ARDS患者肺组织细胞凋亡的变化及意义

目的：探讨细胞凋亡在急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）发病中的作用及基因调控机制,为进一步阐明ＡＲＤＳ的发病机制和在细胞凋亡水平防治本病提供理论依据。方法：ＡＲＤＳ组９例,对照组５例,采用ＴＵＮＥＬ法以及免疫组化技术观察ＡＲＤＳ患者肺组织细胞凋亡及Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统表达的变化。结果：ＡＲＤＳ早期患者肺组织细胞凋亡率较对照组明显增加,且主要表现为肺泡上皮和肺血管内皮细胞凋亡增加;Ｆａｓ抗原、ＦａｓＬ在ＡＲＤＳ早期患者肺组织表达明显上调,并且Ｆａｓ、ＦａｓＬ表达的增加与肺组织细胞凋亡增加呈平行关系。结论：肺泡上皮和肺血管内皮细胞凋亡增加和Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统活化可能参与临床ＡＲＤＳ早期的发病。     

ICAM—1在缺氧—再氧化引起的白细胞与内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）是否介导缺氧－再氧化引起的中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）的粘附反应。方法血管内皮细胞（ＶＥＣ）经缺氧再氧化（Ｈ／Ｒ）处理后,加入ＰＭＮ,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结果ＶＥＣ经Ｈ／Ｒ处理后,ＰＭＮ与其粘附率增高１倍（Ｐ＜０．０１）,ＩＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）与ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ可明显降低粘附率的增高,Ｈ／Ｒ能增加ＶＥＣ的ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结论ＩＣＡＭ－１介导Ｈ／Ｒ后的ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附反应。     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变     

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM—1,ELAM…

目的；探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多表核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法；采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ：将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９０孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响，ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达，测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化     

腮腺淋巴上皮瘤样癌中EB病毒基因的表达

采用原位杂交和免疫组化技术，检测２０例腮腺淋巴上皮瘤样癌（ＬＥＬＣ）组织中ＥＢ病毒编码的小ＲＮＡ（ＥＢＥＲｓ）、潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰｌ）、溶解感染期立即早期基因编码蛋白ＺＥＢＲＡ、早期基因编码蛋白ＥＡ－Ｄ、晚期基因编码蛋白ＶＣＡ和ＭＡ。结果ＥＢＥＲｓ阳性率为１００％（２０／２０），ＬＭＰｌ阳性率为８５％（１７／２０），ＺＥ－ＢＲＡ均为阴性，ＥＡ－Ｄ阳性率８５％（１７／２０），ＶＣＡ阳性率６０％（１２／２０），ＭＡ阳性率为０．５％（１／２０）。阳性信号限于癌细胞。癌周正常组织和间质细胞均阴性。说明在我国南方鼻咽癌高发区，腮腺ＬＥＬＣ的发生发展与ＥＢ病毒感染密切相关，本文还对ＥＢ病毒基因的腮腺ＬＥＬＣ中表达的生物学意义作了初步探讨。     

CD11／CD18介导PMN－EC粘附在烧伤早期PMN损伤血管内皮细胞中的作用

将烧伤早期病人中性粒细胞（ＰＭＮ）与体外培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）孵育，观察内皮细胞的病理形态变化和检测培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量，以反映细胞损伤程度。并计数ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率。发现烧伤早期ＰＭＮ可使ＨＵＶＥＣ变形、细胞收缩、细胞间裂隙形成、胞浆出现小空泡、核固缩、部分内皮细胞从培养皿上脱落。培养液中ＬＤＨ、ＡＣＥ、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α含量升高。预先用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８单抗（ｍＡｂ）和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ处理ＰＭＮ后，降低了ＰＭＮ与ＨＵＶＥＣ粘附百分率，ＨＵＶＥＣ损伤也明显减轻，尤其是二者联合应用时。结果提示：烧伤早期ＰＭＮ可引起ＥＣ损伤，损伤与ＣＤ１１／ＣＤ１８介导的ＰＭＮ－ＥＣ粘附相关，应用ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ和ＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８ｍＡｂ可部分阻断ＰＭＮ对ＥＣ的粘附和损伤。     

大鼠尾动脉血栓形成对乙酰胆碱舒张血管作用的影响

为了了解血栓形成后血管内皮细胞释放内皮依赖性舒张因子（ＥＤＲＦ）的功能是否改变，实验观察了血栓形成对乙酰胆碱（Ａｃｈ）内皮依赖性舒张血管作用的影响。结论：血栓形成早期，内皮细胞释放ＥＤＲＦ的功能基本正常；中期，内皮细胞释放ＥＤＲＦ的功能受损，但平滑肌细胞功能基本正常；晚期，平滑肌细胞丧失收缩功能。     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

自由基促进猪内皮细胞c－sis mRNA／PDGF－B链蛋白表达的实验研究

采用免疫组织化学和原位杂交方法，研究自由基（ＦＲ）对猪主动脉内皮细胞（ＥＣ）的ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ及血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）Ｂ链蛋白表达的影响。结果显示，ＦＲ促进ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达。ＥＣ暴露于ＦＲ２０ｍｉｎ，ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达较对照组分别增加１．０和２．２倍。提示，ＦＲ损伤ＥＣ所诱导的ＰＤＧＦ合成增多在动脉粥样硬化的发病过程中可能起重要作用。     

一氧化氮与相关药物研究的若干进展

８０年代初期，Ｆｕｒｃｈｇｏｔｔ和Ｚａｗａｄａｋｉ首先报道（Ｎａｔｕｒｅ１９８０；２９９：３７３）：在内皮完整的条件下，Ａｃｈ可引起离体动脉条的舒张，而破坏内皮后，Ａｃｈ松弛动脉条的作用消失。据此认为Ａｃｈ的这种舒张血管作用是内皮依赖性的。此种舒张血管作用的机制是由于Ａｃｈ刺激内皮细胞，使内皮细胞产生或释放某种能引起血管平滑肌舒张的物质，当时命名该物质为内皮细胞衍生舒张因子（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ -ｄｅｒｉｖｅｄｒｅｌａｘｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＥＤＲＦ）。ＥＤＲＦ的发现使我们认识了体内一种新的重要…     

可溶性血管内皮细胞生长抑制因子基因的克隆与表达

目的：对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＶＥＧＩ）基因进行克隆和表达,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法：将可溶性人ＶＥＧＩ基因克隆入载体ｐＵＣ１９后测序;再将正确的ＶＥＧＩ基因亚克隆入表达载体ｐＰＲＯＥＸＨＴｂ,ＩＰＴＧ诱导表达;初步纯化表达产物,检测对新生牛主动脉内皮细胞增殖抑制活性。结果：可溶性人ＶＥＧ     

二次PCR检测HL60细胞系PML—RARα融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲα。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｓｔｅｒ－ＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ６０细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ６０细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０＾－６个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测     

RT-PCR检测氧化砷治疗APL复发患者的PML-RARα融合基因

目的：探讨急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）患者在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗过程中，ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的变化。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术动态观察１４例ＡＰＬ复发患者在Ａｓ２Ｏ３治疗过程中，骨髓单个核细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本的改变。结果：检测的１１例诱导缓解患者中，９例存在阳性ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本，随访的６例患者中，３例呈现ＰＭＬ－ＲＡＲα转阴，但２例分别在缓解后５、７个月转阳。结论：ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＭＬ－ＲＡＲα转录本可能在一定程度上为氧化砷的疗效及预后判断提供依据     

急性肺损伤大鼠肺组织PMN扣押的变化及山莨菪碱的影响

多形核白细胞（Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ，ＰＭＮ）于肺内大量扣押是急性肺损伤（Ａｃｕｔｅ ｌｕｎｇ ｉｎｊｕｒｙ，ＡＬＩ）和急性呼吸窘迫综合征（Ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ）发病过程中的早发事件，是ＰＭＮ介导肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞广泛损伤致通透性增加、肺水肿及微血栓形成的关键所在［１］。髓过氧化物酶（Ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）主要存在于ＰＭＮ中，每个ＰＭＮ所含的酶量都是一定的，因此组织ＭＰＯ活力可能反…     

前列腺素E_2对大鼠肺泡巨噬细胞内皮素生成的调控

采用放射免疫分析法观察大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）的内皮素（ＥＴ）生成。结果显示：①未受刺激的ＡＭ存在ＥＴ的基础分泌；②脂多糖（ＬＰＳ）、佛波醇酯（ＰＭＡ）和Ｃａ２＋导入剂Ａ２３１８７均可显著促进ＡＭ的ＥＴ生成；③钙调蛋白（ＣａＭ）抑制剂Ｗ７可阻断ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应；④外源性前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）可抑制ＬＰＳ和ＰＭＡ的促ＥＴ生成效应，消炎痛可增强ＬＰＳ的作用。结果表明，ＡＭ具有产生ＥＴ的功能，调控ＡＭ生成ＥＴ的细胞内信号转导途径存在依赖ＰＫＣ和Ｃａ２＋－ＣａＭ二条途径，ＡＭ产生的内源性ＰＧｓ对ＥＴ的生成具有负性调节作用     

EXPERIMENTAL WORK AND RESEARCH The Experimental Study of Xue Guan Tong（血管通）on PreventingRestenosis after Percutaneous Transluminal A

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＷＯＲＫＡＮＤＲＥＳＥＡＲＯＨＴｈｅＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＸｕｅＧｕａｎＴｏｎｇ（血管通）ｏｎＰｒｅｖｅｎｔｉｎｇＲｅｓｔｅｎｏｓｉｓａｆｔｅｒＰｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓＴｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌＡｎｇｉｏｐｌａｓ...     

正常SD大鼠心血管系统内皮素转换酶表达水平及意义

目的：探讨正常ＳＤ大鼠心脏及血管（动脉、静脉）内皮素转换酶（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ ＥＣＥ）ｍＲＮＡ的分布。方法：半定量ＲＴ－ＰＣＲ法检测组织中的ＥＣＥ ｍＲＮＡ,同时以甘油醛－３－磷酸脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒ－ａｌｄｅｌｙｄｅ－３－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＧＡＰＤＨ）作内参照。结果：正常ＳＤ大鼠心脏各部位及血管（动脉、静脉）ＥＣＥ ｍＲＮＡ的     

基因芯片对PMA激活的血管内皮细胞早期反应基因的研究

目的 :用基因芯片研究 PMA激活的血管内皮细胞的早期反应基因 (imm ediate early response gene,ERG)。方法 :以包含 40 96条人类基因的 DNA芯片检测血管内皮细胞受代谢增强剂 PMA(phorbol myristate acetate)激活后早期的基因表达谱 ,并从中筛查出 ERG。结果 :血管内皮细胞受 PMA作用 6 h后 ,17条基因上调 ,11条下调。数据处理聚类分析表明 17条上调基因中多数 (13/ 17)属蛋白质磷酸酶和转录调控因子基因 ,而下调基因中多数 (9/ 11)为细胞分裂相关基因。结论 :证明PMA激活的人血管内皮细胞早期反应基因主要是转录调控因子和蛋白质磷酸酶基因。     

二次PCR检测HL_（60）细胞系PML－RAR_α融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲ_α。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｏｓｔｅｒＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ_（６０）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ_（６０）细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０￣（－６）个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测ＡＰＬ微量残留白血病细胞一种灵敏、有效的手段。     

大鼠肺微血管内皮细胞的G蛋白亚型鉴定

本实验拟在体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 (ＲＰＭＶＥＣｓ)的基础上 ,用免疫细胞化学Ｓ Ｐ法和免疫荧光细胞化学间接法检测ＲＰＭＶＥＣｓ膜Ｇ蛋白亚型。1　材料和方法1.1　材料　　ＤＭＥＭ培养干粉 (美国ＧＩＢＩＣＯ公司 ) ;荧光 (ＦＩＴＣ)结合的羊抗兔抗体、兔抗大鼠ＩｇＧ抗体免疫血清 (北京中山公司 ) ;Ｇｓα、Ｇｉα和Ｇｑα兔抗大鼠抗体 (ＩｇＧ) (ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ .Ｉｎｃ)。1.2　检测ＲＰＭＶＥＣｓＧ蛋白亚型方法1.2 .1　免疫细胞化学Ｓ Ｐ法　　ＲＰＭＶＥＣｓ经 4%多聚甲醛固定 ,3 %Ｈ2 Ｏ2 …