软肝抗纤方对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察软肝抗纤方对大鼠肝星状细胞增殖及胶原合成的影响。方法：分离大鼠肝星状细胞进行原代培养,然后应用药物血清处理培养的肝星状细胞,采用MTT法测定细胞增殖,^3H-脯氨酸掺入法测定胶原合成。结果：软肝抗纤方和秋水仙碱药物血清均能抑制HSC的增殖与胶原蛋白的分泌,前效果更为明显。结论：软肝抗纤方可能通过抑制大鼠肝星状细胞的增殖、抑制胶原的异常合成,起到抗肝纤维化的作用。     

剔毒护肝方对乙型肝炎肝纤维化麻鸭血液流变学的影响

目的：观察剔毒护肝方对乙型肝炎肝纤维化麻鸭血液流变学的影响。方法：用鸭乙型肝和毒（DHBV）阴性血清反复攻击复制鸭乙型肝炎肝纤维化模型,同时用剔毒护肝方治疗,观察其对肝纤维化指标及血液流变学的影响。结果：剔毒护肝方能提高血清白蛋白,降低血清球蛋白含量,显降低透明质的,层粘蛋白和Ⅲ型前胶原,改善血液流变学的作用。结论：剔毒护肝方贝石护肝纤维化和改善肝脏血流变学的作用。     

福尔肝6号对肝星状细胞增殖的影响

目的：探讨福尔肝6号对肝星状细胞增殖影响的抗肝纤维化作用机理。方法：采用血清药理学实验方法作用于活化的大鼠肝星状细胞（HSC）,以^3H-TdR掺入法观察肝星状细胞增殖。结果：福尔肝6号和秋水仙碱药物血清能抑制肝星状细胞增殖,福尔肝6号药物血清组优于秋水仙碱药物血清组。结论：福尔肝6号药物血清能抑制HSC的增殖,从而减少胶原等ECM合成。     

益肝康的药物血清对大鼠HSCs增殖及PDGF基因表达的影响

目的探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制.方法给正常大鼠灌服益肝康,提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学法检测PDGF-BB蛋白表达.结果益肝康药物血清显著抑制肝星状细胞的增殖,可使细胞生长周期延长,细胞增殖、活力受抑,并明显抑制PDGF-BB蛋白表达.结论益肝康可抑制肝星状细胞增殖,对PDGF-BB表达的抑制作用可能是该方抗肝纤维化的主要机制之一.     

姜黄提取物对大鼠肝星状细胞增殖与活化的影响

目的研究姜黄提取物（姜黄素）对大鼠肝星状细胞增殖和活化的影响。方法培养大鼠T6肝星状细胞株，并使用姜黄素对细胞进行处理，采用四甲基偶氮唑蓝[3-（4，5-dimthy-2-2thiazoly）2，5-dipheny-2H-tetrazoliun bromide，MTT]比色分析法检测药物对细胞增殖的影响；收集细胞并抽提细胞总蛋白，10％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，采用Western blot检测药物处理对细胞表达α平滑肌肌动蛋白的影响。结果姜黄素剂量依赖性地抑制大鼠T6肝星状细胞株的增殖，并可以降低细胞表达α平滑肌肌动蛋白的水平。结论姜黄素能够抑制肝星状细胞的增殖和活化．     

扶正化瘀方对大鼠肝星状细胞旁分泌与自分泌活化途径的干预

为研究扶正化瘀方对肝星状细胞（HSC）旁分泌与自分泌活化途径的干预，用含药（由桃仁、丹参、虫草菌丝等组成的319方）血清分别添加于大鼠损伤肝库普弗细胞（IKC）与传代HSC（MFBC）中培养，制备含药血清作用过的KC条件培养液（IKCM）与MFBC条件培养液（MCM）；并以添加正常血清制备的条件培养液为对照，温育大鼠原代HSC。通过MTT法观察有HSC增殖与ELISA法观察对HSC分泌Ⅰ型胶原的影响。结果显示，IKCM与MCM可明显促进HSC的增殖与Ⅰ型胶原的分泌；扶正化瘀方则明显抑制了这一作用。提示扶正化瘀方对HSC旁分泌与自分泌活化途径有明显的抑制作用。     

牛磺酸对大鼠肝纤维化的防治作用及机制的初步观察

目的观察牛磺酸对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型中星状细胞凋亡的影响及其保护机制。方法将实验动物分为正常对照组、模型组和牛磺酸组,采用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,研究牛磺酸对血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)、Ⅱ型前胶原(PCI)、肝药酶和抗转化生长因子β1(TGF-β1)以及对激活的肝星状细胞凋亡的影响。结果与模型组比较,牛磺酸组ALT、HA、PCⅡ水平降低,肝细胞色素P450、细胞色素bs含量提高,TGF—β1的表达明显减少,同时促进了激活的肝星状细胞凋亡,明显减轻纤维化程度。结论牛磺酸有抑制TGF—β1的表达,促进激活的肝星状细胞凋亡的作用,具有明显的抗肝纤维化作用。     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。     

化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究

目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡;Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降。结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用

目的研究荔枝核总黄酮(TFL)对大鼠肝星状细胞的生长抑制作用及其分子机制。方法应用不同浓度(20、40、80、160 mg/L)TFL(药物组)对生长状态稳定的大鼠肝星状细胞株HSC-T6进行处理,并设置空白对照组。MTT法检测不同浓度TFL处理不同时间后,HSC-T6细胞增殖情况,并根据抑制率计算TFL的半数抑制质量浓度(IC50);吖啶橙染色观察经不同浓度TFL处理后HSC-T6细胞凋亡情况;流式细胞术检测不同浓度TFL处理后HSC-T6细胞周期的变化情况。结果 MTT结果显示,TFL对HSC-T6具有增殖抑制活性(P<0.05),其处理24、48、72 h的IC50分别为116.44、101.98、129.69μg/mL。吖啶橙染色显示,药物组细胞中出现核浓缩、核碎裂及致密浓染亮绿色凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞G1期细胞比例为(47.68±2.92)%,G2期为(19.58±2.93)%,S期为(32.75±2.09)%;药物组经TFL处理后,G1期细胞数量增加,而G2期细胞显著减少(P<0.05)。结论 TFL在体外能抑制大鼠肝星状细胞增殖,它通过阻滞细胞周期和诱导凋亡来抑制大鼠肝星状细胞的增殖。     

益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用研究

研究益气活血方药理血清对大鼠贮脂细胞增殖作用机制。通过制备 3周、5周、7周的肝纤维化模型大鼠血清、正常大鼠血清和益气活血复方药物血清 ,培养肝星形细胞HSC(Hepaticstellatecells)和肝Bel74 0 2瘤株 ,采用MTT法观察和分析HSC的增殖作用。结果表明 :①益气活血方剂血清能抑制 5周、7周模型血清培养的继代HSC的增殖 ,P <0 .0 5。②益气活血方剂血清可促进 3周模型血清培养的继代HSC和模型血清培养的原代HSC的增殖 ,P <0 .0 5。③益气活血方剂血清和3周模型血清共同作用促进培养的Bel74 0 2的增殖 ,P <0 .0 5。提示益气活血方剂能够对HSC和Bel74 0 2细胞的增殖产生影响。HSC的生活状态 ,即HSC发育时相是决定益气活血方剂具有抑制或促进增殖作用的关键事件     

益气活血方药抑制大鼠HSC体外增殖作用的实验研究

目的　研究益气活血方药抑制大鼠肝星状细胞 (HSC)体外增殖的作用机理和有效部位群。方法　用脂多糖 (lipopolysccharide ,LPS)刺激体外培养的HSC增殖 ,同时加入不同时相的含药血清Scl、Sc2或正常鼠血清 (Sn)或该方药不同提取物 ,分别培养 2 4、4 8、72h ,MTT法测定细胞增殖率 ,流式细胞仪测定HSC凋亡率。结果　在培养各时相Sc1和Sc2对LPS刺激的HSC增殖都有明显的抑制作用 (P <0 0 5或P <0 0 1)。流式细胞仪测定HSC凋亡的结果显示Sc2明显促进了HSC的凋亡 (P <0 0 1)。该方药不同提取物以不同的模式抑制体外培养的大鼠HSC增殖。结论　益气活血方药含药血清具有抑制体外培养大鼠HSC增殖作用 ,并促进其凋亡 ;益气活血方药有不同的有效部位群 ,并以不同的模式发挥作用     

黄芪解毒汤对乳腺癌细胞凋亡及Notch1基因表达的影响

目的:观察黄芪解毒汤对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡及Notch1基因表达的影响,探讨该方抑制乳腺癌复发转移的可能机制。方法:制备含药血清,分为黄芪解毒汤血清组、阿霉素血清组、参一胶囊血清组,另设生理盐水血清组。常规培养细胞,MTT法检测不同浓度含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;选择最佳抑制浓度的含药血清分别干预乳腺癌细胞,干预3 d后流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞Notch1基因的表达。结果:MTT法检测结果显示,3种含药血清均可抑制MCF-7细胞增殖(P0.05)且对细胞抑制最佳浓度为20%含药血清。流式细胞检测结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组均可明显诱导MCF-7细胞凋亡(P0.05);实时荧光定量PCR结果显示,与生理盐水血清组比较,黄芪解毒汤血清组、参一胶囊血清组、阿霉素血清组Notch1基因表达均明显降低(P0.05)。结论:黄芪解毒汤可能通过诱导MCF-7凋亡、降低Notch1基因表达起到抑制乳腺癌复发转移的作用。     

Study on Effect of IH764-3, an Active Principle of Salviae miltiorrhizae, in Inducing Hepatic Stellate Cell Apoptosis

Objective: To explore the anti-fibrotic mechanism of Salviae miltiorrhizae from the view of proliferation and apoptosis of hepatic stellate cells (HSC).Methods: IH764-3, an active principle of Salviae miltiorrhizae, was used to intervene in the cultured HSC in vitro. Cell proliferation was detected by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method, and the cell apoptosis was examined by electron microscopy, flow cytometer and terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end-labeling method (TUNEL).Results: MTT showed that IH764-3 has obvious inhibition on the proliferation of HSC. Specific cell apoptosis figures of HSC, such as chromatin agglutination, were seen under electron microscopy in the IH764-3 treated group. By flow cytometer, it was shown that the HSC apoptosis rate in the IH764-3 treated group was higher than that in the control group, and the apoptosis inducing effect of IH764-3 was dose- and time-dependent. TUNEL analysis showed that the HSC apoptotsis rate was 28.3±1.5% after being incubated for 48 hrs with IH764-3, which was significantly higher than that in the control group (6.7±0.6%, P<0.05).Conclusion: IH764-3 could inhibit the proliferation of HSC and induce its apoptosis. These effects may be one of the anti-fibrotic mechanisms of Salviae miltiorrhizae.     

姜黄素含药血清对大鼠肝星状细胞HSC—T6增殖的影响

目的观察姜黄素药物血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法用姜黄素煎荆给大鼠灌胃（连续7d）,制备含药血清,并用培养基将药物血清配制成四个稀释倍数,分别是5％、10％、20％、加％四个稀释倍数浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,运用噻唑蓝（MTr）比色法检测药物血清对HSC—T6增殖的影响。结景姜黄素药物血清对增殖的肝星状细胞有抑制作用（P〈0．05或P〈0．01）,在5％～40％的血清稀释倍数范围内,随剂量增大而抑制作用增强;在20％～40％的血清稀释倍数范围内姜黄素组对HSC—T6抑制率增高（P〈0．05）。结论姜黄素具有抑制HSC—T6增殖的作用。     

半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃黏膜上皮细胞GES-1凋亡的影响

[目的]观察半夏泻心汤对幽门螺杆菌致人胃上皮细胞GES-1调亡的干预作用。[方法]实验分正常组、感染组和半夏泻心汤组,感染组和半夏泻心汤组按50∶1的细菌∶细胞比例感染GES-1细胞,正常组和感染组均以正常鼠血清进行培养,半夏泻心汤组以含药鼠血清进行培养,采用MTT法检测细胞的增殖情况,DAPI染色分析细胞凋亡情况。[结果]与正常组比较,感染组的细胞增殖显著下降（P〈0.05）,细胞凋亡明显提高（P〈0.05）。与感染组相比,10%、15%的含药血清能促进细胞增殖（P〈0.05）,半夏泻心汤组能降低细胞凋亡（P〈0.05）。[结论]半夏泻心汤具有改变幽门螺杆菌对胃黏膜上皮细胞凋亡的作用。     

桃红四物汤加丹参对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨桃红四物汤加丹参时活化的人肝星形细胞（HSC）增殖和凋亡的影响，阐明其时肝纤维化的防治作用。方法将人肝星状细胞体外培养，加入不同浓度桃红四物汤加丹参干预48h后，采用MTT法以及流式细胞仪检测其增殖及凋亡情况。结果桃红四物汤加丹参0．4mg／mL、0．2mg／mL两种浓度均能抑制肝星状细胞增殖，并能促进其凋亡。结论桃红四物汤加丹参具有抑制人肝星状细胞的增殖，诱导肝星状细胞凋亡的作用。可能为肝纤维化的中医药防治研究提供新的思路。     

蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的研究蕲艾提取液药物血清对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响。方法传代培养的HSC-T6与蕲艾提取液药物血清共同培养24h后,采用MTT法检测其对HSC增殖的影响,Elisa法检测TGFβ1蛋白表达情况。结果不同浓度蕲艾提取液药物血清(5%、10%、20%)与空白对照组及生理盐水血清组比较,能显著抑制HSC-T6增殖(P0.01)及TGFβ1蛋白的表达(P0.01)。结论蕲艾提取液药物血清可显著抑制HSC-T6增殖。     

原花青素对瘦素诱导肝星状细胞增殖和TIMP-1产生的影响

目的 观察原花青素(PC)对瘦素诱导的肝星状细胞(HSC)增殖及组织抑制基质金属蛋白酶 1(TIMP 1)产生的影响。方法 磺基罗丹明B法检测HSC增殖,利用活性氧(reactive oxygen species,ROS)探针2,7 二氯二氢荧光素二乙酯检测ROS,酶联免疫吸附实验测定TIMP 1的浓度。结果 PC在50、100、200μg/mL时能够抑制瘦素诱导的HSC的增殖(P<0.05),同时能够抑制瘦素诱导的ROS的产生(P<0.05),上述PC各浓度组亦能够抑制TIMP 1的产生(P<0.05),浓度之间抑制效果具有统计学差异(P<0.05)。结论 PC可能通过抑制瘦素诱导的氧化应激,抑制HSC的增殖以及TIMP 1的产生。