大鼠心肌缺血预适应相关基因5的克隆与特性分析

目的采用生物信息学分析表达序列标签AW918640以获得其所代表基因的全长序列,并对该基因进行初步的特性分析。方法利用基因银行(GeneBank)数据库,通过BLAST比对等生物信息学方法进行电子克隆,采用逆转录聚合酶链反应和基因测序等技术进行鉴定,采用mapviewer软件进行染色体定位,ExPASy和SMART软件对获得的全长基因进行翻译和蛋白质功能结构分析。结果AW918640(基因银行登录号)为一个在大鼠心肌缺血预适应后3h表达升高的表达序列标签序列,通过电子克隆得到其所代表基因的全长,且为一新基因,经逆转录取合酶链反应和基因测序证实后,将其命名为心肌缺血预适应相关基因5(MIP5),并在基因银行数据库上登录,登录号为AY553870。心肌缺血预适应相关基因5最大开放读码框为909bp,编码302个氨基酸,含有6个kelch重复基序。结论心肌缺血预适应相关基因5为一与大鼠心肌缺血预适应相关的新基因。     

细粒棘球蚴抗原B酵母表达载体的克隆与序列分析

目的 获得重组细粒棘球蚴抗原B（EgB)的真核表达蛋白，构建EgB酵母表达重组体，并对构建的重组体进行序列分析。方法以原核重组体JMl09-pMal2xEgB作为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增EgB片断。目的基因EgB片断插入酵母表达载体pYES2／NTB，再将酵母表达重组体转化DH5a菌，并对转化筛选的重组体进行序列分析。结果 共筛选得到16个重组克隆，其中7个克隆证实为EgB正确序列，并与酵母表达载体的开放阅读框(0RF)相一致。结论 成功地将细粒棘球蚴抗原B基因构建入酵母表达载体pYES2／NTB的开放阅读框。此重组体可在酵母中进一步表达特异性蛋白。     

核内不均一核蛋白A2/B1在肺癌诊断上的进展

目前研究揭示核内不均一核蛋自（hnRNP）A2／B1参与肺癌的发生,而且越来越多的证据表明它有可能成为肺癌早期诊断的标志物。本文就hnRNP A2／B1的生物学特点,与肺癌发生的相关性和肺癌早期诊断应用方面的进展进行综述。     

广州管圆线虫雌性成虫肌蛋白-1基因的克隆及生物信息学分析

目的对广州管同线虫雌性成虫肌蛋白-1（Ac-fmp1）基因的开放渎码框进行克隆,分析序列结构、功能特征及编码蛋白的理化性质,并构建体外表达载体。方法采用逆转录聚合酶链反应和,TA克隆方法克隆Ac—fmp—l基因的开放读码框全长;运用NCBI网站和ExPaSy等七物信息学在线工具分析Ac—fmp-1基因编码序列及其编码氨基酸的理化性质、结构及功能;采用基因克隆技术定向克隆至原核表达载体pET一30ac（＋）,构建Acfmp一1基因重组表达质粒。结果扩增和克隆了广州管网线虫Acfmp1基因开放读码框序列,此序列大小为1251bp,勺GenBank数据库中AcImp-1基因的编码序列同源性为99．6％,编码417个氨基酸。ProtParam预测陔基因编码蛋白在溶液中不稳定、保守性差,未发现跨膜区域。PHD法二级结构预测该蛋白质分子为a螺旋型,于氨基酸残基346～404位点处含有一个锌指结构,SignalP软件预测该蛋白分子无信号肽序列,具有较强的亲水性。该基因编码蛋白的氨基酸序列中,含有16个潜在的B细胞抗原表位。构建的原核表达载体pET—Acfmp1成功定向插入了Acfmp-1基因。结论成功扩增和克隆了广州管圆线虫Ac—fmp-1基因,编码蛋白可能是广州管圆线虫的重要抗原成分,可作为广州管网线虫病的疫苗候选分子和药物靶标。构建了用于体外表达的原核表达载体,为进行Acfmp-1功能研究奠定了基础。     

核因子-κB与心肌缺血再灌注损伤

核因子-κB（NF-κB）是一种调控多种基因转录的关键因子，在许多疾病的发生、发展中起重要作用。NF-κB的激活诱导多种炎性基因的表达，如粘附分子、细胞因子、化学趋化因子等基因的表达，而这些基因的异常表达与心肌缺血再灌注损伤关系密切。本文拟就NF-κB与心肌缺血再灌注损伤的关系作一综述。     

细粒棘球蚴抗原B酵母表达载体的克隆与序列分析

目的　获得重组细粒棘球蚴抗原 B(Eg B)的真核表达蛋白 ,构建 Eg B酵母表达重组体 ,并对构建的重组体进行序列分析。方法　以原核重组体 JM10 9- p Mal2 x Eg B作为模板 ,采用聚合酶链式反应 (PCR)扩增 Eg B片断。目的基因 Eg B片断插入酵母表达载体 p YES2 / NT B,再将酵母表达重组体转化 DH5 a菌 ,并对转化筛选的重组体进行序列分析。　结果　共筛选得到 16个重组克隆 ,其中 7个克隆证实为 Eg B正确序列 ,并与酵母表达载体的开放阅读框 (ORF)相一致。　结论　成功地将细粒棘球蚴抗原 B基因构建入酵母表达载体 p YES2 / NT B的开放阅读框。此重组体可在酵母中进一步表达特异性蛋白。     

抗核内不均一核糖核蛋白B1单克隆抗体结合131I对肺癌小鼠靶向治疗结果

核内不均一核糖核蛋白（hnRNP）B1是存在于细胞核的一种RNA结合蛋白，在肺癌细胞株和手术切除的肺癌组织中表达，在临近的正常组织、正常的支气管上皮和肺泡上皮细胞的细胞核未见表达。我们推测抗hnRNPB1单克隆抗体（MAb）能特异性与肺癌组织高表达的hnRNPB1蛋白结合，是潜在的肺癌治疗靶点。     

墨西哥利什曼原虫环形DNA1含有编码核苷酸结合蛋白基因

目的　对扩增的墨西哥利什曼原虫环形 DNA1(CD1)部分片段进行测序 ,确定具有蛋白编码功能的开放阅读框。　方法　通过脉冲电泳方法分离并使用琼脂糖酶方法回收 CD1,酶切的 CD1片段克隆于 p Zero载体 ,用 M13通用引物自动测序决定核苷酸序列 ,用 GCG- PCGENE程序分析序列。　结果　测出 4385个核苷酸序列 ,通过分析发现两个开放阅读框具有蛋白质编码功能 (编码核苷酸结合蛋白 )。　结论　墨西哥利什曼原虫 CD1遗传成分含有两个编码核苷酸结合蛋白基因     

hnRNP B1小干扰RNA在肺癌诊治中的研究进展

核内不均一核糖核蛋白B1(hnRNP B1)在肺癌各种组织类型中均有表达,是诊断早期肺癌灵敏度很高的指标.小干扰RNA在细胞内能介导RNA干扰效应,识别特异性mRNA,沉默同源基因表达,成功阻断RNA的表达,由mRNA编码的与疾病有关的任何蛋白都可以被小干扰RNA选择性清除.hnRNP B1特异性的小干扰RNA在体内可以稳定的表达,并且能特异、高效地抑制肺癌细胞hnRNP B1基因的表达,有望成为肺癌基因治疗的合理策略之一.     

血管紧张素Ⅱ通过核因子κB上调巨噬细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达

目的 观察血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞表达基质金属蛋白酶诱导因子的影响及其相关通路.方法 血管紧张素Ⅱ体外刺激人巨噬细胞,应用逆转录聚合酶链反应和Western blot测定基质金属蛋白酶诱导因子基因和蛋白表达;RNA干扰技术沉默核转录因子核因子κB p65亚基,评价核因子κB通路在血管紧张素Ⅱ上调巨噬细胞细胞基质金属蛋白酶诱导因子的表达中的作用.结果 血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞后,基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达均显著增加,核因子κB p65亚基沉默后,血管紧张素Ⅱ对基质金属蛋白酶诱导因子mRNA和蛋白表达无上调作用.结论 血管紧张素Ⅱ上调基质金属蛋白酶诱导因子的表达,此调控过程有核因子κB通路的参与.     

简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因的克隆和表达

目的克隆简单异尖线虫Ⅲ期幼虫(L3)的D-天冬氨酸蛋白酶基因(AsAP)全长,研究其表达蛋白的特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫D-天冬氨酸蛋白酶基因表达序列标签的部分信息,设计特异引物并用cDNA末端快速扩增技术得到AsAP全长序列,分析推导的蛋白序列特征,并预测其三级结构。用RT-PCR扩增简单异尖线虫L3的AsAP基因编码序列,产物用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,连入表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果简单异尖线虫L3的AsAP基因全长1 753 bp,编码453个氨基酸,与锡兰钩虫(Ancylostoma ceylanicum)的D-天冬氨酸蛋白酶相似性达65%。该蛋白具有两个保守的催化域,1个活性中心翼环,S2和S3亚位点各1个;具有由20个氨基酸组成的N端信号肽,构成疏水性强的跨膜域。不同浓度的IPTG(0.2～1.6 mmol/L)诱导对AsAP表达的影响较小,1.0 mmol/LIPTG诱导2 h后表达量达到最高水平。结论克隆并表达了简单异尖线虫的D-天冬氨酸蛋白酶。     

肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10转基因载体的构建和鉴定

目的构建小鼠肝脏特异性表达人遗传印记基因PEG10的转基因载体pALB—PEG10-EGFP，为制备转基因小鼠做准备。方法RT—PCR扩增PEG10基因cDNA序列，克隆入T载体进行酶切、测序鉴定，后将其定向克隆至真核表达载体pALB．EGFP中ALB的下游，构建转基因载体pALB—PEG10-EGFP；在Lipofectamine介导下转染L02细胞，经G418抗性筛选，挑选阳性克隆并扩大培养；采用RT—PCR、Westernb1ot、免疫细胞化学等方法分析PEG10在L02细胞中的表达和细胞内定位。结果酶切和测序结果表明pALB—PEG10-EGFP构建成功；稳定转染后的L02表达有PEG10的mRNA及蛋白，且主要定位于胞浆。结论重组体pALB—PEG10-EGFP的构建初步奠定了转基因小鼠制备的基础。     

日本血吸虫线粒体相关蛋白的特性及抗原表位的分析

目的　分析rSj338重组蛋白的氨基酸序列 ,了解该蛋白的特性 ,预测其抗原表位。方法　制备Sj338基因片段并重组入测序载体pGEM T ,对其核苷酸序列进行测定 ,分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析 ,并在BLAST网上进行同源性分析。结果　rSj338基因长 487bp ,含 1个由 45 9bp组成的开放阅读框 ,编码一由 15 3个氨基酸残基组成的多肽 ,分子量为 17 6kDa,氨基酸同源性分析发现 ,重组蛋白与人的线粒体传入受体亚单位氨基酸同源性为 46 % ,与褐鼠线粒体膜受体的前体氨基酸同源性为 44 % ,预测该蛋白的抗原表位位置为2 6～ 32、37～ 46、131～ 136和 147～ 15 1氨基酸肽段。结论　rSj338重组蛋白可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

Cloning of the cDNA for the putative calcium-sensing receptor and its tissue distribution in sea bream (Sparus aurata)

The cDNA for the calcium-sensing receptor (CaSR) gene has been cloned from the marine teleost Sparus aurata, the sea bream. The isolated clones were 3.3 kb long with an open reading frame of 2820 bp, a 5' UTR of 240 bp, and 3' UTR of 248 bp. The gene codes for a mature peptide of 940 amino acids which has three principal domains; the extracellular region is more than half the total protein, there is a seven-transmembrane domain, and there is a short intracellular domain. There is considerable sequence identity, 91%, shared between the CaSR of sea bream and puffer fish but overall similarities with mammalian CaSR peptides vary between 44% for rat and mouse and 48% with human CaSR. Nevertheless, the 18 cysteine residues of the extracellular domain are present in all sequences so far analysed of which 9 form a cysteine-rich region in sea bream similar to mammalian CaSR. The distribution of CaSR in sea bream tissues detected by in situ hybridisation showed gene expression in epithelia associated with ion transport or ion regulation including the hind gut, chloride cells of the gills, operculum, gall bladder, pituitary adenohypophysis, and coronet cells of the saccus vasculosus; this distribution was confirmed by RT-PCR. By in situ hybridisation, CaSR gene expression was also present in olfactory nerves and leucocytes.