异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响

目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组(IR组)采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理(IP组)吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调(P＜0.05).结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤海马胶质纤维酸性蛋白表达及神经元凋亡的影响

目的评价亚低温对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及神经元凋亡的影响。方法健康成年雄性SD大鼠72只,体重250~300g,采用随机数字表法均分为三组:假手术组(S组)、脑缺血-再灌注损伤组(IR组)和亚低温组(MH组),每组24只。IR组和MH组采用线栓法进行大鼠脑缺血2h、再灌注制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型。S组分离右侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉,不置入线栓。S组和IR组置于室温下,MH组于缺血后10min给予亚低温处理并维持3h。分别于再灌注后4h(T1)、6h(T2)、12h(T3)和24h(T4)进行神经功能缺陷(NDS)评分。取海马组织,采用Western blot和RT-PCR检测海马GFAP蛋白和GFAP mRNA表达,采用流式细胞仪检测海马神经元凋亡情况。结果与S组比较,T1~T4时IR组和MH组大鼠NDS评分及海马神经元凋亡率明显升高,GFAP蛋白和GFAP mRNA表达明显上调(P0.05)。与IR组比较,T1~T4时MH组大鼠NDS评分及海马神经元凋亡率明显降低,GFAP蛋白和GFAP mRNA表达明显下调(P0.05)。结论亚低温可减轻大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤,其机制可能与下调海马GFAP表达有关。     

电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元pSTAT3蛋白表达的影响

目的 评价电针预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质神经元磷酸化信号转导及转录激活因子3(pSTAT3)蛋白表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠45只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法,将其随机分为假手术组、局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组(n=15).局灶性脑缺血再灌注组采用线栓阻塞颈总动脉和颈外动脉24 h恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.电针预处理组电针刺激百会穴30 min,处理后24h时制备模型,再灌注24 h时进行神经行为学评分,随后处死大鼠取脑测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比,采用免疫荧光染色和Westem blot法检测缺血半暗带皮质神经元pSTAT3蛋白的表达.结果 与假手术组比较,局灶性脑缺血再灌注组和电针预处理组神经行为学评分降低,脑梗死体积百分比增加,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05);与局灶性脑缺血再灌注组比较,电针预处理组神经行为学评分升高,脑梗死体积百分比减少,皮质神经元pSTAT3蛋白表达上调(P＜0.05).结论 电针预处理通过上调皮质神经元pSTAT3蛋白的表达减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

脂氧素A4对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响

目的 探讨脂氧素A4对局灶性脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重200～250 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)和脂氧素A4组(L组).采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,阻断右侧大脑中动脉缺血2 h后行再灌注.L组缺血即刻右侧侧脑室注射脂氧素A4 100 ng,S组和I/R组右侧侧脑室注射等容量生理盐水5 μl.于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,静脉注射2%伊文斯蓝4 ml/kg,1 h后处死大鼠取脑,测定右侧脑水含量和伊文斯蓝含量,检测脑皮质基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达.结果 与S组比较,I/R组和L组神经功能缺陷评分、脑水含量和伊文斯蓝含量升高,脑皮质MMP-9表达上凋(P＜0.05或0.01);与I/R组比较,L组神经功能缺陷评分、脑水含量和伊文斯蓝含量降低,脑皮质MMP-9表达下调(P＜0.01).结论 脂氧素A4可降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,促进局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能恢复,其机制与抑制MMP-9表达上调有关.     

七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马TREK-1表达的影响

目的 探讨七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马机械敏感性钾通道TREK-1表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重240～280 g,随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(l/R组)和七氟醚预处理组(Sevo组).结扎右侧颈总动脉、颈外动脉,采用线栓法阻断颈内动脉2 h,再灌注24 h制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型;Sevo组于缺血前1 h经半密闭的吸入箱持续吸入含2.5%七氟醚的02;S组仅分离并结扎右侧颈总动脉、颈外动脉,不置入线栓.各组于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分后断头取脑,TIC染色后测定脑梗死体积,采用RT-PCR法测定海马TREK-1 mRNA的表达.结果 与S组相比,I/R组和Sevo组神经功能缺陷评分和脑梗死体积比升高(P<0.01);与I/R组相比,Sevo组神经功能缺陷评分和脑梗死体积比降低,海马TREK-1 mRNA表达上调(P<0.05).结论 七氟醚预处理可通过激活海马TREK-1减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B活性的影响

目的 评价异丙酚对大鼠局灶性脑缺血再灌住损伤时蛋白激酶B(Akt)活性的影响,以探讨异丙酚脑保护作用的机制.方法 健康SD大鼠90只,体重260～300 g,雌雄不拘,随机分为5组(n=18):假手术组(S组);局灶性脑缺血再灌注组(IR组)、P1-3组阻断大脑中动脉2 h,开放22 h,制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别于再灌注前3 min至再灌注5 min时经股静脉输注生理盐水2.5ml、异丙酚1、2、5 mg/kg(异丙酚采用生理盐水稀释至2.5 ml).于再灌注22 h时行神经行为学评分;测定大鼠脑梗死质量、免疫组化法检测大鼠脑组织caspase-3表达、Western blot法检测Akt活性.结果 与S组比较,再灌注22 h时IR组、P1-3组神经行为学评分、脑梗死质量比升高,脑组织caspase-3表达上调,P1组和P2组Akt活性升高,IR组和P3组Akt活性降低(P<0.05);与IR组比较,P1组和P2组大鼠神经行为学评分,脑梗死质量比降低,腩组织caspase-3表达下调,Akt活性升高(P<0.05).结论 静脉输注异丙酚1、2 mg/kg可通过升高Akt活性,抑制脑组织细胞凋亡,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织突触后致密物质95活化的影响

目的 探讨乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织突触后致密物质95(PSD95)活化的影响.方法 雄性清洁级SD大鼠32只,体重280 ～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、乳化异氟醚组(EI组)和脂肪乳剂组(LE组).采用大脑中动脉阻塞法制备局灶性脑缺血再灌注模型.EI组和LE组分别腹腔注射8％乳化异氟醚10.5 ml/mg或30％脂肪乳10.5 ml/mg,24h后制备模型.再灌注6h时行神经功能缺陷评分,随机取4只大鼠,处死后取缺血侧海马和皮层组织,采用Western blot法检测磷酸化的PSD95( pPSD95)的表达水平.再灌注24 h时,随机取4只大鼠,处死后取脑组织,计算脑梗死体积百分比.结果 S组未见神经功能缺陷和脑梗死发生.与S组比较,I/R组、EI组和LE组神经功能缺陷评分、脑梗死体积百分比、海马和皮质pPSD95表达水平升高(P＜0.01);与I/R组比较,EI组神经功能缺陷评分、脑梗死体积百分比、海马和皮质pPSD95表达水平降低(P＜0.05),LE组差异无统计学意义(P＞0.05).结论乳化异氟醚可通过抑制脑组织PSD95的活化,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

线粒体KATP通道介导七氟醚预处理对大鼠的脑保护作用

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠60只随机均分为七氟醚预处理组(S组)、5-HD+七氟醚预处理组(HS组)、5-羟葵酸(5-HD)组(H组)、IR组和假手术组(C组).采用大脑中动脉线栓法缺血2 h、再灌注24 h制备大鼠局灶性脑IR模型(MCAO).S组于缺血前1 h经半密闭的吸入箱吸入七氟醚(呼气末浓度维持2.4%,持续30 min).HS、H组缺血前或七氟醚预处理前经尾静脉注射5-HD(10 mg/kg).再灌注24 h后用Zea Longa评分法进行神经功能缺陷评分,TTC染色法测大鼠脑梗死容积,免疫组化法测定大脑皮质Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与IR组比较,S组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死容积显著减少(P＜0.05);但HS、H、IR组神经功能缺陷评分和脑梗死容积差异无统计学意义.S组Bcl-2、Bax表达明显高于HS、H、IR组.结论 七氟醚预处理对局灶性脑IR损伤有一定程度的保护作用.其保护作用与mitoKATP通道的激活有关,并可能是通过调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达来实现.     

不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同剂量纳洛酮后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 成年sD大鼠88只,体重270～330 g,随机分为4组(n=22):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)和不同剂量纳洛酮后处理组(N_(1,2)组).除S组外,其它3组均采用阻断右侧大脑中动脉90 min、再灌注24 h的方法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型.N_(1,2)组于再灌注即刻分别腹腔注射纳洛酮1、10 mg/kg,S组和m组给予等容量生理盐水.分别于再灌注2、24 h时测定大鼠神经功能障碍评分(NDS);再灌注24 h时测定脑梗死面积和脑组织微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平和脑组织血浆容量、徽血管直径和长度.结果 与S组相比,IR组、N_(1,2)组NDS评分均升高,脑梗死面积增大,脑组织MAP2表达水平下调,缺血侧脑组织血浆容量降低,微血管直径和长度减小(P<0.05);与IR组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05),N_1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与N_1组相比,N_2组NDS评分降低,脑梗死面积减小,脑组织MAP2表达水平上调,缺血侧脑组织血浆容量升高,微血管直径和长度增大(P<0.05).结论 纳洛酮后处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性.     

乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注时水通道蛋白4表达的影响

目的 评价乌司他丁对大鼠局灶性脑缺血再灌注时水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法 成年雄性SD大鼠135只,体重230 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=45):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(I/R组)和乌司他丁组(U组).采用线栓法阻塞大脑中动脉2h恢复灌注的方法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,U组于再灌注即刻尾静脉注射乌司他丁10万U/kg,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于再灌注6、24和48 h时处死大鼠,取脑组织,采用TTC染色法测定脑梗死体积,计算脑梗死体积比,干湿比重法测定脑含水量,免疫组化法测定AQP4表达.结果 与S组比较,I/R组和U组各时点脑梗死体积比和脑含水量升高,AQP4表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,U组各时点脑梗死体积比和脑含水量降低,AQP4表达下调(P＜0.05).结论 乌司他丁减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的机制与下调脑组织AQP4表达有关.