氯化铝对大鼠皮层神经元凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的探讨氯化铝(AlCl3)对大鼠皮层神经元凋亡的诱导作用及对bcl-2、bax基因表达的影响.方法体外原代无血清培养至第7天的大鼠皮层神经元,实验组的培养液中加入A1C13(终浓度分别为10、100、1000μmol/L),对照组的培养液中加入等体积分数为0.9%的生理盐水,培养48 h后,用原位末端标记法(TUNEL)测定其细胞凋亡率;培养24h后,用RT-PCR法检测bcl-2、bax基因的表达.结果各染铝组大鼠皮层神经元凋亡率明显升高,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05),并具有明显的剂量-反应关系;bcl-2基因表达明显下降,bax基因表达明显升高,bcl-2/bax逐渐下降,与对照组相比,差异有显著性,也具有明显的剂量-反应关系.相关分析表明,大鼠皮层神经元凋亡率与bcl-2基因表达呈负相关,与bax基因表达呈正相关,而与bcl-2/bax呈负相关(P＜0.01).结论铝可以诱导大鼠皮层神经元凋亡,其机制可能与bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调以及bcl-2/bax下降有关.     

佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞模型建立及特征分析

目的建立佐剂型关节炎大鼠滑膜成纤维细胞(AAFLS)原代培养方法及其特性分析,探讨AA-FLS作为RA体外研究细胞模型的可行性。方法采用热杀死结核分枝杆菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,建立佐剂型关节炎大鼠模型,取大鼠双侧膝关节滑膜组织进行原代细胞培养,显微镜下观察细胞形态;免疫细胞化学方法鉴定细胞;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法测定细胞上清中TNF-α和IL-1β水平;Hochest 33258法检测细胞凋亡状态;Western bolt方法检测AA FLS细胞线粒体凋亡通路重要调控蛋白Bcl-2和Bax及Pro-caspase-3和Cleave-caspase-3水平的表达。结果胶原酶法分离获得的滑膜成纤维细胞经传代纯化,呈梭形的细胞占0.95以上,免疫细胞化学鉴定显示滑膜成纤维细胞vimentin表达呈阳性,CD68表达为阴性;AA模型大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性较正常大鼠滑膜成纤维细胞增殖活性明显提高,细胞凋亡率降低;在培养的细胞上清中TNF-α和IL-1β水平明显升高;线粒体凋亡通路调控蛋白Bcl-2水平明显升高,而Bax蛋白表达水平明显降低,同时AA-FLS细胞中pro-caspase-3表达量增加。结论 AA-FLS具有增殖活跃、凋亡抑制和分泌高水平促炎性细胞因子的生物特性,可作为体外筛选抗RA药物的细胞模型。     

羟基喜树碱对甲状腺相关眼病球后成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的观察羟基喜树碱对体外培养的球后成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法甲状腺相关眼病患者球后成纤维细胞体外培养。免疫组织化学染色检测波形蛋白在球后成纤维细胞中的表达。将不同浓度的HCPT(1、5、10、50、100mg/L组)作用于球后成纤维细胞48h,用MTT法检测各组药物对细胞增生的抑制率。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。提取细胞内总蛋白、采用Western blotting法检测活化型caspase-3和caspase-3、bax和bcl-2、p-JNK和JNK、p-AKT和Akt在HCPT中的表达。结果 MTT法显示不同浓度的HCPT(1、5、10、50、100mg/L组)能降低成纤维细胞细胞的A值(P<0.05),细胞生长抑制率随药物浓度的增加而增加。流式细胞仪检测凋亡率随着浓度的增加而增高;Western blotting法检测结果证明,活化型caspase-3、bax、p-JNK表达的灰度值明显增加,差异均有统计学意义。结论羟基喜树碱能诱导体外培养球后成纤维细胞,其作用呈剂量依赖性。     

灵芪胶囊体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察灵芪胶囊(LQC)体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响。方法:体外人肺腺癌A549细胞经LQC含药血清处理后,采用MTT比色法测定其抑制率;逆转录-聚合酶链反应检测其凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA表达;Wright-Giemsa染色法观察其形态变化。结果:不同浓度LQC含药血清对A549细胞增殖具有抑制作用,且与浓度呈正相关;LQC含药血清能使bcl-2基因的mRNA表达水平显著下降、bax基因的mRNA表达水平显著增强;同时,细胞形态发生改变。结论:LQC含药血清可调控肿瘤细胞凋亡的相关基因,这可能是其产生抗肿瘤生物学效应的基础之一。     

阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

基于caspase-3/bcl-2/bax信号通路的槐定碱诱导胰腺癌细胞株capan-1凋亡机制研究

目的 探讨槐定碱对人胰腺癌细胞株capan-1作用及机制。方法 MTT法检测细胞增殖;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡;流式检测细胞凋亡和细胞周期百分率;Western blot法检测caspase-3/bcl-2/bax表达。结果 槐定碱可以成浓度依赖性诱导capan-1细胞增殖抑制和凋亡,增加S/G2期细胞比例,下调bcl-2和pro-caspase-3表达水平,上调bax蛋白的表达。结论 槐定碱能通过调节caspase-3/bcl-2/bax信号通路而诱导细胞凋亡。     

大黄素诱导白血病U937细胞凋亡及机制初探

目的研究中药大黄素(Emodin)对人髓系白血病细胞株U937细胞增殖及凋亡的影响,探讨bcl-2/bax比值变化和procaspase-3(CPP32)的激活在其中的作用。方法MTT法绘制细胞生长曲线;克隆形成试验观察大黄素对U937细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测、DNA倍体分析及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡;PCR及检测大黄素作用前后bcl-2/bax基因及蛋白表达的变化;流式细胞术测定大黄素作用前后caspase-3活性变化及检测CPP32的蛋白表达的变化。结果大黄素能抑制U937细胞增殖,作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为30μmol·L-1;线粒体膜电位、亚G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的检出证实大黄素能诱导U937细胞凋亡,并呈量效关系。大黄素作用后G0/G1期细胞比例较对照组增高,S期比例下降,且与药物浓度呈正相关。大黄素作用后U937细胞bcl-2/bax基因及蛋白的表达水平比值下降,被激活的caspase-3阳性细胞增多,CPP32蛋白表达水平下降,并呈时效关系。结论大黄素能通过诱导凋亡来抑制U937细胞增殖,bcl-2/bax比值的降低及CPP32的活化可能参与了大黄素抑制U937细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法：应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR（QRT-PCR1）检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果：高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中。诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降．致使bcl-2／bax比率明显降低；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病。其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤保护作用比较研究

目的：比较甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤的保护作用。方法：采用细胞株培养的方法,建立PC12细胞H2O2损伤模型,通过MTT法和流式细胞分析仪检测细胞存活率和凋亡率;采用免疫细胞化学染色法检测PC12细胞bcl-2和bax表达。结果：PC12细胞经H2O2损伤后,细胞存活率降低、凋亡率增加,甘西鼠尾草注射液与丹参注射液处理组均可有效缓解上述改变（P〈0.05）;两药均使bcl-2表达增加（P〈0.05）,bax表达减少（P〈0.05）。结论：甘西鼠尾草注射液与丹参注射液对PC12细胞H2O2损伤具有明显保护作用。其机理可能与增强凋亡抑制因子bcl-2表达、抑制凋亡促进因子bax表达,进而抑制细胞凋亡有关。     

汉黄芩苷体外抗结肠癌作用及机制研究

目的研究汉黄芩苷对结肠癌细胞和肾小球系膜细胞增殖的影响,并探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法体外培养的结肠癌细胞和肾小球系膜细胞经不同浓度的汉黄芩苷处理后,MTT法检测细胞的存活率,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞的形态学变化,流式细胞仪术检测LoVo细胞的凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测LoVo细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达情况。结果 MTT检测结果显示,汉黄芩苷对体外培养的结肠癌细胞(CT-26,LoVo,Caco-2)的增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量-效应关系,而对正常肾小球系膜细胞的毒性较小;明场和荧光图像显示汉黄芩苷作用后LoVo细胞出现明显的凋亡特征;流式细胞仪分析显示汉黄芩苷可以诱导LoVo细胞发生凋亡;RT-PCR检测结果显示汉黄芩苷可抑制LoVo细胞中bcl-2 mRNA的表达,促进bax mRNA的表达。结论汉黄芩苷可以显著抑制结肠癌细胞的增殖并诱导其凋亡,而对正常细胞影响较小,其机制可能与抗凋亡基因bcl-2表达下调,促凋亡基因bax表达上调有关。     

补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织bcl-2、bax表达的影响

目的：观察补气活血方对慢性支气管炎肺气虚证大鼠肺组织 bcl-2及 bax表达的影响。方法 SD大鼠50只,随机选取10只作为空白对照组,其余40只采用改良烟熏法复制慢性支气管炎肺气虚证大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组,每组10只。采用免疫组化法检测细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2、bax的表达情况。结果与空白对照组比较,模型组大鼠 bcl-2表达明显增加,bax表达降低（ P 〈0.01）;与模型组比较,补气活血方高剂量组、补气活血方低剂量组、补肺汤组 bcl-2蛋白表达降低,bax 蛋白表达增加（ P〈0.01）;补气活血方高剂量组 bcl-2的表达较低剂量组和补肺汤组明显减少,bax的表达较低剂量组和补肺汤组明显增多（P〈0.01）;补气活血方低剂量组 bcl-2表达低于补肺汤组,bax表达高于补肺汤组（P 〈0.05）。结论补气活血方能够通过抑制细胞凋亡相关基因蛋白 bcl-2的表达,上调蛋白 bax的表达,促进炎性细胞凋亡,可作为预防和治疗慢性支气管炎的有效方法。     

蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的作用及其相关机制研究

目的观察蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用,探讨其诱导凋亡的机制。方法采用体外细胞培养方法,以不同浓度蓝萼甲素作用于HeLa细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的存活率;透射电镜观察细胞的形态学变化;流式细胞仪(AnnexinV-FITC)检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达情况。结果与对照组相比,蓝萼甲素对HeLa细胞有增殖抑制作用,呈剂量、时间依赖趋势;Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达上调,Caspase-3、Caspase-9蛋白表达上调。结论蓝萼甲素对宫颈癌HeLa细胞有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其分子机制可能与线粒体信号通路有关。     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞bax、bcl-2基因表达的影响

目的 研究番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响。方法不同浓度番茄红素分别处理HeLa细胞24～72h后，MTT法检测细胞的生长活性，RT-PCR方法检测凋亡相关基因bax，bcl-2的表达。结果实验结果随着番茄红素浓度的增加，bax基因mRNA表达增加而bcl-2的mRNA表达减少。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用，可促进宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，bcl-2基因的减少与bax基因表达增加可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

山奈酚对人小细胞肺癌H446的增殖抑制和诱导凋亡作用的影响

目的 探讨山奈酚对人小细胞肺癌H446细胞生长的抑制作用和诱导凋亡作用.方法 采用MTT 法检测生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western Blotting技术检测凋亡相关蛋白.结果 不同浓度的山奈酚能抑制人小细胞肺癌H446细胞生长,且随浓度增加抑制作用增强(P<0.01).流式结果 显示不同浓度山奈酚组...     

鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡及其机制的研究

目的研究鹅掌楸碱银配合物(AgLA2)体外诱导肺癌SPC-A-1细胞凋亡作用及其机制。方法采用MTT法,观察鹅掌楸碱银配合物对肺癌SPC-A-1细胞增殖的抑制作用,采用DNA ladder检测、细胞形态学观察、酶联免疫法进行凋亡检测;采用RT-PCR检测细胞bcl-2、bax mRNA表达水平,免疫细胞化学法考察细胞bcl-2、bax蛋白的改变。结果鹅掌楸碱银配合物对肺癌SPC-A-1细胞的IC50为3.447±0.436mg·mL-1。在鹅掌楸碱银配合物的作用下,可见典型的核染色质凝集、碎裂等细胞凋亡的特征;药物作用后细胞中Caspase-3含量明显高于对照组;用药组细胞较对照细胞bcl-2mRNA、蛋白表达降低,同时bax mRNA、蛋白表达升高。结论鹅掌楸碱银配合物可抑制肺癌SPC-A-1细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能是改变bax/bcl-2的比值,改变凋亡的调定点,使得凋亡力量在细胞内占主导优势。     

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法：用浓度为5ug·ml-1的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果：紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论：紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

黄芪多糖对人肺癌A549 细胞增殖的作用及其机制的实验研究

目的探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对人肺癌A549细胞增殖的作用及其机制。方法用不同浓度的APS（25μg.mL-1、50μg.mL-1、10μg.mL-1、200μg.mL-1、400μg.mL-1）作用于人肺癌A549细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学法检测bcl-2和bax的表达。结果 APS的浓度在25μg.mL-1～400μg.mL-1范围内均可抑制人肺癌A549细胞的增殖,100μg.mL-1的APS对A549细胞增殖的抑制率达最高,100μg.mL-1的APS作用于人肺癌A549细胞48和72小时后,均可下调bcl-2和上调bax的表达。结论 APS能够可抑制人肺癌A549细胞的增殖,可能与其下调bcl-2和上调bax的表达有关。