RNA 干扰技术及其在子宫内膜容受性研究中的运用

基因沉默（gene silencing）是指生物体内的特定基因由于种种原因不表达或者表达量极低,是真核细胞调节基因表达的重要手段。RNA 干扰（RNA interference,RNAi）是基因沉默技术的重要组成部分,现已成为在基因功能研究、基因表达调控、基因治疗等方面诱导下调、抑制特异性的基因表达不可或缺的工具。在探索子宫内膜容受性生物标记物的相关研究中,RNA 干扰对基因功能的定位也具有重要作用。本文概述 RNA 干扰技术的发展、作用机制及其方法学的研究进展,以及在子宫内膜容受性研究中运用基因沉默技术取得的研究进展。     

RNA干扰在肝病治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程[1].RNAi最主要的功能特色在于它可调节和关闭基因的表达,促使mRNA降解或阻止蛋白产物合成,进而调控细胞的各种高级生命活动,其抑制基因表达作用具有高效性和特异性[2].RNAi作为一种快捷方便的工具广泛用于高通量的研究基因功能、基因敲除、基因治疗和基因表达调控领域的研究.现对RNAi在肝病治疗中的最新进展作一综述.     

RNA干扰技术在德国小蠊功能基因研究中的应用

德国小蠊是我国蜚蠊的优势种,在医学与经济方面的重要性和危害性,以及作为多种科学问题的重要研究模型决定了其在生物科学研究领域的重要地位,而在后基因组时代对功能基因的研究成为生物学研究的基础。RNA干扰是外源性或内源性双链RNA诱发的在mRNA水平上进行的基因沉默现象,从而阻止某一基因功能在细胞或整体水平上的表达,具有高效性和特异性等优势。鉴于蜚蠊重要研究价值与RNA干扰表现出的技术优势,该文简要介绍RNA干扰技术分子机制,重点对德国小蠊功能基因的最新研究结果进行综述。     

RNA干扰的基础研究和临床应用前景

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程.在哺乳动物中发现的21-23核苷酸的双链RNA(小干扰RNA)开启了siRNA的治疗应用可能.目前RNA干扰对于病毒感染、癌症和基因病等表现出广阔的应用前景.就RNA干扰的作用机制、临床应用及应用中存在的障碍等方面综述该领域的研究进展.     

小干扰RNA治疗丙型肝炎的研究进展

丙型肝炎是由HCV感染引起的严重危害人类健康的传染性疾病,至今尚无特效的防治方法.小干扰RNA(siRNA)作为一种新型基因治疗分子,在RNA干扰(RNAi)抗病毒的研究背景下,也逐渐应用于抑制HCV感染.目前,在研究siRNA对病毒自身基因组的抑制、对宿主相关基因的沉默、病毒逃逸的应对及与固有免疫的关系等方面,取得了...     

RNA干扰研究进展

RNA干扰技术是近年发展起来的基因阻断技术,该技术应用短双链RNA/短干扰RNA特异性介导转录后基因沉默。它是一种跨越多种种属的古老生物途径,具有很强的保守性。作为一种快速、简便的反向遗传学技术,RNA干扰在后基因组时代功能基因研究和特异性基因治疗中具有重要的应用前景。     

RNA干扰的基础研究和临床应用前景

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。在哺乳动物中发现的21—23核苷酸的双链RNA（小干扰RNA）开肩了siRNA的治疗应用可能。目前RNA干扰对于病毒感染、癌症和基因病等表现出广阔的应用前景。就RNA干扰的作用机制、临床应用及应用中存在的障碍等方面综述该领域的研究进展。     

常压低浓度吸氧与早产儿视网膜病相关性探讨

早产儿视网膜病(retinopathyOfpremature,ROP)是未成熟或低出生体重儿的增殖性视网膜病变,是一种多因素引起的疾病,发病机制目前仍尚未完全明了,需要进一步研究和探讨.邹城市人民医院自2005年1月～2007年12月对早产儿常压低浓度吸氧与早产儿视网膜病发病情况进行了前瞻性研究,以期探讨常压低浓度吸氧与早产儿视网膜病的相关性,指导早产儿合理用氧,减少ROP发病率.现报道如下.     

RNA干扰技术及其在环境基因交互作用研究中的应用

自RNA干扰现象发现以来,RNA干扰技术的研究日益深入,随着人类基因组测序的基本完成及一系列组学概念的提出,RNA干扰技术在各个学科和领域的应用日渐广泛,并与其他分子生物学技术相结合,在基因功能研究方面发挥着巨大的作用.尤其是随着此项技术在哺乳动物细胞中应用的深入研究,以及和微阵列技术的结合使用,使其能在哺乳动物中进行高通量的基因功能研究,这就为研究人类生存环境与人类基因交互作用提供了有力的技术支持.本文就此项技术近年来在环境基因交互作用研究中的应用现状、应用中的关键问题以及应用的前景作一简述.     

RNA干扰抗艾滋病病毒感染研究进展

RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是一种古老而保守的生物现象,它由21～23个核苷酸的双链RNA通过碱基互补靶向识别并降解mRNA,导致序列特异的基因沉默。体外证明小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)能对抗HIV-1感染。它主要作用于宿主细胞受体,如CD4或CCR5等相应的mRNA及HIV-1的mRNA,抑制病毒表达,阻抑病毒感染。RNAi有可能成为一种新的防治HIV-1感染的基因治疗方法。     

HIV感染基因治疗新思路

获得性免疫缺陷综合征,即AIDS是由HIV感染引起的一种严重危害人类健康的全球性传染病。目前随着抗病毒疗法的应用,HIV复制得到有效阻断,AIDS成为一种慢性可控的疾病,但该治疗方式无法彻底清除HIV,因此AIDS无法得到根治。随着对HIV感染机制研究的不断深入以及基因治疗技术的迅猛发展,诸如RNA沉默、DNA编辑等基因疗法为根治AIDS提供一种新的思路,上述这些新技术具有抑制或彻底清除宿主体内HIV的可能,且可以避免传统治疗手段带来的不良反应。本研究就这些相关基因治疗在应对HIV感染方面的最新研究进展加以总结和探讨。     

RNAi-基因敲除技术在妇科领域中的应用

RNAi是存在于真核生物体内的一种阻断外源基因表达的自我防御体系。它是由双链RNA介导的使与其互补的具有同源序列的单链RNA进行特异性的降解。随着这几年RNAi研究的不断深入,RNAi的干涉机制逐渐被阐明。该文介绍了RNAi的干涉机制和在妇科肿瘤领域中的应用进展。RNAi技术必将成为妇科肿瘤领域基因功能研究、细胞信号传导以及基因治疗的一种强大的新型工具。     

RNA干扰技术抑制哺乳动物细胞绿色荧光蛋白表达的研究

目的本研究旨在探讨阳离子脂质体的体外转染效率、化学合成双链RNA(dsRNA)诱导RNA干扰(RNAi)的效应强度及其作用特点,为采用RNAi技术开展基因治疗提供实验依据。方法①采用磷酸钙沉淀法构建293T/GFP细胞株。②体外化学合成dsRNA,经由三种不同的阳离子脂质体TransIT-TKO,Oligofectamine reagent,Lipofectamine2000导入293T/GFP细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪测定荧光强度的变化,观察不同阳离子脂质体的体外转染效率。③采用dsRNA-Lipofectamine2000复合物转染293T/GFP细胞。dsRNA分设5个不同的浓度(0.01,0.02,0.04,0.08,0.16μmol/L)转染细胞48h以观察剂量效应关系。dsRNA0.08μmol/L/Lipofectamine20008μl转染细胞,于4个不同的时间点(12h,24h,48h,72h)观察时间效应关系。结果绿色荧光蛋白序列特异性dsRNA(dsRNA-eGFP)经由三种不同的阳离子脂质体导入细胞均可产生RNAi效应,序列非特异性dsRNA(dsRNA-unrelated)无抑制效应。在三种不同的阳离子脂质体中,Lipofectamine2000的转染效率最强,转染48h可将293T/GFP细胞荧光强度降低约80%,与空白载体组比较差异显著,TransIT-TKO组,Oligofectamine reagent组分别降低41.02%、37.45%,与空白载体组比较无显著性差异,而且TransIT-TKO、Oligofectamine的细胞毒性较强。结果还表明dsRNA/Lipo-fectamine2000诱导的RNAi效应具有剂量及时间双重依赖性,dsRNA0.08μmol/L/Lipofectamine20008μl/6孔培养板转染细胞48h的抑制效应最强。结论①体外化学合成的dsRNA可有效诱导哺乳动物细胞出现序列特异性基因沉默效应。②三种不同的阳离子脂质体中Lipofectamine2000的转染效率最强,且细胞毒性轻微。③dsRNA/Lipofectamine2000诱导的RNAi效应具有剂量及时间双重依赖性。     

Moderne Methoden in der Genomforschung und Humangenetik

The enormous progress made by research of the human genome is mainly driven by newly established or improved methods for the analysis of nucleic acids and proteins. Among the methods that have gained a wide-spread use within a comparably short time are fluorescence in situ hybridization (FISH), polymerase chain reaction (PCR) including methods for quantitative PCR, and the use of short interfering RNA (siRNA) molecules aimed at gene silencing. The increasing significance of the analysis of secondary modifications of nucleic acids and proteins (genomic imprinting by DNA methylation, posttranslational protein modification) is reflected by an increasing use of mass spectrometry for the analysis and characterization of these biomolecules. Overall, in the future the research into the human genome and the interpretation of data will further benefit from these and other refined tools.     

Genetic manipulation in nutrition, metabolism, and obesity research

We summarize the current standard methods for overexpressing, inactivating, or manipulating genes, with special focus on nutritional and obesity research. These molecular biology procedures can be carried out with the maintenance of the genetic information to subsequent generations (transgenic technology) or devised to exclusively transfer the genetic material to a given target animal, which cannot be transmitted to the future progeny (gene therapy). On the other hand, the RNA interference (RNAi) approach allows for the creation of new experimental models by transient ablation of gene expression by degrading specific mRNA, which can be applied to assess different biological functions and mechanisms. The combination of these technologies contributes to the study of the function and regulation of different metabolism- and obesity-related genes as well as the identification of new pharmacologic targets for nutritional and therapeutic approaches.