新型钛合金阳极氧化后对成骨细胞增殖、分化的影响

目的研究新型医用钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(AD)技术处理后对成骨细胞增殖和分化的影响。方法将人成骨样MG63细胞接种于Ti6Al4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用MTT法检测成骨细胞的增殖情况,考马斯亮蓝G250染色法检测细胞总蛋白质含量,对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果人成骨样MG63细胞在Ti6Al4V、TNZS以及AD-TNZS表面均能良好生长,细胞增殖率、细胞总蛋白含量未见明显差异(P>0.05);但培养至4、7d时,AD-TNZS组细胞ALP活性明显高于其他组(P<0.05)。结论阳极氧化处理的TNZS钛合金可促进成骨细胞的分化。     

实验性大鼠根尖周炎骨质破坏与RANKL／OPG关系的研究

[摘要]目的：观察核因子-κB受体活化因子配体（receptoractivatorfornuclearfactor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprote—gerin,OPG）在大鼠根尖周炎发展各阶段表达的变化与根尖周病损发展之间的关系。方法：选取8周龄雄性Wistar大鼠,随机一侧下颌第一磨牙为实验组,对侧下颌第一磨牙作为对照组;术后1、3、7、14、21d处死动物,拍摄颌骨x线片,计算根尖周骨破坏面积;组织切片,免疫组织化学检测根尖周组织中RANKL、OPG的表达。结果：根尖周骨破坏面积自术后3d开始显著增大,21d达到峰值,呈时间依赖关系;RANKL的表达量在3d组明显增高,7d组表达量到达峰值,14d组开始下降;OPG的表达量在1d组即出现有显著性上升,3d组表达趋于平缓,21d组达峰值。RANKL、OPG的变化与根尖周病变发展的变化趋势有着显著相关性。结论：RANKL／OPG系统在根尖周炎炎症性骨质破坏机制中起重要调节作用。     

灯盏花联合机械牵张力对成骨细胞OPG和RANKL蛋白表达的影响

目的：研究灯盏花、机械牵张力以及灯盏花与机械牵张力联合作用下对体外培养的成骨细胞OPG和RANKL蛋白表达的影响,探讨灯盏花对正畸骨改建的作用机理。方法：体外培养成骨样细胞株MG63细胞,细胞的机械牵张力刺激采用SXG4201型四点弯曲细胞力学加载仪。分别单用机械牵张力刺激（2000 μstrain,0.5Hz）、单用灯盏花（1mg/mL）干预、以及机械牵张力（2000 μstrain,0.5Hz）和灯盏花（1mg/mL）联合干预MG63细胞不同时间（3h,6h,12h,24h）后,提取细胞总RNA和蛋白质,用Western blot方法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达。结果：单用机械牵张力刺激MG63细胞后OPG蛋白表达上调,且呈时间依赖性,而RANKL蛋白表达无明显变化;单用灯盏花干预MG63细胞后OPG蛋白表达下调,RANKL蛋白表达增加;两者联合干预MG-63细胞后,OPG蛋白表达量减少,RANKL蛋白表达显著增加。结论：灯盏花能拮抗机械牵张力对成骨细胞OPG分泌的刺激作用,促进机械牵张力对成骨细胞RANKL分泌的刺激作用。     

阳极氧化处理后的新型钛合金体外诱导实验及对成骨细胞早期附着的影响

目的：研究新型医用钛合金Ti-24Nb-4Zr-7．9Sn（TNZS）经过阳极氧化（AD）技术处理后体外诱导活性及对人成骨样MG63细胞早期附着的影响。方法：采用阳极氧化处理TNZS合金，对其进行模拟体液（SBF）浸泡实验，分析其表面元素成分及相结构的变化；并将人成骨样MG63细胞接种于Ti6Al4V、TNZS、AD—TNZS表面，观察细胞的早期附着及形态学变化。结果：AD—TNZS在SBF中浸泡6d后，材料表面有羟基磷灰石形成。在MG63成骨样细胞接种60、120min时，人成骨样MG63细胞在AD—TNZS表面的附着率均明显高于Ti6Al4V和TNZS表面附着率（P〈0．05），并表现出良好的形态。结论：阳极氧化后的新型医用钛合金在模拟体液中可诱导羟基磷灰石形成；对成骨细胞的早期附着有一定的促进作用。     

MTA对牙周膜干细胞RANKL/OPG表达水平的影响

目的 探讨MTA对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法 通过酶消化法分离培养PDLSCs,依据碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性筛选最佳MTA刺激浓度,将PDLSCs分别于对照组（普通培养基）和2 mg/mL MTA条件培养液培养3 d和7 d后,蛋白免疫印迹法分别检测RANKL、OPG蛋白表达。结果 MTA刺激3 d和7 d组,OPG蛋白表达较对照组升高,RANKL蛋白表达较对照组降低。结论 MTA可通过调节RANKL/OPG系统,参与调节PDLSCs成牙/骨及破牙/骨活性。     

OPG/RANKL对骨改建的调控作用

通过破骨细胞对旧骨的吸收和成骨细胞的新骨形成,骨组织发生空间形态的改变,这种新骨替代旧骨的过程称为骨改建.绝经后的骨质疏松症和许多病变中骨改建率增加,但新骨形成不足,骨量减少,骨折几率增加.骨吸收依赖于被称为RANKL的细胞因子,而OPG与RANKL结合后,可阻止其单一同源受体RANK的活化.大量的体内和体外实验表明,RANKL与OPG的比例是影响骨吸收和骨改建的重要决定因素之一.     

左归丸对实验性骨质疏松牙周炎大鼠牙周组织OPG、RANKL表达的影响

选取6月龄纯种雌性SD大鼠46只,随机分为4组,正常组(N组)10只,去势牙周炎组(OVX-PD组)12只,去势牙周炎戊酸雌二醇治疗组(ERT组)12只,去势牙周炎左归丸治疗组(ZGT组)12只。建立骨质疏松牙周炎动物模型并按分组用药,3个月后处死动物,检测牙周组织中的骨保护因子(OPG)、破骨细胞核因子КB受体活化因子配体(RANKL)。ZGT组、ERT组可见牙周袋变浅,牙槽骨可见新骨生成;ZGT组及ERT组牙周组织中OPG含量明显高于OVX-PD组(P<0.01),RANKL含量明显低于OVX-PD组(P<0.01)。     

17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞RANKL、OPG表达影响的研究

目的:探讨17β-雌二醇对人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响。方法:通过酶消化法分离培养SCAPs,将SCAPs分别于对照组(普通培养基+10μmol/L无水乙醇)和含0.1μmol/L17β-雌二醇的培养基培养3d和7d后,实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法分别检测RANKL、OPG mRNA和蛋白表达。结果:17β-雌二醇刺激3d和7d组,OPGmRNA和蛋白表达均较对照组升高(P<0.01),RANKL mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P<0.01)。结论:17β-雌二醇可能通过调节RANKL/OPG系统,参与调节SCAPs成牙/骨及破牙/骨活性。     

中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞RANKL／OPG表达的影响

目的：探讨中间普氏菌培养上清对牙龈成纤维细胞核因子-κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）表达的影响。方法：将系列浓度的中间普氏菌培养上清作用于牙龈成纤维细胞,显微镜下观察细胞的变化。实时定量 RT-PCR法和 Western blot法分别检测 RANKL、OPG mRNA及蛋白水平的表达,并计算 RANKL/OPG的比值。结果：牙龈成纤维细胞的数量随中间普氏菌培养上清浓度的增加而减少,50μg/mL 时,显微镜下没有活细胞存在。在mRNA水平上和蛋白水平上,RANKL/OPG的比值在12．5μg/mL处理组均高于对照组,差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论：中间普氏菌培养上清可诱导人牙龈成纤维细胞表达 RANKL 和 OPG,破坏 RANKL/OPG比例的平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用。     

牙龈卟啉单胞菌对纯钛表面成骨细胞表达OPG和RANKL mRNA的影响

目的:在转录水平上观察牙龈卟啉单胞菌对成骨细胞表达OPG及RANKL mRNA的影响.方法:用浓度分别为106、18CFU/mL的牙龈卟啉单胞菌刺激接种于纯钛表面的成骨细胞,24 h后提取各组成骨细胞总RNA并应用逆转录-聚合酶链式反应和mRNA比色定量的方法检测OPG及RANKL 基因表达.结果:MG-63成骨细胞基础表达较强的OPG mRNA及少量的RANKL mRNA,牙龈卟啉单胞菌以浓度依赖的方式增强RANKL mRNA的表达,减弱OPG mRNA的表达.结论:牙龈卟啉单胞菌通过上调RANKL/OPG的比率可间接的调节破骨细胞的活性从而影响支抗种植体周的骨代谢.     

骨皮质切开术辅助大鼠正畸牙移动中M-CSFmRNA,ANKLmRNA,OPGmRNA的研究

目的:观察M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体),Osteoprotegerin(骨保护蛋白)在大鼠骨皮质切开术辅助正畸牙移动过程中的表达情况.方法:选取健康雄性Wistar大鼠65只,60只大鼠随机分成3组:组Ⅰ:选择性骨皮质切开术组;组Ⅱ:传统牙齿移动组;组Ⅲ:混合组,剩余5只作为空白对照组(不作任何处理).用镍钛螺旋拉簧施加约60g力近中移动上颌实验侧第一磨牙,在第一磨牙颊腭侧行打孔式骨皮质切开术,分别在加载第7、14、21、28、42d颈椎脱臼处死取材,应用SYBRGreen实时荧光定量技术和MxPro-Mx3000P软件对取材进行分析.结果:组Ⅲ的破骨细胞主要调节因子和生化标记物:M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子),RANKL(核激活因子KB受体活化因子配体)的表达与组Ⅰ和组Ⅱ相比增加,暗示组Ⅲ骨吸收活跃.组Ⅲ与组Ⅱ相比,呈现出独特的牙槽骨改建模式:藕联的RANKL和OPG促进牙槽骨改建.结论:正畸牙齿移动初期骨皮质切开术加速了牙齿移动,改变了早期骨代谢状态,破骨活跃,支持区域性骨代谢加速学说.     

大鼠正畸压力侧牙槽骨改建中RANKL和OPG mRNA的表达

目的研究破骨细胞核因子kB受体活化因子配基（receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL）及其伪受体骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的mRNA在大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨改建中的表达变化及时问分布特点。方法选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠。HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;实时定量PCR方法检测RANKL和OPGmRNA的表达变化及时问分布特点。结果骨改建的最活跃期为正畸加力后的第7d,压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后逐渐降低。压力侧牙槽骨组织中的RANKL和OPGmRNA表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,而后均逐渐降低。结论RANKL和OPG mRNA表达的变化规律不仅与骨改建过程一致,而且也与TRAP染色阳性破骨细胞数量的变化规律一致。RANKL和OPG与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关。     

非负荷期种植体周围破骨细胞核因子κB受体活化因子配基、骨保护因子mRNA的表达变化

目的研究破骨细胞核因子κB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL）及其伪受体骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的mRNA在非负荷期种植体周围骨改建中的表达变化及时间分布特点。方法选用6只1~2岁龄的雄性Beagle犬建立种植义齿动物模型,观测种植体植入后3、7、15、30、60、90 d,种植体周围的骨改建情况。拍摄X线片,取种植体周围骨组织进行实时荧光定量PCR,检测RANKL和OPG mRNA随时间的表达变化及分布特点,取犬下颌骨进行大体标本观察。结果各时间段种植体与骨组织间均无明显间隙,种植体周骨密度随时间延长而增加,种植体周骨质无明显吸收。动物处死后,取下颌骨标本检查种植体动度,发现种植体无明显动度,金属杆叩击音清脆。骨改建的最活跃期为种植体植入后的第7天,种植体周围RANKL和OPG mRNA均随种植体植入时间的延长而增加,第7天达高峰,而后均逐渐降低。结论种植体周RANKL和OPG mRNA表达的变化规律与骨改建过程一致,RANKL和OPG可能与骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能有关。     

大鼠正畸牙移动压力侧牙槽骨中cathK、RANKL和OPG的表达

目的检测大鼠正畸牙移动压力侧cathK、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点。方法选用80只6周龄SD雄性大鼠建立正畸牙移动模型,分别在加力后2d、5d、7d、10d和14d各处死16只大鼠。HE染色观察大鼠牙周组织的形态学变化;TRAP染色计数压力侧牙槽骨组织中的破骨细胞数量;免疫组化方法定位及相对定量检测压力侧牙槽骨中cathK、RANKL和OPG蛋白表达变化及时间分布特点。结果压力侧牙槽骨组织中的TRAP染色阳性破骨细胞计数随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,此后逐渐降低;压力侧牙槽骨组织中的cathK、RANKL和OPG蛋白的表达水平均随加力时间的增加而增加,第7d达到高峰,以后均逐渐降低。结论cathK、RANKL和OPG蛋白表达的变化规律与骨改建过程一致,与正畸牙移动骨改建过程中破骨细胞的分化、形成和功能密切相关。     

RANKL/OPG比值变化在根尖肉芽肿骨质破坏中的意义

目的 检测核因子kappa B受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）的蛋白表达,探讨RANKL/OPG比值在根尖肉芽肿骨质破坏中的意义.方法 采用免疫组织化学技术检测30例慢性根尖肉芽肿和10例健康牙周膜组织中RANKL和OPG的表达.分析RANKL/OPG比值与炎症浸润、骨质破坏及临床症状之间的关系.结果 与正常对照组相比,根尖肉芽肿病损组织中的RANKL蛋白表达和RANKL/OPG比值显著升高（P＜0.05）.RANKL和OPG的蛋白表达无相关性（P＞0.05）.与小病损相比,RANKL/OPG比值在大病损中显著升高（P＜0.05）.RANKL/OPG比值与病损炎症浸润程度和有无临床症状均无关（P＞0.05）.结论 RANKL/OPG比值与根尖肉芽肿的病损大小密切相关,提示RANKL和OPG在根尖肉芽肿骨质破坏进程中发挥重要作用.