晚期糖基化终产物激活内皮细胞核因子κB

目的 探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞核因子κB的激活及作用机制.方法 用晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304体外共同培养.用Western blot检测核因子κB抑制蛋白水平,凝胶滞留法检测核因子κB的活性.结果 晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白可致ECV304核因子κB抑制蛋白降解及核因子κB激活,并且呈时间、剂量依赖关系,抑制核因子κB抑制蛋白的降解,可抑制核因子κB的激活.结论 晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白通过引起核因子κB抑制蛋白降解,导致核因子κB的激活,这一作用机制可能参与动脉粥样硬化的进程.     

晚期糖基化终产物激活内皮细胞核因子κB

目的 探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞核因子出的激活及作用机制。方法用晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304体外共同培养。用Western blot检测核因子胡抑制蛋白水平，凝胶滞留法检测核因子kB的活性。结果晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白可致ECV304核因子kB抑制蛋白降解及核因子胡激活，并且呈时间、剂量依赖关系，抑制核因子胡抑制蛋白的降解，可抑制核因子胡的激活。结论晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白通过引起核因子kB抑制蛋白降解，导致核因子kB的激活，这一作用机制可能参与动脉粥样硬化的进程。     

晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列腺素合成的影响及可能机制

目的探讨晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列环素、前列腺素E2合成的影响及可能机制。方法不同浓度的晚期糖基化终末产物作用内皮细胞,酶联免疫吸附法测定前列环素的稳定代谢产物6-酮—前列腺素F1α和前列腺素E2的表达。逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学测定环氧合酶2 mRNA和蛋白表达的改变。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA对晚期糖基化终末产物刺激内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2的影响。结果晚期糖基化终末产物引起内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2增加(P<0.01),具有剂量依赖关系。晚期糖基化终末产物引起内皮细胞环氧合酶2的mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA可减轻晚期糖基化终末产物刺激的内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2(P<0.05或0.01),双基因的抑制效果更明显(P<0.05)。结论晚期糖基化终末产物可能通过晚期糖基化终末产物受体、核因子κB途径使内皮细胞的环氧合酶2表达增加,从而引起前列环素、前列腺素E2合成增加,这个机制可能参与了晚期糖基化终末产物所致的血管炎症损伤。     

糖基化终产物促进培养的人脐静脉内皮细胞选择素E的表达

目的 探讨糖基化终产物在糖尿病动脉粥样硬化形成中的作用机理。方法 分离正常人脐静脉内皮细胞，将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞在体外共同培养，用荧光单克隆抗体染色，流式细胞仪定量检测内皮细胞表面选择素E的表达。结果 正常人脐静脉内皮细胞未表达选择素Eo糖基化终产物修饰的人血清白蛋白能以时间和剂量依赖的方式上调血管内皮细胞粘附分子选择素E的表达（P〈0．015），而人血清白蛋白对人脐静脉内皮细胞粘附分子选择素E的表达无影响。结论 糖基化终产物能上调人脐静脉内皮细胞粘附分子的表达，从而促进动脉粥样硬化时单核，巨噬细胞的浸润。     

糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-κB和COX-2表达

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对大鼠心脏微血管内皮细胞因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系. 方法 体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-κB及COX-2蛋白的表达. 结果 25、50、100、200mg/L BSA-AGEs作用后,NF-κB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg/L AGEs作用6、12、24、48h,NF-κB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多. 结论 BSA- AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-κB和COX-2的表达,其作用可能与NF-κB的活化有关.     

形态学观察晚期糖基化终末产物诱导微血管内皮细胞核因子κB入核及其机制

目的 观察晚期糖基化终末产物(AGE)诱导的微血管内皮细胞核因子κB核转位,探讨氧化应激和内质网应激在核因子κB核转位中可能发挥的作用.方法 用AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)与人皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)在体外共同培养1h,设立对照组进行比较,用免疫荧光化学染色示核因子κB的核转位情况;应用活性氧的抑制剂谷胱甘肽(GSH)、NADPH氧化酶(NOX)抑制剂Apocynin、内皮细胞高表达的NOX亚型NOX4的siRNA和内质网应激的标志性蛋白内质网转膜蛋白激酶1α(IRE1α)的siRNA分别预处理细胞后再给予AGE-BSA刺激,观察核因子κB的核转位情况.结果 与对照组相比,AGE-BSA可诱导人皮肤微血管内皮细胞核因子κB入核;应用GSH、Apocynin、NOX4siRNA和IRE1α siRNA预处理细胞均可抑制核因子κB的入核.结论 AGE对核因子κB的移位激活可能通过细胞内的氧化应激和内质网应激途径所介导.     

糖基化终末产物对视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用

目的探讨糖基化终末产物对大鼠视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用。方法体外培养大鼠视网膜微血管内皮细胞,制备糖基化终末产物—糖基化白蛋白。应用荧光显微镜观察核因子κB的活化。并观察给予辛伐他汀后视网膜微血管内皮细胞M atrigel上管腔形成的变化及单核细胞趋化蛋白1的表达。结果视网膜微血管内皮细胞无糖基化白蛋白刺激时,核因子κB主要表达在细胞浆;糖基化白蛋白刺激后核因子κB主要表达在核内,作用30 min时达高峰。糖基化白蛋白作用下管腔形成明显增多,单核细胞趋化蛋白1的表达明显增加,加入辛伐他汀后管腔形成明显减少,单核细胞趋化蛋白1的表达明显下降。结论糖尿病视网膜病变中糖基化终末产物发挥重要作用,核因子κB的活化是其关键环节;辛伐他汀可以减少糖基化白蛋白诱导的管腔形成及单核细胞趋化蛋白1的表达。     

糖基化终产物引起晚期内皮祖细胞功能障碍

目的观察与糖尿病患者血清浓度类似的糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白对体外培养脐血来源晚期内皮祖细胞功能的影响并探讨可能机制。方法密度梯度离心法分离脐血中单个核细胞,用差速贴壁法分离、培养晚期内皮祖细胞。流式细胞术、免疫细胞化学染色及荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白、植物凝集素被用于鉴定培养的细胞。将晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共同培养24h后,利用噻唑蓝法检测细胞的增殖能力,AnnexinV/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡;Boyden小室法检测血管内皮生长因子趋化的细胞迁移;ECMatirx-gel检测形成毛细血管样网状结构的能力。利用逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法测定糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达水平。结果脐血单个核细胞在体外培养过程中先后出现两种细胞:第5～7天出现集落样生长细胞,扩增不明显,存在14天左右即消失,这类细胞被称为"早期内皮祖细胞";10～15天时,逐渐出现20～50个细胞组成的细胞簇,1～3天即可形成大于500个细胞簇,细胞呈铺路石样,可传代,大于95%的细胞免疫表型为CD45-/CD146+/CD105+,表达内皮细胞特有的vWF因子,可摄取乙酰化低密度脂蛋白并可与荆豆凝集素1结合,这类细胞被称为"晚期内皮祖细胞"。50～400mg/L晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白与晚期内皮祖细胞共培养24h后,与对照组相比,细胞的增殖能力未见明显变化(P0.05)。当晚期糖基化修饰的牛血清白蛋白浓度大于100mg/L时,与对照组相比,晚期内皮祖细胞的凋亡增加(P0.05)、血管内皮生长因子趋化的迁移以及在ECMatirx-gel上形成新生血管的能力下降(P0.05),糖基化终产物受体mRNA和蛋白表达均增加(P0.05)。结论糖基化终产物通过促进凋亡、抑制迁移及体外形成新生血管的能力引起晚期内皮祖细胞功能障碍,这些影响可能与糖基化终产物上调晚期内皮祖细胞上糖基化终产物受体表达有关。     

晚期糖基化终产物诱导血管内皮细胞骨架形态改变的机制

目的研究晚期糖基化终产物修饰蛋白对内皮细胞细胞骨架肌动蛋白的形态学影响及特异的糖基化终产物受体和氧化应激在此病理过程中的作用。方法用不同浓度的糖基化终产物修饰人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304在体外共同培养不同时间，并设立对照组进行比较，采用免疫荧光染色法显示细胞骨架的形态学改变。结果与对照组相比，糖基化终产物修饰人血清白蛋白以时间和剂量依赖的方式影响内皮细胞骨架肌动蛋白聚合丝状和可溶性单体（或球状）形态的改变。随着糖基化终产物修饰人血清白蛋白作用浓度和时间的增加，丝状肌动蛋白所形成的外周致密带边缘出现锯齿样断裂，趋于变细崩解消散，最终形成由非极性单行排列的肌动蛋白丝组成的应力纤维。可溶性单体表现为向细胞浆和胞膜移位，胞浆区出现点状和丝状染色，细胞间距离明显增大。可溶性糖基化终产物受体的抗体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶抑制剂均可阻断糖基化终产物对细胞骨架的影响。结论糖基化终产物修饰蛋白对细胞骨架的影响是通过与内皮细胞上的糖基化终产物受体结合并引起细胞内的氧化应激所介导的，这一作用可能与糖基化终产物所致血管通透性升高有关。     

糖基化终产物对人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对人血管内皮细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ基因的影响 ,体外培养人血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度葡萄糖 (0、2 0、5 0和 80mmol L)孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(2 0 0mg L)、不同浓度的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白 (5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L)干预 2 4h和葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预细胞 0、12、2 4、36、4 8和 72h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度为 2 0、5 0和 80mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白及浓度为 5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白都减少过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达 (P <0 .0 0 1) ,干预 12、2 4、36、4 8和 72h后过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达均较未干预组明显减少 (P <0 .0 0 1)。此结果提示 ,糖基化终产物可抑制人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因的表达。     

晚期糖基化终产物诱导内皮细胞黏附连接改变及其机制

目的观察不同浓度和时间修饰的糖基化人血清白蛋白作用下,人脐静脉内皮细胞内黏附连接蛋白钙黏着蛋白的形态结构变化,并初步探讨其机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,分别用不同浓度和时间修饰的糖基化人血清白蛋白处理,用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察钙黏着蛋白在内皮细胞的形态和分布变化。分别用可溶性的修饰的糖基化人血清白蛋白受体的抗体、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂或转染重组腺病毒突变体转染预处理后再观察晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白对内皮细胞形态的影响。结果修饰的糖基化人血清白蛋白以时间和剂量依赖方式引起内皮细胞黏附连接钙黏着蛋白形态结构的改变;丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂(SB203580、PD98059、SP600125)和Rho激酶抑制剂Y27632均可减轻晚期糖基化终产物对钙黏蛋白的影响;转染显性失活的细胞外信号调节激酶上游激酶MEK1和p38丝裂原活化蛋白激酶上游激酶MKK6b及p38显性失活的p38α和p38β重组腺病毒突变体,均可减轻晚期糖基化终产物对钙黏蛋白形态结构的影响,而转染组成性激活的MEK1和MKK6b的重组腺病毒本身即可引起钙黏蛋白形态结构的变化。结论晚期糖基化终产物刺激可以引起钙黏蛋白分布和形态的变化,这一作用可能是丝裂原活化蛋白激酶通路细胞外信号调节激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路和c-jun氨基末端激酶(JNK)/应激激活的蛋白激酶(SAPK)介导的,Rho激酶可能参与此过程。     

联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附因子1 mRNA表达及机制

目的探讨联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响和氧化应激的机制。方法酶消化法获取人脐静脉内皮细胞。逆转录聚合酶链反应检测血管细胞黏附分子1基因的表达。活性氧检测试剂盒检测细胞内氧自由基的荧光信号强度。结果晚期糖基化终产物(10-4～10-1g/L)和同型半胱氨酸(1.35×10-3～1.35g/L)组呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达,晚期糖基化终产物(10-4g/L)和同型半胱氨酸(1.35×10-3g/L)联合作用能进一步增加人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1基因的表达(1.09±0.18),与单独晚期糖基化终产物(0.14±0.07)和同型半胱氨酸组(0.18±0.06)相比其表达分别增加了7.78倍和6.05倍(P0.01);还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶特异性抑制剂二亚苯基碘能显著抑制晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合诱导的血管细胞黏附分子1基因的表达(0.20±0.09比1.19±0.23,P0.01);晚期糖基化终产物组和同型半胱氨酸组均能增加人脐静脉内皮细胞内氧自由基的荧光信号强度,晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合作用时,细胞内氧自由基的荧光信号强度水平进一步升高,且二亚苯基碘能明显抑制上述效应。结论晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸能增加细胞内氧自由基的荧光信号水平,使血管细胞黏附分子1基因的表达上调,且两者存在协同效应;氧自由基水平的增加是导致血管细胞黏附分子1基因表达升高的重要因素;血管细胞黏附分子1可能是通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶途径实现的。     

丹参酮ⅡA对内皮细胞环氧合酶2表达的影响及相关机制

目的　探讨丹参酮ⅡA对主动脉内皮细胞环氧合酶2（COX-2）表达的影响及相关机制。方法　体外培养人主动脉内皮细胞株并分为三组：血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）组、血管紧张素Ⅱ（100　nmol/L）＋丹参酮ⅡA（1　μmmol/L）组及对照组,共培养10　min、1　h及2　h后分别收集细胞,运用实时荧光定量PCR检测COX-2　mRNA的表达量,Western　blot检测COX-2、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、核因子κB（NF-κB）及磷酸化NF-κB（p-NF-κB）蛋白表达的变化。结果　在血管紧张素Ⅱ的作用下,内皮细胞内COX-2　mRNA和蛋白表达水平明显增加（P<0.01）,且p-p38MAPK和p-NF-κB水平也同步提高（P<0.01）。加用丹参酮ⅡA处理后,内皮细胞COX-2　mRNA和蛋白表达水平显著下降（P<0.01）,p-p38MAPK和p-NF-κB水平也受到明显抑制（P<0.01）。结论　丹参酮ⅡA明显抑制主动脉内皮细胞COX-2的表达,其机制可能与抑制p38MAPK、NF-κB的磷酸化有关。     

恒磁场对糖基化终产物作用下内皮细胞一氧化氮生成和一氧化氮合酶活性的影响

目的观察不同强度恒磁场对糖基化终产物作用下人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成及一氧化氮合酶活性的影响。方法采用体外培养第3代人脐静脉内皮细胞,糖孵育法制备糖基化终产物修饰牛血清白蛋白。实验分为6组,即对照组、糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(100μg/L)组及糖基化终产物修饰牛血清白蛋白+不同强度(1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T2、0×10-4T)磁场组。各组细胞于培养及磁场作用24 h后收集标本,用Griess法检测培养上清中一氧化氮水平,并测定人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性。结果糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性较对照组明显降低(P<0.05)。1×10-4T、5×10-4T、10×10-4T和20×10-4T恒磁场组一氧化氮生成、一氧化氮合酶活性显著高于糖基化终产物修饰牛血清白蛋白组(P<0.05)。结论糖基化终产物修饰牛血清白蛋白可抑制人脐静脉内皮细胞的一氧化氮合酶活性和一氧化氮产生;1×10-4T~20×10-4T的恒磁场可呈强度依赖性拮抗糖基化终产物修饰牛血清白蛋白对一氧化氮生成的抑制效应。     

晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体-核转录因子-κB/…哺乳类雷帕霉素靶蛋白通路在2型糖尿病大血管并发症中的作用

晚期糖基化终末产物可引起体内组织一系列病理生理改变,是导致糖尿病慢性并发症的重要致病因素。晚期糖基化终末产物受体存在于很多细胞表面,其与晚期糖基化终末产物的结合可导致细胞内氧化应激和核转录因子-κB通路的激活。核转录因子-κB及其下游细胞因子的激活在糖尿病大血管及微血管并发症的发展中起重要作用。研究证实哺乳类雷帕霉素靶蛋白活化,引起下游信号分子的磷酸化及促细胞周期运转因子的过度表达,诱发平滑肌细胞增殖。同时核转录因子-κB与哺乳类雷帕霉素靶蛋白存在着复杂的交互作用。据此推断晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体/核转录因子-κB/…哺乳类雷帕霉素靶蛋白通路可能在糖尿病大血管并发症的发生发展中具有重要意义。本文就国内外最新研究对晚期糖基化终末产物受体/核转录因子-κB/…哺乳类雷帕霉素靶蛋白与糖尿病大血管并发症发生发展的关系作一综述。     

球形脂联素对糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响

目的 观察球形脂联素(gAdAPN)对糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,以人血清白蛋白作为阴性对照,用含不同浓度梯度(100、200、400 mg/L)糖基化终产物的培养液对内皮细胞体外培养60 min及gAdAPN 100 nmol/L作用30 min后再加入400 mg/L糖基化终产物作用内皮细胞60 min,采用Western印迹法检测内皮细胞MIP-1α蛋白的表达.结果 糖基化终产物组内皮细胞MIP-1α蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.05),且呈剂量依赖方式;经灰度值分析,各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别为对照组的1.12倍、1.47倍及1.98倍(P＜0.05).gAdAPN干预组内皮细胞MIP-1α蛋白的表达降低为对照组的1.64倍(P＜0.05).结论 gAdAPN能抑制糖基化终产物诱导血管内皮细胞表达MIP-1α,可能有助于延缓糖尿病大血管病的发生.     

α-硫辛酸抑制糖基化终末产物诱导血管内皮细胞凋亡的研究

目的研究α-硫辛(ALA)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导血管内皮细胞凋亡的抑制作用及机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加不同培养液孵育60 min,以人血清白蛋白(HSA)培养液作为对照组,以AGEs-HSA 200 mg/L培养液体外培养60 min为AGEs-HSA组,以ALA 200 μg/ml加入200 mg/L AGEs为ALA组,采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,Western blot法检测NF-κB p65核蛋白表达,ELISA法测定天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性。结果 AGEs以浓度依赖方式促进内皮细胞凋亡。与对照组比较,AGEs-HSA组细胞NF-κB p65蛋白表达量明显减低,caspase-3活性明显增高(P0.05);与AGEs HSA组比较,ALA组内皮细胞凋亡明显减少,NF-κB p65蛋白表达量明显增加,caspase-3活性明显降低(P0.05)。结论 ALA可能通过增加NF-κB表达,抑制caspase-3激活的AGEs诱导内皮细胞凋亡。     

晚期糖基化终产物对人内皮细胞表达MCP-1和VCAM-1的影响及阿托伐他汀的干预

目的观察晚期糖基化终产物对体外培养人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1的影响及阿托伐他汀的干预作用,探讨晚期糖基化终产物诱发动脉粥样硬化形成的机制和阿托伐他汀治疗的机制。方法胶原酶消化法分离获取人脐静脉内皮细胞;倒置相差显微镜形态观察法及免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉内皮细胞;逆转录聚合酶链反应法对单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及晚期糖基化终产物受体基因表达进行分析;活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧产生量,倒置荧光显微镜下观察细胞内活性氧荧光强度。结果倒置相差显微镜下可见培养的细胞呈卵圆形或多角形,典型的铺路石样排列,经CD31、CD34染色,细胞浆内有棕黄色颗粒沉着(CD31、CD34阳性)。与空白对照组相比,晚期糖基化终产物(10-4~10-1g/L)呈浓度依赖性增强人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1基因表达,10-4g/L晚期糖基化终产物组人内皮细胞单核细胞趋化蛋1和血管细胞黏附分子1基因表达水平开始显著增高(0.26±0.02比0.17±0.04;0.22±0.02比0.08±0.01,P<0.01);与晚期糖基化终产物组相比,阿托伐他汀(0.1、1、10μ...     

晚期糖基化终产物诱导ECV304细胞株氧化增强的可能机制

目的探讨晚期糖基化终产物诱导细胞株ECV304氧化增强的机制。方法取ECV304细胞培养,与不同浓度的晚期糖基化终产物-人血清白蛋白共孵育,或分别经NADPH氧化酶抑制剂Apocynin或蛋白激酶C抑制剂GF109203或酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein预孵育0.5 h后,再与晚期糖基化终产物—人血清白蛋白共孵育,1h后收集细胞,用细胞色素C法检测O2-.,ThioGlo-1试剂检测还原型谷胱甘肽。结果12.5 mg/L、50 mg/L和200mg/L晚期糖基化终产物—人血清白蛋白可导致ECV304细胞内O2-.从1.37±0.67 nmol/(107.h)增加到3.44±0.40、10.67±0.67和10.93±0.67 nmol/(107.h),使还原型谷胱甘肽从9.54±0.41 nmol/106降低到9.02±0.21、8.41±0.34和8.02±0.18 nmol/106,两者均呈剂量依赖性。Apocynin、GF109203及Genistein均可抑制O2-.的增加及还原型谷胱甘肽的降低。结论晚期糖基化终产物-人血清白蛋白可通过蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶途径激活NADPH氧化酶,引起ECV304细胞内O2-.产生及还原型谷胱甘肽降低,导致细胞内氧化增强。     

糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-kB和COX-2表达

目的研究糖基化终末产物（AGEs）对大鼠心脏微血管内皮细胞因子kB（NF-kB）和环氧合酶2（COX-2）表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系。方法体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-kB及COX-2蛋白的表达。结果25、50、100、200mg／LBSA-AGEs作用后,NF-kB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg／LAGEs作用6、12、24、48h,NF-kB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多。结论BSA-AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-kB和COX-2的表达,其作用可能与NF-kB的活化有关。