柚皮苷抑制骨关节炎软骨细胞凋亡实验研究

目的研究柚皮苷在炎症环境下对人骨关节炎（OA）软骨细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法采用不同浓度（0、0．1、1、10、100 mg／L）柚皮苷对 OA 软骨细胞进行预处理2 h 后,加入或不加入炎症因子混合液（白细胞介素-1β5 ng／ml 和肿瘤坏死因子-α20 ng／ml）共作用24 h。首先检测柚皮苷对炎症环境下软骨细胞活性和凋亡的影响,然后检测软骨细胞在柚皮苷作用下的一氧化氮（NO）水平及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3、caspase-8活性变化情况。结果柚皮苷预处理后软骨细胞在炎症因子刺激下发生凋亡显著减轻,且其抑制细胞凋亡作用具有浓度依赖性。进一步分子生物学检测显示,柚皮苷对 NO 生成及激活的 caspase 信号转导通路具有明显抑制作用。结论柚皮苷能有效抑制人 OA 软骨细胞凋亡,其作用机制可能是柚皮苷阻断了 NO 产生并抑制了下游的 caspase 信号通路,有望应用于 OA 治疗新药的研发。     

柚皮苷抑制PMMA颗粒诱导的破骨细胞形成及骨溶解

目的从体外和体内实验2个方面评价柚皮苷对聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）诱发的破骨细胞性骨溶解的作用。方法培养破骨细胞前体细胞RAW264.7,使用PMMA颗粒刺激细胞,观察柚皮苷的治疗作用。检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、Ca2＋释放实验以及TRAP、组织蛋白酶（CPK）、NF-κB的基因表达。采用小鼠膝关节置钉模型评价柚皮苷对PMMA诱发骨吸收的作用,对实验标本采用生物力学拔出试验进行评价。结果柚皮苷可以有效地抑制破骨细胞的形成并下调骨吸收基因标记物的表达,剂量为10μg/ml时表现出对TRAP活性的最大抑制作用。在颗粒刺激培养液中柚皮苷降低了钙的释放。柚皮苷缓解了膝关节置钉模型中PMMA颗粒刺激所造成的长期的骨吸收,表现为骨体积分数的增加和最大钉拔出力的增加。300 mg/kg的灌胃剂量可达到最好的疗效。结论柚皮苷抑制PMMA诱导的破骨细胞形成,降低PMMA颗粒刺激的钙释放。在观察慢性骨吸收的长期模型中,柚皮苷也有效抑制PMMA诱发的骨吸收,并保留了置入物的稳定性。     

柚皮苷通过HIF-1α/VEGF信号促进H型血管抗骨质疏松的研究

目的 观察柚皮苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织HIF-1α/VEGF信号通路和H型血管形成的影响,探讨柚皮苷防治骨质疏松症的作用机制。方法 建立去卵巢骨质疏松大鼠模型（随机将36只大鼠分为去卵巢组、假手术组和柚皮苷治疗组）。柚皮苷治疗３个月后,检测血清和骨髓上清骨代谢指标和HIF-1α/VEGF信号通路变化,检测骨密度(bone mineral density, BMD)、骨微结构及H型血管变化。结果 柚皮苷治疗组大鼠血清中成骨代谢指标[骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、I型原胶原分子N 端前肽(PINP)]升高;而骨吸收标志物血清C端交联肽（CTX）降低;HIF-1α在血清和骨髓上清中表达均升高;VEGF在骨髓上清中表达升高,而血清中无明显改变;BMD和Micro-CT结果显示柚皮苷治疗组大鼠骨密度和骨量增加;同时股骨近端H型血管表达升高。结论 柚皮苷可以调节骨代谢,改善骨质疏松大鼠骨密度,发挥抗骨质疏松作用,其作用机制可能是通过调节HIF-1α/VEGF信号通路、促进H型血管形成来实现的。     

失重下柚皮苷作用于T细胞干预的成骨细胞增殖分化研究

摘要：目的 探讨在模拟微重力情况下，柚皮苷作用于T淋巴细胞-成骨细胞共培养体系后，成骨细胞的增殖分化情况及其机制。方法 提取SD乳鼠成骨细胞，在微重力环境下，与大鼠T淋巴细胞体外共培养。分为干预组与对照组。干预组加入中药物质柚皮苷干预液，对照组加入同体积不含血清的培养基。通过CCK-8检测成骨细胞增殖情况、ALP活性检测盒检测ALP活性、Western Blot 测定蛋白PCNA表达观察细胞增殖情况，测定细胞外调节蛋白激酶ERK表达，研究其机制通路。结果 干预组的ALP活性高于对照组，PCNA蛋白表达增高，ERK蛋白表达增高，且具有统计学意义( P＜0. 05)。结论 在微重力下柚皮苷促进了T细胞干预下的成骨细胞增殖分化，其作用机制可能是通过激活ERK通路来实现的。     

柚皮苷抑制胶原诱导小鼠关节炎症作用机制的实验研究

目的检测柚皮苷干预后胶原诱导(CIA)小鼠关节炎症相关指标的变化。方法选择雄性DBA1/J小鼠35只,随机分为正常组(5只)和实验组(30只)。实验组炎症评分达2分以上再分为骨碎补组(10只)、CIA模型组(10只)、柚皮苷组(10只)。各组均以灌胃方式给药,每天1次,连续20次。给药20 d后处死小鼠,ELISA方法测定小鼠血清中IL-6、TNF-α的水平,HE染色观察滑膜炎症表达情况,免疫组化法检测小鼠膝关节滑膜组织中HIF-1α、CXCR4蛋白的表达情况。结果给药第11天开始,柚皮苷组炎症评分低于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05);给药第15天开始,柚皮苷组与骨碎补组炎症评分均低于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05);给药第19天,骨碎补组与柚皮苷组炎症评分均有降低表现,且柚皮苷组炎症评分较骨碎补组低,差异有统计学意义(P0.05)。柚皮苷、骨碎补组较CIA模型组的IL-6、TNF-α水平均下降,差异有统计学意义(P0.01)。柚皮苷组的IL-6水平较骨碎补组低,TNF-α水平较骨碎补组高,但差异无统计学意义(P0.05)。柚皮苷组HIF-1α、CXCR4的IOD值低于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05);骨碎补组HIF-1α、CXCR4的IOD值与CIA模型组比较差异无统计学意义(P0.05);骨碎补组与柚皮苷组2组间差异无统计学意义(P0.05)。柚皮苷、骨碎补组染色阳性区域Area值均低于CIA模型组,差异有统计学意义(P0.05);骨碎补组与柚皮苷组2组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论柚皮苷对HIF-1α上游的炎症因子IL-6、TNF-α及下游的CXCR4都具有一定调控作用,显著的降低了CIA小鼠炎症反应。     

柚皮苷促进成骨细胞分化并有效改善卵巢切除所致的骨质疏松

目的 评价柚皮苷对成骨细胞增殖与分化的作用,并采用大鼠骨质疏松模型评价柚皮苷的治疗效果.方法 采用不同浓度的柚皮苷处理大鼠骨髓基质细胞,观察其增殖、分化与功能的改变.采用低、中、高三种不同剂量的柚皮苷作为治疗组,磷酸缓冲液(PBS)作为对照组,对卵巢摘除诱发骨质疏松的大鼠灌胃2个月.应用骨质疏松大鼠右侧股骨的X线照片和显微CT扫描测量骨矿密度以及骨体积分数,使用骨质疏松大鼠左侧胫骨的病理切片检测组间骨小梁厚度和骨小梁间隙的变化.结果 体外研究表明柚皮苷可有效增加骨髓基质细胞的增殖和成骨分化,浓度为10 μg/ml时对骨钙素的表达具有最显著的作用.骨髓基质细胞对柚皮苷的治疗呈现一种延迟反应模式.柚皮苷并有效逆转了卵巢切除导致的骨质疏松,增加了骨密度、骨容量和骨小梁厚度.300 mg/kg(中剂量)是具有满意治疗效果的最优剂量.结论 柚皮苷促进骨髓基质细胞的分化与增殖,增加骨钙素的表达,它能有效逆转卵巢切除大鼠的骨质疏松过程.本研究表明柚皮苷是治疗骨质疏松的潜在有效药物.     

柚皮苷治疗类风湿关节炎的作用机制研究进展

中药化橘红、骨碎补是治疗类风湿关节炎的常用药,其主要有效成分柚皮苷具有良好的抗炎和抗氧化作用,且能够修复类风湿关节炎所致关节软骨损伤,延缓其病理进程,临床预防和治疗类风湿关节炎具有潜在应用价值。柚皮苷治疗类风湿关节炎的作用机制主要为保护与修复骨质,对炎症的抑制作用,抗氧化和免疫抑制作用,有很大的临床应用价值,可为临床治疗类风湿关节炎提供新的思路。     

柚皮苷联合脉冲电磁场对大鼠股骨骨折愈合的影响

[目的]应用柚皮苷联合脉冲电磁场对大鼠股骨骨折模型进行干预,探讨其对大鼠股骨骨折愈合的影响及其机制。[方法]选用在相同条件下喂养的6~8周清洁级SD大鼠,制作成股骨骨折模型,按照组内均衡一致原则随机分为4组,即对照组(Con组)、脉冲电磁场组(M组)、柚皮苷组(Y组)、柚皮苷联合脉冲电磁场组(Y+M组),每组9只。于造模完成后第2d开始处理,Con组行生理盐水灌胃,M组脉冲电磁场刺激,Y组柚皮苷灌胃,Y+M组柚皮苷灌胃联合脉冲电磁场刺激。观察4种不同处理方法对大鼠股骨骨折愈合的影响。[结果]术后3、6周,DR显示Y+M组骨折愈合快于Con组、M组、Y组,差异具有统计学意义;Micro-CT显示Y+M组骨矿物质含量、骨体积分数高于Con组、M组、Y组,差异具有统计学意义;术后6周,组织学观察显示Y+M组纤维骨痂形成、软骨内成骨优于Con组、M组、Y组,差异具有统计学意义;Real-time PCR显示Y组、Y+M组上调骨痂组织中OPG mRNA表达,抑制RANKL mRNA表达,M组上调OPG mRNA表达增强,而对RANKL mRNA表达无明显影响。[结论]柚皮苷联合脉冲电磁场可显著促进骨折愈合,柚皮苷组促进骨折愈合强于脉冲电磁场组,柚皮苷联合脉冲电磁场可能通过上调OPG mRNA表达,抑制RANKL mRNA表达,促进骨折愈合。     

柚皮苷促进人牙周膜成纤维细胞成骨分化能力的研究

目的:研究柚皮苷对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLCs)成骨分化能力的影响。方法:组织块法培养原代HPDLCs,加入含不同浓度柚皮苷的培养液(100、10、1、0.1、0.01 mg/L),用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测HPDLCs的培养上清液中ALP的活性,用实时定量PCR检测加入柚皮苷后不同时间点(24h、48h、72h),HPDLCs的骨形成蛋白2(BMP2)、I型胶原蛋白(Col I)、骨保护蛋白(OPG)和核因子κb受体活化因子配体(RANKL)的mRNA表达水平的变化。结果:与对照组比较,不同浓度柚皮苷试验组HPDLCs培养上清液中的ALP活性显著增高(P<0.05),其中1mg/L组的ALP活性最高,此浓度柚皮苷作用下,24h后,BMP-2的mRNA表达水平显著升高,并呈时间依赖性,48h后,Col I和OPG的mRNA表达水平也显著上升。结论:柚皮苷促进了HPDLCs细胞向骨细胞分化功能,其作用可能是通过上调Coll I、BMP2和OPG基因的表达。     

交锁髓内钉与钢板内同定微创治疗胫腓骨多段骨折的病例对照研究

目的 :采用小鼠气囊模型评价柚皮苷对聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate,PMMA)诱发的破骨细胞性骨溶解的作用。方法:选取48只雌性8~10周龄Balb/c小鼠纳入研究,采用背部注入空气法在其中的32只小鼠中建立气囊模型,植入同种系小鼠颅骨(颅骨源自其余的16只小鼠)。实验共分为4组(150 mg/kg柚皮苷治疗组、30 mg/kg柚皮苷治疗组、PBS空白对照组、DMSO载体对照组),每组8只动物。对两个柚皮苷治疗组和DMSO载体对照组的小鼠使用PMMA颗粒刺激,每组8只相应浓度进行处理,颗粒刺激第7天收集囊膜和囊内植入骨进行抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色、Ca2+释放以及改良Masson染色病理分析进行评价,观察柚皮苷的治疗作用。结果:与DMSO载体组相比,柚皮苷治疗组降低了TRAP阳性细胞浸润的数量,差异有统计学意义(P<0.01);其中150 mg/kg浓度优于30 mg/kg浓度(8.90±1.75 vs 15.23±1.86)。在气囊模型骨吸收冲洗液中,柚皮苷能降低钙的释放,特别是150 mg/kg浓度组更为明显(P<0.05)。改良的Masson染色显示柚皮苷可减少PMMA刺激所致的骨胶原的丢失,但150 mg/kg浓度组作用大于30 mg/kg浓度组。大体及病理切片显示两种浓度的柚皮苷显著降低PMMA刺激所致的炎性反应,表现为气囊厚度的减低和炎性细胞浸润数量的减少。结论 :柚皮苷抑制PMMA诱导的破骨细胞形成,有效缓解PMMA诱发的炎性反应以及随后发生的急性骨吸收。     

人工关节表面涂层研究现状

生物固定型人工关节假体表面涂层的研究成为目前人工关节领域研究的热点。随着组织工程学、材料学的发展,在人工关节表面用材、涂层类型及其处理方式等方面都有很多成果出现,本文就以上几个方面加以综述。     

护士医院安全文化认知的调查研究

目的 了解护士对医疗护理安全文化的认知情况,为针对性地对护士进行医院安全文化教育提供依据.方法 采用经修改后的医疗安全问卷(内容包括与安全有关的病房组织文化、医院组织文化和差错事故报告系统)对233名护士进行调查.结果 护士对医疗安全知识认知总分为170.58±9.63,对病房组织文化、医院组织文化、医疗差错事故报告系统的认知评分分别为78.82±6.26、43.96±5.10、57.39±5.33.不同职称、科室护士对医疗差错事故报告系统的认知水平比较,差异有统计学意义(均P＜0.05);不同科室、学历、年龄、工龄、职称的护士对病房组织文化认知水平比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).不同特征(学历、科室除外)护士对医院组织文化的认知水平比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 护士对安全文化认知度低,需要加强护士医疗安全的相关意识,构建积极的医院安全文化.     

附睾相关的抗生育研究及进展

虽然至今尚没有一种直接作用于附睾并可供临床试验用的男性避孕药 ,但对附睾功能和精子在附睾成熟的研究表明 ,附睾极有可能成为男性抗生育最理想的靶器官。相关的动物试验包括直接作用于附睾精子如磺胺水杨嗪类、影响能量代谢与精子活动的氯化甘油和氯化糖苷类化合物、影响附睾环境如雷公藤单体和铜粉等。对附睾特异蛋白研究 ,可望发现免疫学途径的靶抗原 ,用于制备避孕疫苗。近年国内外对附睾特异表达基因的研究取得某些进展 ,如SC342、bin1基因的克隆和功能研究 ,有助于临床附睾炎和不育症的诊治 ,同时有望成为干扰附睾精子成熟达到避孕目的的新靶点。     

声热处理灭酶试验

研究了声热处理钝化毛豆过氧化物酶.实验条件为:温度60～90℃、超声波频率25kHz、功率800 W.以在不同温度(60～100℃)下热处理过氧化物酶的活性作为对照,研究超声波协同热力灭酶的机理.响应面分析结果表明:在25 kHZ、800 W的超声波、83℃下处理1.52 min,过氧化物酶钝化效果最佳.目前的研究有助于声热作用作为新加工工艺逐渐取代传统热加工处理.