多种砷化物对Chang肝细胞抗氧化酶的诱导作用

目的探讨不同无机砷和有机砷化物对Chang肝细胞的毒性,以及对Ⅱ相解毒酶和抗氧化酶蛋白的诱导作用。方法采用Alamar Blue还原法测定细胞活力;Western blot免疫印迹法检测细胞内HO-1、NQO1、GST和GR的蛋白表达。结果通过Alamar Blue还原法测定细胞增殖活力,几种砷化物的毒性大小依次为As2O3〉NaAsO2〉Na2HAsO4〉DMA;不同浓度的无机砷染毒Chang肝细胞6 h后,发现随着染毒浓度的升高,HO-1和NQO1的蛋白表达水平逐渐增加;GST和GR的蛋白表达与染毒浓度无关,3个组都表达且相同;而有机砷DMA正相反,随着染毒浓度的升高,GST和GR的蛋白表达水平逐渐增加,HO-1、NQO1的蛋白表达水平与染毒浓度无关,染毒组与对照组相比无差异。结论不同砷化物对肝细胞的毒性不同;对于抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶的蛋白表达,4种砷化物的针对性和诱导强度明显不同。     

亚砷酸钠诱导外周血淋巴细胞凋亡的实验研究

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO2)诱导淋巴细胞凋亡的作用机制。方法用倒置显微镜、透射电子显微镜、噻唑蓝(MTT)还原实验、细胞免疫组化法,分别对不同浓度的实验组及对照组淋巴细胞形态学改变,细胞存活率及Bcl-2蛋白的表达进行观察和测定。结果MTT实验显示,0.1、1.0、5.0μmol/L的NaAsO2均能抑制淋巴细胞的生长增殖(P<0.05);透射电镜观察到淋巴细胞表面的突起减少或脱失,部分细胞核染色质聚集、边移,线粒体结构模糊不清;Bcl-2在实验组中表达的强度均低于对照组。结论NaAsO2不仅抑制淋巴细胞增殖,而且诱导细胞凋亡,诱导细胞凋亡与Bcl-2表达有关。     

N-乙酰半胱氨酸和还原型谷胱甘肽治疗重型肝炎的临床对比观察

目的比较N-乙酰半胱氨酸（NAC）和还原型谷胱甘肽（GSH）治疗重型肝炎的疗效。方法将55例住院的重型肝炎患者随机分为GSH组（25例）和NAC组（30例）两组,分别在综合治疗的基础上加用GSH1．2g和NAC8．0g静脉点滴,连续用药28天,在用药过程中记录患者的临床症状、体征、血生化指标和凝血功能,并进行Child-push和MELD评分,同时观察不良反应。结果两组患者的肝功能和凝血功能均改善,两组比较无显著性差异（P〉0．05）;在治疗的第21天和28天,NAC组的TBbil和DBil下降率明显高于GSH组,差异有显著性（P〈0．05）;28天时NAC组的PTA提升率高于GSH组[（67．26±28．64）％vs（36．92±21．23）％,P〈0．05];NAC组的Child-Pugll评分和MELD评分均出现下降,并显著优于GSH组（P〈0．05）。NAC的不良反应主要为头晕、恶心、呕吐和皮肤瘙痒,无严重不良反应。结论与GSH组比较,NAC在减低重型肝炎患者的血清胆红素水平和改善凝血酶原活动度方面更具有优势,NAC治疗过程中患者耐受性较好,安全性较高。     

N-乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞,建立内质网氧化应激凋亡模型,用NAC进行干预.通过四甲基偶氮唑盐、DNA梯度分析,Western blot、流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)的产生等方法,了解NAC对H2O2诱导HepG2细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白的表达以及ROS产生的影响.结果 用不同浓度H2O2(0、1、3,5 mmol/L)诱导HepG2细胞6 h后,发现随着H2O2浓度增加,细胞活力下降,凋亡率增加,分别为0.7%±0.5%、26.4%±1.8%、29.7%±1.2%、51.2%±9.4%;细胞凋亡信号蛋白表达增加,ROS产生增多,分别为14.0%±0.5%、95.2%±0.1%、97.5%±0.25%、98.3%±0.2%;在3 mmol/L时出现典型内质网氧化应激凋亡形态学改变.用NAC(10、20 mmol/L)干预后发现,NAC可明显提高细胞活力、细胞凋亡率由29.7%±1.2%降至23.3%±4.7%和14.3%±1.2%,细胞凋亡过程中凋亡信号蛋白的表达减少、细胞内ROS的产生率由97.5%±0.2%降至52.2%±0.8%和51.2%±2.9%.结论 NAC能对氧自由基反应有直接抑制作用,阻断内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡,减轻肝细胞损伤.     

N-乙酰半胱氨酸在骨髓增生异常综合征中的抗凋亡作用

用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记术及碘化丙锭染色后流式细胞仪分析法,分别观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)0.1、0.3、0.5 mM在骨髓增生异常综合征(MDs)患者及正常人骨髓细胞体外培养的凋亡率.结果显示,NAC 0.1 mM对MDS患者及正常人的骨髓细胞凋亡率均无影响;0.3 mM只对MDS患者有影响,其凋亡率明显低于正常人(P<0.01);0.5 mM时MDS患者及正常人的凋亡率均明显降低(P均<0.01).提示NAC 0.3 mM对MDS患者的骨髓细胞有抗凋亡作用,且不影响正常细胞,可试用于MDS治疗.     

活性氧与内质网应激介导肝细胞凋亡研究进展

凋亡是程序性细胞死亡,目前已知的3条凋亡途径包括死亡受体途径、线粒体途径及内质网应激凋亡途径.     

内毒素诱导肝细胞凋亡及肝细胞生长因子的抑制作用观察

目的观察内毒素(LPS)诱导肝细胞凋亡的作用及肝细胞生长因子(HGF)对LPS的拮抗作用。方法HepG2细胞传代培养24 h,分三组。对照组加原培养液,LPS组加含LPS(20μg/ml)的培养液,干预组加含LPS(20μg/ml)、HGF(40 U/L)的培养液．继续培养16 h。Tunel标记法检测细胞凋亡。结果LPS组细胞凋亡率为98．65%±0．64%．干预组为35．97%±0．45%,两组相比,P＜0．01。结论LPS可诱导肝细胞凋亡,HGF可抑制LPS所诱导的肝细胞凋亡。     

姜黄素诱导A549细胞凋亡过程中活性氧水平和caspase-3活性的变化

目的 探讨姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的发生机制.方法 采用MTT法检测姜黄素对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察姜黄素对A549细胞凋亡的影响; DCFH-DA为细胞内活性氧(ROS)探针,激光共聚焦扫描显微镜检测姜黄素对A549细胞ROS水平的影响,分光光度法测定姜黄素对A549细胞内caspase-3活性的影响.结果 不同浓度的姜黄素作用12、24、36、48 h后均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其发生凋亡作用;激光共聚焦扫描显微镜下观察姜黄素作用后细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强.结论 姜黄素对人肺腺癌A549细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,对细胞ROS和caspase-3活性的影响在其诱导A549细胞凋亡中发挥作用.     

肿瘤坏死因子-α诱导肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用

目的 研究肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）诱导肝细胞凋亡细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用机制。方法 分别注射脂多糖（ｌｉｐｏｐ ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和ＴＮＦ－α于Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｅ ｅｎｄ ｌａｂｅ     

内毒素体外诱导大鼠肝细胞凋亡

目的探讨内毒素在体外直接作用于大鼠肝细胞时，肝细胞所发生的病理及生物化学特性的变化。方法采用胶原酶灌注法分离肝细胞，体外培养后在培养基中直接加入内毒素，用光镜和透射电镜观察其形态学变化Ｚ提取肝细胞的Ｄ＼Ａ片段经琼脂糖凝胶电泳观察肝细胞生物化学性质的改变。结果内毒素直接作用的肝细胞在形态学上表现出染色质凝集等凋亡细胞的特征；在生物化学方面表现典型的凋亡梯形，此过程可以被凋亡抑制剂金红三羧酸（ａｕｒｌｎｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＡＴＡ％制。肝细胞调亡的数量随内毒素剂量的增加而增加，并且在处理前２４小时之内随处理时间的延长而增加。结论内毒素在体外直接作用于肝细胞，可诱导肝细胞发生凋亡。     

无机砷对Chang liver细胞血红素单加氧酶-1表达的活化作用

目的 观察无机砷(NaAsO2)对正常人肝细胞株Changliver细胞血红素单加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的活化作用.方法 采用细胞培养的方法,将Chang liver细胞分别暴露于10 μmol/L NaAsO2后0(对照)、2、6、12、24 h和0(对照)、5、10、25、50 μmol/L后12 h,收集细胞,Western blot技术检测细胞内HO-1蛋白的表达.结果 Chang liver细胞染砷10 μmol/L.体外培养6、12、24 h,细胞内HO-1蛋白表达(3.97±0.72、12.92±2.98、23.29±3.82)明显高于对照组(1.00±0.00).组问比较和各组分别与对照组比较.差异有统计学意义(F=85.83,P＜0.01;t值分别为-9.42、-8.95、-13.83,P＜0.05或＜0.01).染砷5、10、25、50 μmo]/L.体外培养12 h,细胞内HO-1蛋白表达(6.34±0.25、7.75±0.39、7.93±0.14、12.48±-0.35)明显高于对照组(1.00±0.00),组间比较和各组分别与对照组比较,差异有统计学意义(F=709.66,P＜0.01;t值分别为-36.25、-30.19、-86.40、-56.40,P＜0.01).结论 无机砷能够诱导Chang Liver细胞内HO-1的活化,促进蛋白表达,并且具有时间和剂量效应.     

解偶联蛋白2过表达张氏肝细胞的构建及其对线粒体膜电位和活性氧的影响

目的 构建稳定过表达人解偶联蛋白2 (UCP2)的张氏肝细胞株,观察UCP2对线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS)的作用. 方法 将含有人UCP2 cDNA全长的重组质粒(pcDNA3.1-hU CP2)转染张氏肝细胞系,pcDNA3.1空载体作为对照.Zeocin筛选稳定表达UCP2的细胞株,Western blot和免疫细胞化学鉴定UCP2蛋白表达.利用不同剂量UCP2抑制剂京尼平(25、50、100μmol/L),预处理稳定表达UCP2的细胞株.荧光分光光度法检测MMP和ROS水平变化.数据分析用单因素方差分析和q检验(Newman-keuls法),P＜0.05为差异有统计学意义.结果 pcDNA3.1-hU CP2成功转染张氏肝细胞,UCP2相对表达量约为对照组的1.6倍.过表达细胞罗丹明123和2 ′,7 ′ -二氯氢化荧光素二脂荧光强度(分别为11.11±2.76和4.97±0.62)均明显低于正常对照组张氏肝细胞(分别为15.56±2.55和6.14±1.25,q值分别为4.80和3.35,P＜0.01和P＜ 0.05)和空载体对照组肝细胞(分别为16.11±2.93和6.23±1.13,q值分别为5.40和3.60,P＜0.01和P＜ 0.05);空载体组上述两指标与正常对照组相比,差异均无统计学意义.京尼平低、中、高剂量组与过表达组相比,罗丹明123的荧光强度(分别为14.89±2.89,17.89±2.93,24.00±2.55,q值分别为4.08,7.33和13.93,P值均＜0.01)和2 ′,7 ′-二氯氢化荧光素二脂的荧光强度(分别为9.16±0.78,10.84±1.09, 11.83±1.25,q值分别为12.00,16.83和19.67,P值均＜0.01)均明显升高,并呈现剂量依赖性.结论 成功构建稳定过表达人U CP2的张氏肝细胞株,UCP2表达水平及活性变化可通过MMP和ROS影响线粒体功能.     

砷酸钠对Chang肝细胞Nrf2信号通路的影响

目的探讨五价砷酸钠暴露对Chang肝细胞核转录因子-E2类相关因子2(Nrf2)及其调控的下游抗氧化酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素单加氧酶-1(HO-1)的mRNA及其蛋白表达的影响。方法 0.5、1.0、2.0mmol/L的砷酸钠(Na2HAsO4)染毒Chang肝细胞6 h后,采用western blot法检测细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达情况;采用抗氧化反应元件(ARE)-荧光素酶活性检测Nrf2的转录活性情况;采用Real-time PCR检测细胞NQO1和HO-1的mRNA表达情况。结果 0.5、1.0、2.0 mmol/L的Na2HAsO4染毒6 h均能够显著诱导Chang细胞的Nrf2蛋白表达(P<0.05),ARE荧光素酶活性水平也随染毒剂量的增加而诱导,并且具有剂量-效应关系;随着染毒剂量的升高,HO-1和NQO1的mRNA及蛋白水平逐渐升高,与对照组相比具有统计学差异,并且具有剂量-效应关系(P<0.01)。结论砷酸钠暴露能够诱导人类Chang肝细胞的Nrf2及其调控的下游抗氧化酶NQO1和HO-1的mRNA及其蛋白的表达。     

NADPH氧化酶在瘦素诱导肝星状细胞株HSC-T6产生活性氧中的作用及其机制

目的 研究NADPH氧化酶(NOX)是否参与瘦素诱导肝星状细胞(HSC)产生活性氧(ROS),并探讨其机制. 方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分为9组:瘦素组、瘦素+ROS生成系统抑制剂[包括氯化二亚苯基碘嗡(DPI)、鱼藤酮、甲双吡丙酮、别嘌呤醇和吲哚美辛]组成的干预组、瘦素+JAK抑制剂AG490组成的干预组、正常对照组和阴性对照组.HSC-T6细胞经药物作用1、12、24 h后,荧光显微镜和(或)流式细胞术观察细胞内二氯荧光素强度来反应ROS水平;分光光度计检测NADPH的吸光度,以NADPH的消耗量表示NOX活性;逆转录聚合酶链反应检测Rac1和p22Phox的mRNA相对表达量.数据分析用单因素方差分析、SNK-q检验或秩和检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 HSC-T6细胞加入瘦素(100 ng/ml)作用1 h后,荧光强度较正常对照组明显升高(92.91±4.19比27.56±6.27,P＜0.01);DPI(20 μmol/L)和AG490(50 μ mol/L)能抑制ROS的产生,荧光强度值分别为37.35±4.66和53.12±6.63,均低于瘦素组的92.91±4.19(q值分别为31.78和22.76,P值均＜0.01).瘦素作用HSC-T6细胞1 h后,NADPH的消耗量较正常对照组明显升高[(1.90±0.22)pmol·min-1·mg1比(0.76±0.06)pmol·min-1·mg-1,P＜0.05)],而作用12、24 h后的消耗量明显高于1 h时的消耗量(x2值均为7.54,P值均＜0.05);DPI及AG490干预能抑制瘦素诱导NOX活性的上调(q值分别为16.58和16.23,P值均＜0.05).瘦素作用12 h后,HSC-T6细胞内Racl和p22Phox的mRNA相对表达量明显高于正常对照组(分别为0.41±0.13比0.14±0.08和0.45±0.12比0.20±0.08,P值均＜0.05).结论 瘦素诱导HSC产生的ROS主要来源于NOX,其机制可能是瘦素通过JAK信号通路直接激活NOX,并通过上调NOX的亚基表达使NOX活性持续增高而产生大量ROS.     

培养神经细胞的氧自由基损伤及银杏叶提取物的治疗作用

目的 探讨氧自由基在Alzheimer病(AD)发病中的作用和评价银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract，EGb)的临床应用价值。方法 以产生超氧阴离子系统黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶(X／XO)作用于PC12细胞，并以EGb拮抗其作用，电镜观察细胞形态变化，MTF法检测细胞存活率，流式细胞术分析细胞凋亡情况，RT-PCR技术分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达变化。结果 经X／XO损伤后，细胞存活率降低，凋亡率增加，促凋亡基因Bax表达上调。EGb(20mg／L)能改善凋亡情况。结论氧 自由基可诱导神经细胞凋亡而促进AD发生，EGb对神经细胞有保护作用，提示可用于AD的临床治疗与预防．     

食管癌、胃癌细胞对氧化砷促凋亡的敏感性与固有活性氧水平有关

目的 探讨食管癌，胃癌细胞的固有活性氧（reactive oxygen species,ROS)水平与细胞对三氧化二砷（As2O3)促凋亡敏感性之间的关系。方法 用小剂量（2μmol/L)As2O3作用于人胃癌细胞和食管癌细胞株各一对（SGC7901、MKN45和EC/CUHK1、EC1867），证实As2O3促凋亡敏感性在SGC7901和MKN45之间及EC/CUHK1和EC1867之间均有差异。然后在不加As2O3的情况下，用活性氧捕获剂双氢罗丹明123（DHR123）卵育细胞（DHR123在细胞内被ROS氧化为发出荧光的罗丹明123），通过流式细胞仪检测细胞内罗丹明123的荧光而测得细胞内固有ROS水平。结果 对As2O3敏感的SGC7901细胞的固有活性氧水平比As2O3不敏感的MKN45细胞高，对As2O3敏感的EC/CUHK1细胞的固有活性氧水平比As2O3不敏感的EC1867细胞高。结论 食管癌，胃癌细胞固有ROS水平的差异与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性差异有关。     

Reactive oxygen species and phosphatidylserine externalization in murine sickle red cells

Due to their role in oxygen transport and the presence of redox active haemoglobin molecules, red blood cells (RBC) generate relatively high levels of reactive oxygen species (ROS). To counteract the potential deleterious effects of ROS, RBCs have a well-integrated network of anti-oxidant mechanisms to combat this oxidative stress. ROS formation is increased in sickle-cell disease (SCD) and our studies in a murine SCD model showed a significant increase in the generation of ROS when compared with normal mice. Our data also indicated that murine sickle RBCs exhibit a significantly increased ATP catabolism, partly due to the increased activity of glucose-6-phosphate dehydrogenase and glutathione reductase to regenerate intracellular glutathione (GSH) levels to neutralize the adverse milieu of oxidative stress. Higher ATP consumption by the murine sickle RBCs, together with the increased ROS formation and impairment of the aminophospholipid translocase or flipase may underlie the exposure of phosphatidylserine on the surface of these cells.     

Reactive oxygen species： A double-edged sword in oncogenesis

Reactive oxygen species （ROS） are molecules or ions formed by the incomplete one-electron reduction of oxygen. Of interest, it seems that ROS manifest dual roles, cancer promoting or cancer suppressing, in tumorigenesis. ROS participate simultaneously in two signaling pathways that have inverse functions in tumorigenesis, Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2 signaling and the p38 mitogen-activated protein kinases （MAPK） pathway. It is well known that Ras-Raf-MEK1/2-ERK1/2 signaling is related to oncogenesis, while the p38 MAPK pathway contributes to cancer suppression, which involves oncogene-induced senescence, inflammation- induced cellular senescence, replicative senescence, contact inhibition and DNA-damage responses. Thus, ROS may not be an absolute carcinogenic factor or cancer suppressor. The purpose of the present review is to discuss the dual roles of ROS in the pathogenesis of cancer, and the signaling pathway mediating their role in tumorigenesis.