金标免疫斑点法检测结核抗体在结核病诊断中的应用

目的：探讨金标免疫斑点法检测结核抗体在结核病诊断中的应用价值。方法：对302例活动性结核、非活动性结核和非结核病病患者的血清利用金标免、疫斑点法进行结核抗体检测,并同时留取痰标本进行抗酸染色找结核杆菌;82例结核性及非结核性穿刺液进行结核抗体检测,并取离心沉淀物涂片抗酸染色找结核杆菌;对检测结果进行相关性比较。结果：金标斑点法检测结核抗体对活动性结核和非活动性结核的检出率明显高于涂片抗酸染色镜检的检出率,两者差异有显著性。结论：金标免疫斑点法检测结核抗体对结核病早期诊断具有重要价值。     

肺吸虫病结核病双联快速诊断方法的建立

目的创建具有肺吸虫病、结核病诊断和鉴别诊断价值的血清抗体检测新技术。方法以硝酸纤维素膜为载体,在膜上左右对称点样肺吸虫成虫可溶性抗原、结核分支杆菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)抗原,以胶体金-羊抗人IgG结合物为标记物,创建肺吸虫病、结核病双联金标免疫快速诊断方法(Pw/TB-DIGFA),检测病人血清样本中抗肺吸虫和/或抗结核杆菌IgG抗体。结果Pw/TB-DIGFA诊断肺吸虫病和结核病的敏感性分别为96.7%(29/30)和91.1%(51/56),特异性为92.6%(100/108);与TB-Dot平行检测结核病人和健康人群血清94人份,结果差异无统计学意义,符合率达96.8%(91/94);与Pw-DIGFA平行检测肺吸虫病人和健康人群血清90人份,检测结果一致;未发现相互之间有交叉反应。结论Pw/TB-DIGFA对肺吸虫病和结核病诊断具有较高的敏感性和特异性;该方法一次操作同时完成二项特异性抗体测定,不仅检测效率高而且平行检测结果有利于鉴别诊断。     

两种检测结核抗体方法在结核病诊断中的应用

目的:探讨金标法(DIGFA)和酶标法(ELISA)测定结核抗体在结核病诊断中的价值。方法:对146例活动性肺结核,25例肺外结核,38例非结核性呼吸道疾病,25例健康查体人员的血清标本做DIGFA和ELISA联合测定,统计试验资料。结果:活动性肺结核组结核抗体阳性率为81.5%(DIGFA)和72.6%(ELISA),肺外结核组72%(DIGFA)和64%(ELISA),非结核性呼吸道疾病组7.9%(DIGFA)和5.2%(ELISA),健康查体人员4%(DIGFA)和4%(ELISA),活动性肺结核涂阳组90.5%(DIGFA)和82.5%(ELISA),涂阴组74.5%(DIGFA)和65.1%(ELISA)。结论:结核抗体对结核病有重要的临床诊断价值,对非结核性呼吸道疾病有较高的鉴别诊断作用。同时,DIGFA与ELISA特异性、敏感性大体接近,DIGFA较ELISA有许多优点。     

金标免疫渗滤法快速检测日本血吸虫IgM抗体的研究

目的探讨金标免疫渗滤法（DIGFA）快速检测日本血吸虫特异性IgM抗体的诊断价值。方法以可溶性虫卵抗原（SEA）为检测抗原，胶体标记羊抗人IgM为检测抗体，建立IgM金标免疫渗滤法（IgM—DIGFA），快速检测不同病期血吸虫病人血清，并以IgG金标免疫渗滤法fig—DIGFA）检测作平行对照。结果IgM—DIGFA和IgG—DIGFA检测25例急性血吸虫病敏感性均为100％；检测72例慢性血吸虫病的敏感性分别为95．8％（69／72）和97．2％（70／72）。检测健康人血清100人份，特异性分别为99％和97％；IgM—DIGFA检测135例其它蠕虫病人血清，除1例出现阳性反应外，其余均为阴性。检测治后6个月病人血清23例，IgM—DIGFA检出8例阳性，抗体阴转率为65．2％（15／23），IgG—DIGFA检出18例阳性，抗体的阴转率为21．7％（5／23），两者差异有显著性意义（P〈0．05）；两法检测治后12个月病人血清25例，阴转率分别为88％（22／25）和64％（16／25），两者差异有显著性意义（P〈0．05）。结论IgM—DIGFA不仅简易快速、不需特殊仪器设备，对急性、慢性血吸虫病诊断的敏感性和特异性与IgG-DIGFA相近，且有更好的疗效考核价值，非常适合当前血吸虫病防治工作需要。     

金标免疫渗滤法快速检测幽门螺杆菌血清抗体351例分析

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染与慢性胃炎、消化性溃疡甚至胃癌均密切相关。实验诊断Ｈｐ感染的技术目前已日臻完善和准确。近年出现的金标免疫渗滤法[1] (ＤＩＧＦＡ)是以胶体金为标记物的快速斑点免疫结合试验。具有敏感性、非创伤性、操作简单等特点。我院 2 0 0 1年 1— 6月用此方法检测了 35 1例门诊及住院患者 ,报告如下。1　资料与方法1.1病例选择　 35 1例均为经我院胃镜确诊为慢性胃炎和溃疡病患者 ,在检查胃镜时均进行快速尿素酶试验 ,术后抽血做金标免疫渗滤法。采用浙江省医学科学院研制Ｈｐ金标免疫诊断试剂盒 ,其组成如下 :　　抗原 …     

检测幽门螺杆菌抗体的金标免疫滤法的建立及应用

以幽门螺杆菌尿素酶为抗原，金标记抗人ＩｇＧ为显示剂，建立了检测抗幽门螺杆菌抗体的金标免疫渗滤法。以本法对１５０例慢性胃炎，消化性溃疡患者，９８例健康成人和９０例儿童进行血清幽门螺杆菌ＩｇＧ抗体测定。结果表明，患者组抗体检出率为７２．６％，与快速纱酶法相比，两者符合率为９２％，诊断敏感性为９２．４％，特 性为９０．６％。     

快速斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体

斑点免疫金渗滤法检测结核杆菌特异性抗体比传统痰涂片抗酸染色检测结核杆菌的方法临床检出率高，方法简便，快速准确。     

金标法结核抗体检测对结核病诊断价值的探讨

目的 对TB-DOT法快速检测结核抗体的敏感性、特异性及应用价值进行评估。方法 采用TB-DOT法对180例肺部疾病患者血清进行结核抗体检测。结果 65例活动性肺结核患者的阳性检出率56．9％，肺癌患者阳性检出率为42盘％，陈旧性肺结核阳性检出率为50％，102例肺部其它疾病患者的阳性发生率为9馏％。结论 TB-DOT法是临床检测结核抗体的一种简便、快速、特异、较敏感的方法，可作为临床结核病诊断和鉴别的辅助手段。     

基因芯片检测日本血吸虫及其现场应用

目的:建立敏感、特异的检测日本血吸虫的基因芯片并对其应用价值进行评价。方法:根据日本血吸虫高度保守的编码免疫原性毛蚴抗原5D基因,筛选、设计聚合酶链反应(PCR)的引物和基因探针,制成日本血吸虫基因芯片。采用基因芯片对江西、湖南和安徽三省现场采集的钉螺进行检测。检测时抽提待测钉螺的DNA,进行PCR扩增及不对称PCR荧光标记,然后与检测芯片杂交,最后进行扫描及分析。结果:建立的基因芯片能特异、敏感地检测出感染性钉螺,江西、湖南感染性钉螺的检出率为100％,安徽省品系的感染性钉螺检出率略低。结论:成功地建立了检测日本血吸虫的基因芯片,具有较高的实际应用价值。     

结核分枝杆菌耐药基因rpoB.katG.inhA突变快速检测方法研究

目的 通过PCR及芯片杂交技术平台,建立临床样品中结核分枝杆菌及耐药基因突变的快速诊断新方法.方法 根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列,我们设计了覆盖rpoB基因81个碱基高变区的5个正常探针和6个可以探测特定突变类型的突变探针,制作膜芯片,并检测临床样品中结核杆菌的基突变情况,以此来判断耐药结果.结果 18个利福平培养耐药中的15个样品都在rpoB基因上检出有突变,利福平耐药突变检出率为83.0%（18/15）;25个利福平敏感样品rpoB基因上都未检出突变.20个异烟肼培养耐药的样品中有16个在katG或inhA基因上检出有突变,异烟肼耐药突变检出率为80.0%（16/20）;25个异烟肼敏感样品katG或inhA基因上都未检出突变.结论 用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核杆菌耐药性检测.并具有快速、简便、敏感的特点.     

结核分枝杆菌的荧光定量PCR快速诊断

目的传统的结核分枝杆菌鉴定方法敏感性差、鉴定时间长,影响诊断和治疗,本研究为克服传统方法的缺点,建立特异、敏感、快速的结核分枝杆菌检测方法。方法应用荧光定量PCR技术检测疑似结核病病人痰液中的特异性DNA片段,以达到对结核病病人的快速诊断。结果 PCR结果显示7例疑似结核病病人的痰液标本中检出目的基因片段,证明7例病人均为结核病病人。结论所建立方法可用于结核分枝杆菌的快速诊断。     

建立PCR方法检测日本血吸虫感染性钉螺

目的建立灵敏及特异的PCR方法检测日本血吸虫感染性钉螺。方法根据日本血吸虫18S-rRNA基因,设计1对引物,建立检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法。测定PCR扩增产物的DNA序列,并进行PCR方法的灵敏性、交叉反应以及群体检测试验。结果PCR扩增日本血吸虫感染性钉螺,得到了与靶DNA位置相同的产物,测序长度为469bp,与靶DNA相同且序列一致,并将序列登陆Genbank,注册号:DQ442999。扩增阴性钉螺无产物出现。灵敏性试验提示,PCR方法可以检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为40pg/μl;交叉反应试验显示,该方法不能扩增出被单尾尾蚴感染的钉螺DNA;群体检测试验表明,PCR方法可以检测出被感染钉螺提取DNA的最高稀释度为1:640。结论初步建立检测日本血吸虫感染性钉螺的PCR方法,灵敏、特异且具有良好的群体检测效果。     

SEPTIC技术快速检测结核分枝杆菌

目的评价SEPTIC(sensing of phage-triggered ion cascade)技术在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法制备纳米阱微芯片,用于检测噬菌体感染细菌时导致细胞内离子释放发生的微范围内的电位变化。调整大肠杆菌、结核分枝杆菌、耻垢分枝杆菌及其相应噬菌体的浓度。将细菌和噬菌体等体积混合,37℃孵育1 min,取5μl混合液滴于探针上,30 s后开始采集数据,每2 min采集一个数据文件,共采集10 min,计算机分析采集结果。结果当结核分枝杆菌与分枝杆菌噬菌体D29混合反应时,在0~8 min内显示了非常明确的1/f功率谱特征,而且功率谱强度明显高于阴性反应的功率谱,并出现了明确的电压超出±4σ范围的波形,持续约0.2 s的时间,可认为发生了一次细菌被噬菌体感染的事件,表明探针明确地捕获了细菌被噬菌体感染的事件。结论SEPTIC技术能在较短时间内检测、鉴定出活菌的存在,有可能为结核分枝杆菌的检测提供一种简便、快捷的方法。     

Rapid Detection of Rifampin-resistant Clinical Isolates of Mycobacterium tuberculosis by Reverse Dot Blot Hybridization

Objective A PCR-reverse dot blot hybridization (RDBH) assay was developed for rapid detection of rpoB gene mutations in‘hot mutation region’ of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis).
Methods 12 oligonucleotide probes based on the wild-type and mutant genotype rpoB sequences of M. tuberculosis were designed to screen the most frequent wild-type and mutant genotypes for diagnosing RIF resistance. 300 M. tuberculosis clinical isolates were detected by RDBH, conventional drug-susceptibility testing (DST) and DNA sequencing to evaluate the RDBH assay.
Results The sensitivity and specificity of the RDBH assay were 91.2%(165/181) and 98.3%(117/119), respectively, as compared to DST. When compared with DNA sequencing, the accuracy, positive predictive value (PPV) and negative predictive value (NPV) of the RDBH assay were 97.7%(293/300), 98.2%(164/167), and 97.0%(129/133), respectively. Furthermore, the results indicated that the most common mutations were in codons 531 (48.6%), 526 (25.4%), 516 (8.8%), and 511 (6.6%), and the combinative mutation rate was 15 (8.3%). One and two strains of insertion and deletion were found among all strains, respectively.
Conclusion Our findings demonstrate that the RDBH assay is a rapid, simple and sensitive method for diagnosing RIF-resistant tuberculosis.     

抗日本血吸虫噬菌体抗体库的构建和初步应用

目的探索大规模制备抗日本血吸虫单克隆抗体的新途径。方法以日本血吸虫感染小鼠的脾细胞为源,构建抗日本血吸虫噬菌体单链抗体库,并对该抗体库进行了富集、筛选和鉴定。同时,用从抗体库制备的可溶性单链抗体对病人血清进行了检测。结果构建的噬菌体抗体库库容为1.07×106cfu。筛选获得2个特异性阳性克隆。这两株克隆表达的单链抗体用于血吸虫病人血清检测的结果为:(1)以其中一株单链抗体检测急性病人的敏感度为60%,检测慢性病人的敏感度为36.7%,特异度为90%。(2)将两株单链抗体混合后检测急性病人的敏感度为75%,检测慢性病人的敏感度为56.7%,特异度为85%。结论首次成功地构建了抗日本血吸虫噬菌体单链抗体库,并从中筛选制备了能有效检测血吸虫病患者血样中的循环抗原的单链抗体。     

噬菌体变色法检测结核分枝杆菌

目的建立一种结核分枝杆菌快速检测方法。方法痰标本常规处理,离心集菌,取100μl于试管中,另一支加入标准株H37Rv结核分枝杆菌作阳性对照。两支试管分别加入噬菌体D29,37℃培养,用硫酸亚铁铵杀死结核分枝杆菌菌体外的噬菌体,柠檬酸三钠和氯化钙混和液中和硫酸亚铁铵。加入耻垢分枝杆菌和硝酸钾,37℃培养过夜,加入显色剂显色。同时用罗氏培养方法对照检测。结果临床标本的噬菌体变色法和罗氏培养法表明两方法结果具有一致性(P0.05)。结论噬菌体变色法可作为结核分枝杆菌的快速检测方法之一。