糖皮质激素诱导兔咬肌萎缩的实验

目的：探讨肌内注射糖皮质激素诱导咬肌萎缩的效果及其组织改变。 方法：实验于2004—12／2005—07在南方医科大学南方医院实验室完成。选择健康成年新西兰白兔30只，随机分为6组，每组5只，正常对照组、术后2周实验组、术后4周实验组、术后8周实验组、术后12周实验组、术后24周实验组。实验组每只动物进行自身对照，以一侧咬肌做实验侧，对侧咬肌为对照。B超测松弛状态下咬肌最大厚度，完整切除双侧咬肌测量咬肌湿重，并取部分肌组织做切片进行苏木精-伊红染色、三磷酸腺苷酶染色和烟酰胺腺嘌呤二核苷四氮唑还原酶染色，光镜下观察及图像分析。 结果：纳入动物30只，均进入结果分析。①咬肌厚度和咬肌湿重测量：实验组实验侧咬肌厚度和咬肌湿重明显减小，与自身对照侧及正常对照组比较差异均显著，而且从第2周开始逐渐加重，至第8周最明显，第24周时维持与第12周水平相同，未见进一步增加或减少。②组织学检查结果：常规冰冻切片苏木精-伊红染色观察实验侧肌肉纤维排列整齐，肌细胞完整，未见变性坏死，细胞核位于肌细胞的边缘，肌节完整。横切面肌细胞直径减小。自身对照侧肌纤维形状、大小在实验过程中无明显改变，与正常对照组肌纤维相似。③酶组织化学检查结果：兔正常咬肌为混合型肌纤维，Ⅰ型和Ⅱ型肌纤维相间排列，Ⅰ型纤维小于Ⅱ型纤维。三磷酸腺苷酶染色显示实验侧Ⅱ型纤维明显减小，其中以Ⅱb更加明显。自身对照侧肌纤维类型与正常对照组肌纤维无明显差别。Ⅱ型纤维面积减小程度逐渐增加，至第8周最高，第12周时略有增大，第24周维持与第12周时水平相近。 结论：曲安奈德有肯定的诱导肌萎缩的作用，主要为Ⅱ型肌纤维萎缩，对Ⅰ型肌纤维无明显影响。     

肌内神经对股直肌损伤修复的作用

背景:既往对损伤骨骼肌的处理主要是修复肌膜及肌外神经.目的:实验拟观察肌内神经对损伤股直肌的修复作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,组织学观察,于2006-0912007-08在重庆医科大学动物实验中心完成.材料:新西兰大白兔20只,体质量2.0～2.5 kg,右侧股直肌用于制备骨骼肌损伤模型,左侧股直肌作为对照.方法:20只大白兔随机数字表法分为2组.肌内神经完整组采用不全离断方式,在神经入肌点以远4.0～5.mm处横断股直肌而保留肌内神经完整,肌内神经断裂组采用完全离断方式在神经入肌点以远4.0～5.0mm处横断股直肌及肌内神经.主要观察指标:①术后28周测量股直肌的湿重、股直肌等长收缩力的变化.②苏木精一伊红染色观察股直肌形态变化,Masson三色染色观察纤维化程度,肌球蛋白=三磷酸腺苷酶染色及还原型辅酶I四唑氮还原酶染色区别肌纤维的类型,并计算肌纤维横断面面积.结果:①与对照侧相比,肌内神经断裂组实验侧股直肌湿重下降,等长收缩力下降(P<0.05).②与对照侧相比,肌内神经完整组Ⅰ型、Ⅱa型肌纤维横断面面积恢复较佳,Ⅱb型肌纤维较差(P<0.05),各型肌纤维构成比例基本恢复;肌内神经断裂组Ⅰ型、Ⅱ a型、Ⅱb型肌纤维横断面面积均恢复较差(P<0.05).结论:肌内神经能够促进损伤骨骼肌的肌纤维再生,减轻肌肉萎缩及纤维变性,恢复肌纤维的正常形态及组成方式,从而促进损伤骨骼肌的恢复.     

骨骼肌卫星细胞移植对钝挫伤动物模型的修复作用

目的探讨新生大鼠肌卫星细胞移植修复钝挫伤致动物骨骼肌损伤的作用。 方法取Sprague-Dawley成年大鼠36只,制作右后肢钝挫伤动物模型,随机分为生理盐水对照组和实验组,实验组大鼠左侧末造模正常后肢作为正常对照。用组织块培养法培养肌卫星细胞,免疫荧光抗体细胞染色鉴定后进行荧光标记。用微量注射器抽取肌卫星细胞悬液0.2 ml缓慢注射于实验组右侧小腿腓肠肌的内、外侧头,生理盐水对照组相同部位注射等量的生理盐水。术后第5,10和15天分别测定大鼠肌电图（记录振幅、波宽）、肌湿重恢复比值、HE染色肌纤维横切面积灰度值。所得数据用SPSS 13.0版统计软件进行双因素方差分析。 结果对新生大鼠肌卫星细胞进行分离纯化、鉴定和移植。移植前免疫抗体荧光化学染色鉴定细胞呈鲜红色,荧光标记细胞核为蓝色。术后移植细胞观察发现,随着移植时间延长,荧光细胞荧光度减弱,数目减少,逐渐形成肌管,融入肌组织参与修复;HE染色显示,游离在肌纤维间隙中的细胞核逐渐融入基膜内侧,肌组织轮廓逐渐清晰;肌电图检查结果显示,随着移植时间延长,纤颤电位和正锐波逐渐减少,波形趋于正常;肌电图的振幅及波宽测定结果显示,实验组损伤侧的恢复情况明显优于生理盐水对照组并且接近正常对照侧;HE染色肌纤维横切面积灰度值测定结果显示,移植后第5天,生理盐水对照组和实验组损伤侧灰度值明显低于正常对照侧,术后第10天、第15天观察,实验组损伤侧灰度值明显高于生理盐水对照组,接近于正常对照侧;实验组与生理盐水对照组肌湿重恢复比值结果显示,实验组肌湿重恢复比值≈1,而生理盐水对照组远<1,方差分析结果显示差异有统计学意义（P<0.01）。 结论新生大鼠骨骼肌卫星细胞异体移植对修复损伤肌肉有显著效果。     

经皮神经电刺激预防失神经肌萎缩的实验研究

目的:观察经皮神经电刺激(TENS)在减轻失神经肌肉萎缩和提高神经端侧缝合侧枝萌出率中的作用。方法:18只成年新西兰白兔,随机分为A、B、C3组,切断双侧腓神经后与外膜开窗的胫神经端侧缝合。左后肢为实验侧,给予TENS,持续6周。右后肢为对照侧,不给电刺激。分别于术后3、6、16周取材,进行大体观察、神经肌肉组织学、神经电生理、肌湿重和透射电镜检查。结果:各组实验侧胫前肌湿重和肌纤维截面积,腓神经有髓纤维数、传导速度和振幅均高于对照侧(P<0.05),A组两侧肌湿重及C组腓神经潜伏期差异无显著性(P>0.05)。结论:TENS在减轻失神经肌肉萎缩和提高神经端侧缝合侧枝萌出率方面有积极作用。     

分米波对失神经肌肉形态改变的影响

目的:探讨分米波治疗对神经损伤吻合术后肌肉形态改变的影响。方法:大鼠坐骨神经离断后行9—0无损伤线吻合,术后实验组行分米波局部辐射,分别于术后第4周、8周、12周观察大鼠步态并取腓肠肌行湿重及肌细胞直径和截面积与对照组对比。结果:各时间点实验组大鼠腓肠肌湿重、肌细胞直径和截面积均高于对照组。结论:分米波可明显延缓失神经肌细胞的萎缩,促进其功能恢复。     

肌肉剥离术后嚼肌肌组织及其功能损伤的实验研究

目的:通过观察犬的嚼肌剥离术后的变化,探讨肌肉剥离术对嚼肌的影响。方法:杂种成年犬16只,行嚼肌剥离术,术后应用乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶作酶组织化学染色,观察嚼肌的酶组织化学变化。酶组织化学切片用图像分析系统分析,对肌纤维个数、直径、透光度等参数进行计算,所得数据进行统计学处理。比较正常对照组和实验组之间肌纤维类型、个数、直径、透光度均值差异。结果:肌肉剥离术可使嚼肌产生暂时性损伤及废用性萎缩,表现为术后1个月组出现moth-eaten纤维,两型肌纤维直径减小,酶活性降低。但这种变化是暂时的,随着肌肉重新附着,肌功能恢复,术后个月组肌纤3维moth-eaten纤维消失,肌纤维直径及酶活性均恢复接近正常。结论:肌肉剥离术不会引起嚼肌肌组织的不可逆性损害。     

带神经血管肌束分点植入后失神经肌肉形态学改变

背景:失神经支配的肌萎缩一直是临床治疗的难点,目前仍没有突破性的研究成果。目的:观察带神经血管的肌束分点植入后对失神经支配肌肉形态学影响,探求一种失神经支配肌萎缩研究的新思路。设计、时间及地点:同体对照动物实验,于2006-07/2007-12在南京鼓楼医院手外科完成。材料:清洁级健康Wistar大白鼠30只,雌雄不限,体质量250g左右。方法:建立大鼠双下肢腓肠肌外侧头失神经支配模型。其中右侧在腓肠肌外侧头肌腹中远1/3处做两切口,用比目鱼肌作成带神经血管肌束,分点植入失神经支配肌肉内,作为实验组。左侧只切断腓肠肌外侧头肌支作为对照组。分别于术后4,8,12周取材。主要观察指标:观察肌肉外观、超微结构变化,测定肌纤维周径及截面积、胶原纤维含量。结果:①实验侧的腓肠肌饱满、有弹性、色泽好、切之出血多。对照组肌肉萎缩变细、色泽灰白、切之出血少。②各时间点实验组肌细胞周长和肌肉纤维横截面积测量值大于对照组(P均<0.01);胶原纤维含量低于对照组(P<0.01)。③实验组细胞核基本正常,肌膜光滑,肌纤维间距小,线粒体数量多、嵴完整。对照组肌肉细胞核变形、空泡化,肌膜呈乳突样改变,肌纤维明显变细,间距增大,线粒体数量少、出现空泡化及絮状化,脂滴增多。结论:带神经血管肌束分点植入法是一种延缓失神经支配肌肉萎缩的有效方法。     

超短波对大鼠周围神经缺损修复术后神经再生的影响*

目的：通过检测小剂量超短波对脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损后再生神经传导速度、患侧胫前肌湿重比率、患侧L4脊髓内脑源性神经营养因子（BDNF）和降钙素基因相关肽（CGRP）的表达,来观察小剂量超短波对周围神经缺损修复术后神经再生的影响。方法：将36只Wistar大鼠随机分成3组：正常组（n=4）,对照组（n=16）及实验组（n=16）,对照组采用脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经1cm 缺损,实验组于术后第2天开始给予小剂量超短波治疗,7min/天,1次/天,直至取材,后两组分别于术后第2、4、8、12周时检测患侧L4脊髓内BDNF及CGRP蛋白表达,术后第12周时行患侧胫前肌湿重比率及再生神经电生理检测。结果：①对照组术后第2周时患侧L4脊髓内BDNF表达已开始增高,第4周时达高峰,第8周后逐渐降低,第12周时仍显著高于正常对照组,与对照组相比,实验组只有在第8周时BDNF蛋白表达明显高于对照组（P<0.05）,其余各时间点差异无显著性意义。②对照组患侧L4脊髓内CGRP蛋白表达与BDNF表达趋势基本一致,实验组在术后各时间点脊髓内CGRP蛋白表达均明显高于对照组（P<0.05）。③与对照组相比,术后第12周时实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏时缩短,胫前肌湿重比率明显增加（P<0.05）。结论：小剂量超短波可以促进大鼠周围神经缺损修复术后神经髓鞘及轴索的再生,此作用可能与小剂量超短波上调患侧脊髓内CGRP蛋白的表达,延长BDNF表达的高峰持续时间有关。     

家兔失神经支配腓肠肌肌纤维退行性变与修复性再生的超微结构观察

目的:观察家兔腓肠肌失神经支配后肌纤维在退行性变与修复性再生过程中超微结构的变化,探讨失神经支配骨骼肌修复性再生障碍的机制。方法:实验于2005-04/2006-04在南方医科大学中心实验室完成。选择成年新西兰大白兔20只,切断一侧胫神经腓肠肌肌支,术后1,4,8,12,16周分别采用耳缘静脉注射空气处死4只。取实验侧和对照侧腓肠肌内侧头肌组织少许,用于制备超薄切片标本,透射电镜观察各时间点兔失神经腓肠肌肌纤维形态。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①正常家兔腓肠肌肌原纤维排列整齐,肌小节和Z线清晰,线粒体均匀分布在肌原纤维之间,排列规则,细胞核位于质膜周边,未见溶酶体。②失神经支配1周,肌原纤维排列基本整齐,线粒体增多,无明显肿胀。③失神经支配4周,线粒体明显增多肿胀,部分线粒体空泡样变,溶酶体增多,Z线模糊,肌原纤维间隙增大。④失神经支配8周,肌纤维明显萎缩退行性变,大部分肌原纤维消失,残留的肌原纤维变得模糊,间隙增大,肌小结丧失正常的结构,胞浆内含有大量空泡变性的细胞器,可发现畸形核,染色质浓缩、边集,肌细胞膜极度皱缩。镜下发现较多的位于基膜下活化的肌卫星细胞,细胞内含有发达的粗面内质网和丰富的胞浆。一些肌卫星细胞直接与肌纤维融合。同时在间质中可发现一些形态上很象成纤维细胞的细胞,不过这些细胞含有大量的粗面内质网,胞浆内有颗粒和微丝,少量的圆形的线粒体。在退行性变的肌纤维基膜下也可发现肌管样结构的再生肌细胞,在这些肌管内一些肌丝在一起聚集成束,没有组装成肌原纤维,没有正常的肌小结结构。在它们周围有细小的空肌管样结构,可能是以往再生的肌细胞退行性变后的残余体。在间质中可发现一些细小的肌纤维。⑤失神经支配12周,大部分肌纤维萎缩退行性变,但是仍可发现没有萎缩的肌纤维,这些肌纤维细胞核位于周边,有良好的收缩系统,纤维排列规则,Z线清晰,有完整的肌膜。⑥失神经支配16周,肌卫星细胞的数量明显减少,并可发现大量细小的肌纤维,多分布在较大的肌纤维附近,肌膜完整平滑,无皱褶。可发现核位于中央的肌纤维,胞浆内肌原纤维结构清楚,但是肌原纤维的排列远不如核位于周边的肌纤维整齐,说明其收缩系统发育不良。结论:失神经支配后肌细胞退行性变和修复性再生同时存在,再生的肌细胞不能,化发育为成熟的肌纤维,进而发生退行性变。长时间失神经支配,肌卫星细胞的耗竭是失神经支配骨骼肌晚期的主要超微结构变化。     

转化生长因子β1对咬肌再附着界面生物力学的影响

目的:观察转化生长因子β1对兔咬肌再附着界面的生物力学影响,探讨促进咬肌再附着的方法。方法:实验于2004-11/2005-04在南方医科大学附属南方医院动物实验中心完成。健康新西兰大白兔18只,随机分为3组(术后1,2,3个月组),每组6只。将实验用兔的双侧咬肌从下颌骨附着处剥离,下颌骨截骨后将咬肌复位,一侧定期注射转化生长因子β1,另一侧作为对照。分别在术后1,2,3个月处死动物各6只,取实验侧和对照侧下颌骨骨块,大小1cm×0.5cm,连同其上附着咬肌一起取下进行拉伸试验,检测肌-骨再附着界面突然断裂时数据,即为咬肌再附着界面的最大断裂负荷。记录并分析术后1,2,3个月咬肌再附着界面的生物力学变化。结果:实验兔18只均进入结果分析。①术后1,2,3个月实验侧肌-骨界面最大断裂负荷明显高于对照侧犤实验侧:(0.58±0.13),(0.74±0.07),(1.28±0.21)kg;对照侧:(0.46±0.07),(0.62±0.11),(0.93±0.16)kg,P<0.05犦。②双侧咬肌-下颌骨再附着界面的附着强度随时间延长逐渐增强,实验侧与对照侧比较有显著差异。结论:外源性转化生长因子β1可以促进咬肌剥离后的再附着。