鳞状细胞癌的端粒酶活性与增殖细胞核抗原表达的关系

目的研究口腔鳞状细胞癌与癌旁上皮中的端粒酶活性与增殖细胞核抗原（PCNA）表达的关系。方法应用人端粒酶RNA原位杂交法及免疫组化SP法对64例鳞癌及30例癌旁上皮进行检测。结果显示端粒酶活性阳性的22例鳞癌和2例癌旁上皮中PCNA阳性细胞密度为165.37±2.98,端粒酶阴性的40例鳞癌和癌旁上皮中PCNA阳性细胞密度为97.33±2.42。检验证实端粒酶活性阳性组与阴性组之间PCNA阳性细胞密度有显著差异（P＜0.05）。结论端粒酶活性与PCNA阳性表达有关,表达端粒酶活性的细胞多处于高度增殖的状态。     

口腔黏膜鳞状细胞癌端粒酶活性与PCNA表达的关系

目的 :探索口腔黏膜鳞状细胞癌端粒酶活性与增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的关系。方法 :应用TRAP PCR ELISA方法及免疫组化SP法对 68例口腔黏膜鳞状细胞癌组织、3 4例癌旁上皮组织和 12例正常口腔黏膜组织进行检测。结果 :口腔黏膜鳞状细胞癌组织中端粒酶表达阳性率为 67.65 % ( 4 6/ 68) ;癌旁组织中端粒酶表达率为 8.82 % ( 3 / 3 4) ;正常口腔黏膜组织中无端粒酶活性表达。口腔黏膜鳞状细胞癌组织端粒酶活性表达与临床病理分级有关 ;端粒酶活性阳性的 46例癌组织和 3例癌旁上皮异常增生组中PCNA阳性细胞密度为 ( 165 .3 1± 1.82 )个 /mm2 ,端粒酶阴性的 2 2例癌组织和 10例癌旁上皮异常增生组中PCNA阳性细胞密度为 ( 96.77± 1.74)个 /mm2 。端粒酶活性阳性组与阴性组之间PCNA阳性细胞密度差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :端粒酶活性与口腔黏膜鳞状细胞癌发生、发展密切相关 ;端粒酶活性与PCNA阳性表达有关     

金属硫蛋白的表达与口腔鳞癌预后的关系

本文对77例口腔鳞癌的金属硫蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及其同患者预后的关系进行了研究，免疫组织化学染色结果显示：在正常和增生口腔上皮，金属硫蛋白在基底和基底旁细胞阳性，在上皮异常增生时阳性区扩大；在高分化鳞癌，金属硫蛋白阳性细胞位于癌巢周围，在低分化鳞癌则散在分布，上述金属硫蛋白分布特点与PCNA阳性细胞分布特点一致，金属硫蛋白阳性者术后复发率为43.8%，阴性者为7.7%，化疗后复发率在阳性者为59.3%，阴性者为5.5%，结果提示金属硫蛋白的表达与口腔鳞癌的细胞传闻殖及患得的预后有关。     

口腔鳞癌癌旁上皮中细胞凋亡与细胞增殖的关系

目的 :探讨口腔鳞癌癌旁上皮中细胞凋亡与细胞增殖的病理意义及其相互关系。方法 :利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术、增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组织化学染色对 30例口腔鳞癌标本癌旁上皮等4个不同区域中凋亡细胞及增殖细胞的分布和密度进行观察和比较。结果 :与正常区域相比较 ,癌旁上皮中凋亡细胞及增殖细胞分布异常且细胞密度增高 ;肿瘤组织中 ,凋亡细胞明显减少 ,增殖细胞明显增多。结论 :口腔鳞癌癌旁上皮中存在活跃的细胞凋亡及细胞增殖 ,它们在其癌变中具有重要意义。     

口腔黏膜癌前病变和口腔鳞癌组织Fas/FasL的表达及其意义

目的：研究调亡相关基因Fas／FasL在正常口腔黏膜、上皮异常增生和口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法：应用免疫组织化学方法检测10例正常口腔黏膜、26例上皮异常增生、38例口腔鳞癌组织及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中Fas／FasL的表达。结果：Fas在正常口腔黏膜中广泛表达;上皮异常增生和鳞癌组织表达明显下调（P〈0．05）;Fas表达与口腔鳞癌分化程度有关;FasL在正常口腔黏膜不表达;上皮异常增生和鳞癌组织表达明显上调（P〈0．05）;FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关（P〉0．05）;TIL细胞Fas、FasL阳性表达率为81．6％和84．2％。结论：Fas表达与口腔黏膜上皮细胞的自然分化成熟、衰老及口腔鳞癌的形成和肿瘤的恶性度有关;FasL的表达上调可能是口腔鳞癌组织免疫反攻击的体现;Fas、FasL可作为监测口腔上皮癌变的标记物。     

增殖细胞核抗原及Ki-67在口腔白斑和鳞癌中的表达及其相关性

目的：比较研究增殖细胞核抗原（PCNA）和Ki-67在口腔癌前病变中的表达，方法：选取人正常口腔粘膜（NOM）（8例），口腔白斑（LK）（31例）及口腔鳞状细胞癌（OSCC）（22例）标本，同时和LSAB法染色PCNA和Ki-67表达，分析增殖活性，用SPSS9．0统计软件分析各组间各指标的差异，PCNA指数和Ki-67指数的相关性。结果：在NOM上皮及单纯增生上皮内，PCNA阳性细胞散在分布于上皮基底层细胞，统计学分析二者无差异。在异常增生上皮各组中，随着增生程度的病理分级的增加，PCNA阳性细胞数增加，分布从其底层向表层增加。且不同增生程度各组间统计学上有显著性差异。在高分化鳞癌中，主要分布在癌巢周围及肿瘤浸润前沿区域。Ki-67与PCNA分布特征类似，但其指数普遍低于PCNA指数。Pearson相关系数r=0．79,二者呈线性正相关。结论：PCNA及Ki-67与口腔粘膜增殖异常有关，其增殖指数与增生程度平行，且二者本身呈线性相关。     

Smad7蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：检测Smad7蛋白在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）中的表达及临床意义,探讨其在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用。方法：利用免疫组织化学染色,检测31例原发性口腔鳞癌患者肿瘤组织及癌旁标本中Smad7的表达,并分析其与淋巴结转移之间的关系;利用CCK-8及细胞划痕实验检测Smad7基因沉默对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响;通过Smad7 siRNA干扰HN4细胞,影响Smad7蛋白的表达,利用免疫印迹及qRT-PCR检测其对上皮-间充质转化（epithelial- mesenchymal transition,EMT）相关指标蛋白及RNA表达的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果：在口腔鳞癌肿瘤组织中,Smad7蛋白在细胞核和细胞质的表达均显著高于对应的癌旁组织。Smad7的表达与患者颈淋巴结转移显著相关。Smad7 siRNA干扰HN4细胞后,细胞的增殖能力减弱,迁移能力增强。Smad7 siRNA干扰使得HN4细胞神经钙黏附素（N-cadherin）蛋白的表达量升高,而上皮钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量下降,N-cadherin蛋白及波形蛋白（Vimentin）RNA表达量显著升高,与对照组相比有显著差异。结论：Smad7的表达与口腔鳞癌患者颈淋巴结转移相关,且Smad7在口腔鳞癌肿瘤细胞的增殖及侵袭转移中发挥重要作用。     

口腔鳞癌不同区域病理分级及增殖活性的差异

目的：研究口腔鳞癌不同区域的病理分级(WHO)及细胞增殖活性的差异，并探讨其临床意义和理论意义。方法：对15例口腔鳞癌手术切除的标本按照统一标准分为表面区、中心区、深层浸润区、癌旁区和正常组织5部分。分别对表面区、中心区、深层浸润区和同一患者的术前活检标本进行病理分级(WHO)，观察比较其差异。采用PCNA免疫组化染色方法来研究细胞的增殖活性，观察术后标本各区之间阳性表达差异。结果：口腔鳞癌术后标本表面区、中心区、深层浸润区和术前活检组织之间病理分级存在明显差异，其中深层浸润区病理分级最差．表面区、中心区病理分级与术前活检组织相当。表面区→中心区→深层浸润区肿瘤细胞PCNA阳性表达逐渐增强，癌旁区比正常组织阳性表达要高。结论：口腔鳞癌内部不同区域之间的病理分级及细胞增殖活性并不相同，只有深层浸润区最能反映肿瘤的生物学特征，最能代表肿瘤当前阶段的性质，术前活检组织不能准确反映肿瘤的恶性程度；癌旁组织与正常组织相比细胞增殖活性明显增强，已处于癌前状态.     

端粒酶蛋白催化亚基(hTRT)mRNA在口腔鳞癌形成过程中的表达

目的:观察端粒酶催化蛋白基因hTRT在口腔粘膜恶性转化不同阶段中的表达,探讨其与口腔粘膜细胞恶性程度的关系。方法:用原位杂交技术检测82例标本,其中正常口腔粘膜7例、上皮单纯性增生7例、上皮异常增生30例、原位癌8例、口腔粘膜鳞癌30例。结果:正常口腔粘膜、上皮单纯性增生组织中hTRT的mRNA表达较弱,阳性信号仅局限于上皮基底层及副基底层间,阳性率21.4%(3/14);上皮异常增生中hTRTmRNA阳性表达见于多层上皮细胞,并随细胞异形性增高而表达增强,阳性率46.7%(14/30);口腔粘膜鳞癌组织中hTRT的mRNA有较强阳性表达,阳性率81.6%(31/38)。结论:端粒酶hTRT基因的表达与口腔粘膜细胞的恶性程度密切相关,端粒酶的重新激活在口腔鳞癌的形成过程中起了关键性作用     

口腔鳞癌及癌前病变中TGFβ的表达

目的：研究转化生长因子β（TGFβ）在口腔鳞癌及新癌病变中的表达特点。方法：免疫组织化学染色。结果：TGFβ的阳性表达见于癌前上皮分化良好的区域，而上皮的增殖区则为阴性表达。随着上皮由单纯性增生－轻度异常增生－中度异常增生－重度异常增生－磷癌的转变，TGFβ1的表达逐渐减少以及消失。结论TGFβ与口腔鳞癌的发生有着密切的关系。TGFβ1自分泌的减少有利于癌前、上皮的癌变及鳞癌的形成。     

脂质体介导端粒酶基因转染人口腔黏膜角化细胞的实验研究

目的:将端粒酶基因转染人人正常口腔黏膜角化细胞,观察人端粒酶反转录酶(hTRT)的表达情况.方法:采用脂质体LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将含有hTRT基因的pEGFP-hTRT质粒转染人正常口腔黏膜角化细胞,经荧光显微镜、激光共聚焦显微镜观察荧光,并进行流式细胞仪检测转染效率,采用RT-PCR检测转染细胞中外源性hTRT的表达.并经G418筛选观察其稳定表达情况.结果:LipofectAMINE 2000与转铁蛋白共同将pEGFP-hTRT转染入人正常口腔黏膜角化细胞,转染率为15.34%.转染细胞表达外源性hTRT.结论:脂质体LipofectAMINE2000与转铁蛋白成功介导含有端粒酶基因的pEGFP-hTRT质粒转染人口腔黏膜角化细胞.     

反转录病毒介导端粒酶基因对人口腔黏膜角化细胞寿命的影响

目的:以pBABE-tert重组反转录病毒为载体,介导端粒酶反转录酶基因(hTRT)转染体外培养的人口腔角化细胞,探讨端粒酶对细胞寿命的影响。方法:将含有hTRT的pBABE-tert重组反转录病毒载体扩增后,转染体外培养的人口腔角化细胞,挑选阳性克隆进行传代培养,以PCR-ELISA 和PCR-PAGE电泳检测端粒酶活性。结果:获得端粒酶活性稳定表达的口腔角化上皮细胞克隆,寿命可延长至8~9代。结论:转导端粒酶反转录酶基因的人口腔角化细胞寿命延长1倍,但不能永生化,说明人口腔上皮角化细胞的永生化是复杂和多点调控的过程,端粒酶活性增加是细胞永生化的关键但不是唯一原因。     

端粒酶催化亚单位在涎腺腺样囊性癌中表达的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(即端粒酶逆转录酶，hTRT)在涎腺腺样囊性癌中表达及意义。方法 选用32例腺样囊性癌标本，管状型9例，筛孔型17例，实体型6例，癌旁正常腺体作为对照组。采用原位杂交技术栓测hTRT的表达，并观察hTRT分布与患者年龄、肿瘤大小和组织学分型间关系。结果 32例腺样囊性癌hTRT阳性表达率为87．5％。结论 hTRT在腺样囊性癌中高表达，其在不同的组织学分型等组别间无差异。     

pEGFP—N1-Snail真核表达质粒的构建与表达

目的：构建pEGFP—N1-Snail真核表达质粒,并进行鉴定,转染SCC25肿瘤上皮细胞,检测其表达。方法：利用RT—PCR方法从SCC9肿瘤上皮细胞中提取Snail基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T—Snail重组质粒,挑选阳性克隆,PCR鉴定后送测序。重组质粒双酶切后与pEGFP—N1真核表达载体连接,构建pEGFP—N1-Snail真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。分别抽提pEGFP—N1及pEGFP—N1-Snail质粒,用脂质体2000转染SCC25肿瘤上皮细胞,RT．PCR检测Snail在该细胞中表达。结果：本实验成功构建了pEGFP—N1—Snail真核表达质粒,并在SCC25肿瘤上皮细胞中表达。结论：本实验结果为进一步研究Snail作为转录抑制因子诱导上皮间质转化提供实验基础。     

髓样来源的抑制细胞在舌癌小鼠中的表达及意义

目的 评价舌癌小鼠外周血和病变部位髓样来源的抑制细胞（MDSC）的变化及意义。方法 建立4NQO舌癌小鼠模型,观察MDSC细胞在外周血的表达,同时观察T细胞亚群的表达,评价MDSC细胞与T细胞亚群及CD4⁺/ CD8⁺比例变化的相关性。观察MDSC细胞在舌黏膜病变部位的表达,并检测舌组织精氨酸酶1（ARG-1）mRNA的表达。结果 4NQO小鼠外周血中MDSC比例随着肿瘤进展显著升高（P<0.01）,外周血中MDSC比例与相应CD3⁺CD8⁺T细胞的比例呈正相关,与CD4⁺/CD8⁺比呈负相关关系。4NQO小鼠异常增生区域的MDSC细胞较正常对照组有所增加,在舌癌组织内及与正常组织的交界处,均浸润了大量的MDSC细胞,而且ARG-1 mRNA水平显著升高（P<0.01）。结论 MDSC细胞在舌癌组织和外周血中的扩增可能是肿瘤进展的重要原因。MDSC细胞可能成为口腔癌免疫治疗的潜在靶点。     

Maspin expression in normal and neoplastic salivary gland

BACKGROUND: Maspin inhibits cell motility, invasion and metastasis. Loss or reduction in maspin expression has been associated with tumoral progression. METHODS: The presence of maspin was studied immunohistochemically in salivary gland tumours presenting cells with myoepithelial differentiation in their composition, and in normal salivary gland. RESULTS: Pleomorphic adenoma (PA) presented high expression of maspin, except in the spindle cells and occasional luminal cells. Epithelial-myoepithelial carcinoma and tubular adenoid cystic carcinoma (ACC) showed intense expression in all cells. Cribriform ACC evidenced only few positive cells of the luminal type, while solid subtype showed rare positive cells. Normal salivary gland tissue has shown low levels of maspin positivity. CONCLUSIONS: Maspin has small participation in normal salivary gland, is increased in PA, and decreases as the histological malignancy raises. Hence, in salivary gland, its expression is not exclusive of myoepithelial cells; thus, it should not be used as a marker for this cell. Nevertheless, we believe it is an important marker of biological behaviour in these tumours.     

口腔粘膜上皮异常增生和鳞癌组织中凋亡蛋白Bax的表达研究

目的 研究凋亡相关蛋白Ｂａｘ在口腔正常粘膜、上皮异常增生和鳞癌组织中表达及意义。方法 采用免疫组化方法检测１０例正常粘膜、１０例单纯性增生上皮、３２例异常增生上皮１９例高分化鳞癌、９例低分化鳞癌石蜡包理样本中Ｂａｘ的表达。结果 正常粘膜中见Ｂａｘ弱表达局限于角化层。上皮单纯增生时Ｂａｘ表达较正常组增强,轻度异常增生时反面较单纯增生下降,随异常增生程度加重,Ｂａｘ明显增加。癌变时Ｂａｘ表达较正常组增     

牙周韧带细胞与成骨样细胞的体外共培养

目的：探讨牙周韧带细胞(periodontal ligament cell，PDLC)和成骨样细胞的相互作用。方法：牙周韧带来源的PDLC和骨髓基质来源的成骨样细胞(osteoblast like cell，BC)进行体外套皿共培养，通过细胞增殖、蛋白质合成和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALPase)活性来分析细胞间相互作用。结果：PDLC较成骨样细胞增殖快，共培养条件对细胞增殖无显著影响；共培养对PDLC蛋白质合成没有影响，但对成骨样细胞蛋白质合成有影响；在共培养条件下，PDLC上调ALPase活性，成骨样细胞下调ALPase活性。结论：在共培养体系中，PDLC和成骨样细胞存在相互作用，两者的分化趋势受到相互诱导。