小干扰RNA抑制bcl-xL表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨凋亡抑制分子bcl-xL表达下调对食管癌细胞化疗敏感性的影响。方法根据人bcl-xL基因序列设计和合成3对小干扰RNA,将其转染于体外培养的人食管癌细胞株Eca-109,通过RT-PCR和Western-blotting检测bcl-xL的表达情况,筛选出对bcl-xL表达抑制作用最强的小干扰RNA,通过MTT法检测小干扰RNA转染细胞和对照细胞在不同浓度顺铂和紫杉醇作用下的细胞增殖抑制率,计算出半数抑制浓度IC50值并进行对比分析。结果食管癌细胞转染靶向bcl-xL的3种小干扰RNA后,bcl-xL mRNA和蛋白表达均显示出不同程度下调,其中siRNA1对癌细胞bcl-xL表达的抑制作用最强。siRNA1转染食管癌细胞后可使顺铂和紫杉醇对癌细胞的IC50值由转染前的（31.4±4.3）μmol/L和（35.3±6.1）μmol/L下降至转染后的（8.4±3.3）μmol/L和（15.1±4.7）μmol/L（P〈0.01）。结论小干扰RNA抑制bcl-xL表达可增强食管癌细胞对顺铂和紫杉醇化疗的敏感性。     

小干扰RNA抑制bcl-xL表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响

目的 探讨凋亡抑制分子bcl-xL表达下调对食管癌细胞化疗敏感性的影响.方法 根据人bcl-xL基因序列设计和合成3对小干扰RNA,将其转染于体外培养的人食管癌细胞株Eca-109,通过RT-PCR和Western-blotting检测bcl-xL的表达情况,筛选出对bcl-xL表达抑制作用最强的小干扰RNA,通过MTT法检测小干扰RNA转染细胞和对照细胞在不同浓度顺铂和紫杉醇作用下的细胞增殖抑制率,计算出半数抑制浓度IC50值并进行对比分析.结果 食管癌细胞转染靶向bcl-xL的3种小干扰RNA后,bcl-xL mRNA和蛋白表达均显示出不同程度下调,其中siRNA1对癌细胞bcl-xL表达的抑制作用最强.siRNA1转染食管癌细胞后可使顺铂和紫杉醇对癌细胞的IC5o值由转染前的(31.4±4.3)μmol/L和(35.3±6.1)μmol/L下降至转染后的(8.4±3.3)μmol/L和(15.1±4.7)μmol/L(P＜0.01).结论 小干扰RNA抑制bcl-xL表达可增强食管癌细胞对顺铂和紫杉醇化疗的敏感性.     

siRNA干扰STAT3基因对食管癌Eca-109细胞生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默STAT3信号传导通路对人食管癌Eca-109细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:针对人STAT3基因mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中,构建STAT3-siRNA表达载体,稳定转染人食管癌Eca-109细胞,利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况.结果:成功构建STAT3-siRNA表达载体,经测序鉴定正确.RT-PCR和Western blot结果显示,STAT3-siRNA3表达载体明显抑制了人食管癌Eca-109细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).MTT实验显示,稳定转染siRNA后,siRNA3实验组细胞的增殖能力明显下降,细胞生长抑制卒为35.68%,较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞技术显示,siRNA3实验组出现了细胞周期阻滞和细胞凋亡,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞凋亡率为13.26%,明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);结论:RNA干扰技术沉默STAT3基因可以有效地抑制STAT3基因的表达,进而抑制人食管癌Eca-109细胞的增殖,引起细胞周期G_0/G_1期阻滞,促进其凋亡.     

茶多酚对食管癌Eca-109细胞生长的影响

目的:研究茶多酚对食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用。方法:采用MTT法检测茶多酚对食管癌Eca-109细胞生长活性的抑制,BrdU掺入实验分析茶多酚对食管癌Eca-109细胞增殖指数的影响,流式细胞分析仪分析茶多酚对食管癌Eca-109细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:MTT实验证实茶多酚对食管癌Eca-109细胞生长有抑制作用,且呈剂量-效应关系。BrdU掺入实验证实茶多酚可以降低食管癌Eca-109细胞的生长分数。流式细胞仪检测发现茶多酚可以阻滞食管癌Eca-109细胞的细胞周期,使其停滞于G0/G1期,并诱导食管癌Eca-109细胞凋亡。结论:茶多酚对食管癌Eca-109细胞有抑制作用,机制可能与降低食管癌Eca-109细胞的增殖指数、阻滞细胞及诱导细胞凋亡有关。     

RNA干扰靶向抑制食管癌细胞株Nucleostemin基因表达

[目的]探讨NHeleostemin（NS）基因特异性RNA干扰对食管癌Eca-109细胞株增殖和凋亡情况的影响。[方法]用NS特异性siRNA表达载体转染食管癌Eca-109细胞株．利用MTT法测试细胞增殖抑制率：RT—PCR法检测NS基因表达量的变化．流式细胞仪法检测细胞周期分布和细胞凋亡情况。[结果]与阴性对照组相比．PCDNA4／C—NS—silencer组细胞的增殖速率降低,24h、48h、72h细胞增殖抑制率分别为57．8％、74．9％、87.3％：NS基因表达量下降,GdG,期细胞百分率显著升高,S期细胞减少,细胞凋亡率增加。[结论]RNAi技术可显著抑制食管癌Eca-109细胞株NS基因表达,导致细胞增殖缓慢．细胞周期阻滞．凋亡增加。     

奈达铂联合顺铂对人食管癌细胞株（Eca-109）抑制作用机制的研究

目的研究奈达铂（NDP）联合顺铂（DDP）对人食管癌细胞株Eca-109的增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法采用MTT法检测NDP联合DDP对Eca-109细胞的增殖抑制率,中效原理法判断联合用药的相互作用;采用RT-PCR和蛋白印迹法分析Ki-67及Bax表达的变化。结果NDP、DDP均明显抑制Eca-109细胞的生长,且呈剂量依赖性;两者联合使用低浓度时呈拮抗效应,高浓度时呈协同效应;IC50浓度的NDP、DDP和1/2IC50（NDP）＋1/2IC50（DDP）对Eca-109细胞的抑制率分别为（41.9±4.1）%、（47.4±2.9）%和（52.5±0.9）%;与单独用药组比较,联合用药组Ki-67基因（蛋白）表达显著降低,而Bax基因（蛋白）表达显著增高。结论1/2IC50浓度NDP和DDP联合应用与两药IC50浓度单独应用相比,对Eca-109细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强。     

尼美舒利对食管癌Eca-109细胞生长的影响及其可能机制

目的:探讨尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用MTT比色法检测尼美舒利对Eca-109细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,琼脂糖凝胶电泳法进一步观察细胞凋亡;RT-PCR法检测COX-2、PPARγmRNA表达变化,Western blot检测PPARγ蛋白表达变化。结果:尼美舒利(50~400μmol/L)对Eca-109细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量-时间效应关系;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,凋亡细胞增多并出现典型的凋亡细胞DNA ladder。此外,尼美舒利可下调COX-2表达并上调PPARγ表达。结论:尼美舒利能抑制Eca-109细胞的生长,其机制可能是通过抑制Eca-109细胞增殖、诱导细胞周期G0/G1期阻滞、细胞凋亡、下调COX-2表达、上调PPARγ表达而实现的。     

顺铂对人肺腺癌细胞SLC-89细胞周期、p21及c-myc表达的影响

 目的　观察顺铂对SLC 89细胞增殖、细胞周期、p2 1及c myc蛋白表达的影响 ,以揭示顺铂抗癌的机理。方法　运用体外细胞培养技术 ,以不同浓度的顺铂作用于培养的SLC 89细胞 72h ,分别运用MTT法测定细胞增殖和流式细胞术观察细胞周期的变化及p2 1和c myc蛋白的表达。结果　顺铂能显著抑制SLC 89细胞生长 ,72h的顺铂IC50 为 18.4 7μg/ml。顺铂能以浓度依赖方式减少S期细胞而阻滞细胞于G0 /G1期 ,并诱导细胞p2 1及c myc蛋白的表达。 结论　顺铂能显著抑制SLC 89细胞生长增殖、改变细胞周期分布并诱导细胞 p2 1及c myc蛋白的表达 ,这可能是顺铂抗癌作用的重要机理之一。     

华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780增殖及凋亡的影响

[目的]研究华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780增殖、凋亡的影响。[方法]采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测华蟾素联合顺铂对卵巢癌细胞A2780的半数抑制浓度(IC_(50))和细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期,Hoechst染色检测细胞凋亡。[结果]华蟾素及顺铂能抑制细胞增殖,华蟾素IC_(50)为0.56mg/ml;顺铂IC_(50)为2.8μg/ml;药物对癌细胞的生长抑制率随时间延长而增强。华蟾素和顺铂对A2780细胞表现出凋亡作用,华蟾素使A2780细胞周期停滞于S期(P<0.01),顺铂使A2780细胞周期停滞于G0/G1期(P<0.05)。[结论 ]华蟾素联合顺铂可诱导A2780细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而抑制A2780细胞生长。     

ATF5蛋白对食管鳞癌细胞耐药性影响

目的 食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)多药耐药严重影响化疗效果,其分子机制仍未阐明.本研究通过构建不同ATF5蛋白表达量的食管癌Eca-109细胞模型,探究过表达ATF5及低表达ATF5对食管癌Eca-109细胞耐药性及凋亡的影响.方法 利用脂质体载体转染技术对食管癌细胞株进行转染,建立高、中(转染空质粒的对照组)、低3组不同ATF5蛋白表达量Eca-109细胞模型.蛋白质印迹法检测3组细胞ATF5蛋白表达水平.MTT实验和平板克隆实验观察3组细胞对紫杉醇、顺铂耐受性的变化;DAPI染料核染色后观察3组细胞在紫杉醇、顺铂作用下凋亡反应的差异;分析ATF5蛋白对食管鳞癌Eca-109细胞耐药的影响.结果 利用转染技术成功构建的3组不同ATF5蛋白表达量的Eca-109细胞模型,表达模型组细胞中ATF5蛋白相对表达量为85.9±2.66,对照组为64.35±2.54,低表达模型组为45.3±3.11,3组差异有统计学意义,F=532.323,P＜0.001.MTT实验显示,紫杉醇、顺铂作用72 h后,3组细胞存活率差异有统计学意义,F紫=163.382,P＜0.001;F顺 =579.36,P＜0.001;同一组细胞不同浓度对存活率的影响差异有统计学意义,F紫=616.32,P＜0.001;F顺 =2 558.05,P＜0.001;不同浓度的紫杉醇、顺铂作用3组细胞后,过表达组细胞的半数抑制率浓度(IC50)分别为4.16±2.21和1.54±0.67;对照组分别为1.54±0.92和1.27±0.65;低表达组细胞的半数抑制率浓度分别为0.33±0.21和0.53±0.62,3组差异有统计学意义,F紫=198 330.768,P＜0.001;F顺=64 298.048,P＜0.001;表明过表达ATF5的细胞对紫杉醇、顺铂的药物耐受性均明显升高而低表达模型组细胞对紫杉醇、顺铂的药物耐受性均明显降低.DAPI染色实验显示,紫杉醇、顺铂作用3组细胞后,过表达组细胞的凋亡率分别为(14.04±1.66)％和(11.75±2.09)％;对照组分别为(26.44±2.99)％和(34.07±3.42)％;低表达组细胞的凋亡率分别为(54.85±5.88)％和(66.66±2.81)％,3组差异有统计学意义,F紫=283.976,P＜0.001;F顺=954.464,P＜0.001.提示过表达ATF5蛋白细胞在紫杉醇、顺铂作用下凋亡细胞均减少,低表达ATF5细胞在紫杉醇、顺铂作用下凋亡细胞均增加.平板克隆形成实验显示,紫杉醇、顺铂作用3组细胞后,过表达组细胞的克隆形成率分别为(56.09±1.37)％和(62.67±1.41)％;对照组分别为(38.7±1.37)％和(34.83±3.09)％;低表达组细胞的克隆形成率分别为(25.22土1.58)％和(18.17±3.64)％,3组差异有统计学意义,F紫 =1157.447,P＜0.001;F顺=612.595,P＜0.001.表明过表达ATF5蛋白细胞在紫杉醇、顺铂作用下克隆形成数均更多,低表达ATF5蛋白细胞在紫杉醇、顺铂作用下克隆形成数减少.结论 上调ATF5蛋白的表达能增加食管鳞癌Eca-109细胞对紫杉醇、顺铂的耐药性,而下调ATE5蛋白的表达则能降低Eca-109细胞对紫杉醇、顺铂的耐药性,提示食管鳞癌细胞的耐药性可能与ATF5蛋白的表达量相关,食管鳞癌细胞中ATF5蛋白的表达情况可能能间接干扰临床药物化疗的效果.