼠皮下注射阿米卡星450mg·kg-1·d-1,每天1次,共14d,对照组小鼠皮下注射等量生理盐水。注射4天后应用免疫组化染色分别检测两组小鼠耳蜗AQP4的表达及定位情况,应用蛋白免疫印迹技术及RT-PCR技术检测两组小鼠内耳AQP4表达水平的变化。结果 AQP4在小鼠内耳表达于Corti器的支持细胞。对照组和实验组的AQP4蛋白相对含量分别为0.672±0.074、0.479±0.108,AQP4mRNA相对含量分别为0.701±0.107、0.460±0.080,实验组AQP4的蛋白及mRNA的相对含量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿米卡星可导致小鼠内耳AQP4蛋白及基因表达的下调,这可能是阿米卡星耳毒性的机制之一。     

两种内淋巴积水动物模型中水通道蛋白1的表达

目的了解水通道蛋白1（aquaporin 1，AQP1）在手术及醛固酮引起的内淋巴积水豚鼠耳蜗及内淋巴囊中的表达情况。方法30只健康豚鼠随机分为手术组、醛固酮注射组和对照组，每组10只。通过手术阻塞内淋巴囊和腹腔注射醛固酮的方法制造出两种内淋巴积水动物模型，采用免疫组化染色及蛋白质印迹法检测豚鼠耳蜗及内淋巴囊中AQP1的表达，通过图像处理软件进行半定量分析。结果手术组出现中、重度内淋巴积水，以顶回最为明显，自顶回向底回减轻；醛固酮注射组出现轻、中度积水，积水多位于底回。两组积水动物模型中AQP1表达的部位与对照组相同，手术组耳蜗与对照组相比AQP1表达差异无统计学意义（t=0．718，P〉0．05）；醛固酮组耳蜗AQP1表达低于对照组（t=6．609，P〈0．01）；对照组与醛固酮组内淋巴囊AQP1表达差异无统计学意义（t=0．998，P〉0．05）。醛固酮组耳蜗外侧壁组织中AQP1蛋白定量低于对照组（t=13．626，P〈0．01）。结论AQP1在手术引起的内淋巴积水中表达没有改变，在醛固酮引起的内淋巴积水中表达下降。AQP1在豚鼠内耳中的表达可能受离子浓度的调节。     

水通道2在小鼠内耳不同发育阶段的表达

内淋巴液平衡对于保持听力和平衡功能很重要，既往的研究大多集中于Ｎａ＋、Ｋ＋等离子转运。近来研究表明在豚鼠和大鼠内耳存在与此相关的各种水通道（Ａｑｕａｐｏｒｉｎ，Ａｑｐ），并确知它们是一组快速跨膜运输水的专用蛋白，但对内耳胚胎发育期水通道的表达却知之甚少。本文采用连续冷冻切片，抗Ａｑｐ２的多克隆抗体免疫组化法检测Ａｑｐ２在小鼠内耳胚胎１０天至１８天的表达。结果：Ａｑｐ２在耳囊发育早期（５～１０天）弥漫性分布于耳囊腔上皮，然后随着发育的成熟逐渐局限于内耳。在胚胎１２至１３天，Ａｑｐ２的表达为均质性，…     

内耳上皮钠通道、水通道蛋白与内淋巴代谢相关性的研究进展

梅尼埃病的主要病理表现为膜迷路积水,但膜迷路积水的具体作用机制尚未完全明确。已有研究证实,膜迷路积水与内耳离子、水转运通道息息相关。对内耳上皮钠通道(ENaC)、水通道蛋白(AQPs)与内淋巴代谢相关性的研究进行综述,探讨膜迷路积水形成机制,为进一步研究梅尼埃病的发病机制和治疗提供科学依据。     

小鼠内耳水通道蛋白的定位及其意义

目的检测水通道蛋白(waterchannelprotein;aquaporin,Aqp)亚型在小鼠内耳不同部位的分布和各亚型所在的部位。方法使用成年小鼠30只,经活体灌注,切取双侧颞骨,按石蜡包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认小鼠内耳组织中水通道蛋白亚型1、3、4、5、7、9分布情况。结果Aqp-1为1∶200和Aqp-3、7、9为1∶100的一抗浓度可以看到它们在内耳不同部位稳定、清晰的染色反应,但Aqp-4和5使用1∶50甚至1∶30也未观察到染色。Aqp-1在圆窗膜、螺旋韧带、内淋巴囊和内淋巴管、椭圆囊和球囊以及内耳血管壁等处被标记;Aqp-3在螺旋韧带、前庭唇、内、外螺旋沟、基底膜和基底膜嵴、内淋巴囊和内淋巴管、膜半规管和椭圆囊、球囊斑等处显示荧光染色。Aqp-7在血管纹、基底膜、前庭膜、椭圆囊和球囊及其囊斑有反应染色,而Aqp-9在螺旋缘、前庭唇、内、外螺旋沟、前庭膜、膜半规管和球囊及其囊斑有较强染色。结论水通道蛋白亚型1、3、7、9广泛分布于小鼠内耳不同组织中,其分布部位和反应强弱存在差异,主要存在与内淋巴密切相关的组织结构中。     

小鼠内耳水通道蛋白的定位及其意义

目的 检测水通道蛋白（water channel proterin;aquaporin,Aqp)亚型在小鼠内耳不同部位的分布和亚型所在部位。方法 使用成年小鼠30只,经活体灌注,切取双侧颞骨,按石虹包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认小鼠内耳组织中水通道蛋白亚型1、3、4、5、7、9分布情况。结果 Aqp-1为1:200和Aqp－3、7、9为1:100的一抗浓度可以看一它们在内耳不同部位稳定、清晰的染色反应,但Aqp-4和5使用1：50甚至1：30也未观察到染色。Aqp－1在圆窗膜、螺旋韧带、内淋巴囊和内淋巴管、椭滞 和球囊以及内耳血管壁等处被标记;Aqp-3在螺旋韧带、前庭唇、内、外螺旋沟、基底膜和基底膜嵴、内淋巴囊和内淋巴管、膜半规管和椭圆囊、 球囊斑等处显示荧光染色。Aqp-7在血管纹、基底膜、前庭膜、椭圆囊和球囊及其囊斑有反应染色,而Aqp-9在螺旋缘、前庭唇、内、外螺旋沟、前庭膜、膜半规管和球囊及其囊斑有较强染色。结论 水通道蛋白亚型1、3、7、9广泛分布于小鼠内耳不同组织中,其分布部位和反应强弱存在差异,主要存在与内淋巴密切相关的组织结构中。     

前庭学

20050401脉鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达/钟时勋…//听力学及言语疾病杂志.2004,12(5).337～339目的:研究脉鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法:用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体,采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果:在耳蜗组织中,AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域,如血管纹、螺旋韧带、Corit器、螺旋缘、螺旋神经节等,AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外,其余区域的表达与AQP1和AQP4相似,AQP2则仅表达于Reissner膜。…