军团菌5SrRNA聚合酶链反应方法的建立及应用

建立5SrRNA基因检测军团菌的多聚酶链反应方法,扩增参考菌株的染色体DNA(L.Pneumophila1～14、L.bozemanni、L.dumoffii、L.longbeachae、L.micdadei、L.jordanis),均可检出104bp的基因片段,敏感性为8.52*10²cfu/ml(平均值);而扩增9株非军团菌均为阴性。对模似血标本的检测,其敏感性可达10³cfu/ml.检测17例血标本,阳性率为58.8%(10/17),与血清学检测和临床诊断治疗结果相符合。结果表明该方法敏感、特异、快速、简便。     

军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应检测技术的建立及应用

为建立军团菌KatB毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法 ,根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌毒力基因KatB的特异引物,采用PCR方法 对2005-2007年天津市中央空调冷却塔分离的嗜肺军团菌、杜氏军团菌、博氏军团菌、长滩军团菌等菌株进行了军团菌毒力基因KaLB的检测.结果 显示,本室分离的16株致病军团菌中有9株嗜肺军团菌和1株杜氏军团菌扩增出了2.7 kb的KatB基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.本研究成功建立了军团菌毒力基因KatB的PCR检测方法 ,为军团菌的毒力研究奠定了基础.     

嗜肺军团菌聚合酶链反应检测方法及其应用研究

根据嗜肺军团菌基因组ＤＮＡ的种特异性ＤＮＡ片段序列，合成一对引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。经琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色结果表明，一条８７０ｂｐ的核苷酸区带为嗜肺军团菌１～１４血清型菌株所共有。ＰＣＲ检测水中军团菌，其敏感性为３５０ｃｆｕ／ｍｌ，而用同位素标记探针、斑点杂交法检测，其敏感性为４３ｃｆｕ／ｍｌ。ＰＣＲ检测人工感染嗜肺军团菌的豚鼠组织标本，阳性率为８３．３％，而细菌分离培养的阳性率仅为２６．６％。在现场调查中，用ＰＣＲ法初步验证了一起由Ｌｐ１０引起的军团菌病爆发。上述结果表明，ＰＣＲ法能快速、敏感、特异性检测嗜肺军团菌感染。     

聚合酶链反应检测军团菌的研究进展

由于军团菌病临床缺乏独特的症状与体征 ,常致漏诊、误诊 ,因此寻找一种特异、敏感、灵敏且快速的方法 ,不仅必要而且必需。分离培养和直接免疫荧光技术 (ＤＦＡ)是检测军团菌最常用方法。但前者耗时 ,操作繁琐 ,且在某些标本中因含干扰物质抑制军团菌的生长 ,培养困难较大 ,不利于军团菌的早期诊断。后者虽具快速特异的特点 ,但操作复杂 ,敏感性低。近几年 ,聚合酶链式反应 (ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)及其相关技术的发展为军团菌的检测提供了快速、敏感的方法。现将其研究进展综述如下。1　常规ＰＣＲ法此…     

军团菌rcp毒力基因的聚合酶链反应检测方法研究

目的 建立军团菌rcp毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌rcp毒力基因的特异引物,采用PCR方法对2005年-2007年天津市中央空调冷却塔分离的16株嗜肺军团菌、杜氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dum)、博氏军团菌(Legionella bozemanii,L.boz)、长滩军团菌(Legionellafeeleii,L.fee)等菌株进行了军团菌毒力基因rcp的检测.结果 3株嗜肺军团菌扩增出了900 bp的rcp基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.结论 本研究建立的军团菌毒力基因rcp的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,适于军团菌毒力基因的深入研究.

Abstract：

Objective To establish a polymerase chain reaction method for the detection of the rcp virulence gene of L. pneumophila. Methods Sixteen strains of Legionella pneumophila, L. dumiffii, L. bozemanii and L. Longbeachae isolated from the cooling towers of the centralized air-conditioning systems in Tianjin form 2005 to 2007 were detected by polymerase chain reaction method using L. pneumophila rcp virulence gene-specific primer according to GenBank published nucleotide sequence. Results The 900 bp rcp genetic fragment was amplified in three strains of L. pneumophila, while others not. Conclusion The rcp virulence gene-based polymerase chain reaction method for the detection of L. pneumophila has been successfully established and is the foundation for the studies of Legionella virulence.     

军团菌聚合酶链反应检测技术的研究

军团病由于缺乏典型的临床体征以及治疗的特殊性 ,其实验室确诊显得尤为重要。但军团菌人工培养条件的苛刻及其生长代谢的缓慢导致临床与环境标本检出率低下 ,从而造成事实上的假阴性漏检 ,对军团病的预防与治疗十分不利。运用聚合酶链反应技术 (ＰＣＲ)的高敏感度、强特异性和快速报告等特点 ,可以克服常规表型检验技术的多种缺憾。我们采用多对引物及多种ＰＣＲ技术〔1〕 在实验室水平上探究了ＰＣＲ技术在军团菌检测上的特点及其应用价值。材料与方法　 ( 1)菌株 :嗜肺军团菌 (Ｌｐ) 1- 11型、米克戴德军团菌 (Ｌ ｍｉｃ)、博杰曼军团菌 …     

套式聚合酶链反应法检测军团菌

应用套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术，建立了扩增嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强因子（ｍｉｐ）基因序列的方法。对１４株标准军团菌和５株标准大肠埃希氏菌等进行检测。结果仅嗜肺军团菌扩增出６４９ｂｐ特异性片段，扩增灵敏度为１００ＣＦＵ／ｍｌ。对１７份人血标本进行检测，表明军团菌ｎｅｓｔ－ｅｄ－ＰＣＲ的敏感性明显高于血清学检测和细菌培养     

16SrRNA基因在新生儿败血症诊断中的应用

目的:应用聚合酶链反应(PCR)检测细菌16SrRNA基因,研究其在新生儿败血症中的应用。方法:抽取临床疑为细菌感染的265例新生儿的静脉血,分别做血培养和细菌16SrRNA的基因检测。于血标本中抽提DNA后用聚合酶链反应(PCR)扩增,将扩增产物电泳后经凝胶成像系统扫描。结果:PCR检测阳性率为6.4%(17/265),明显高于血培养的阳性率〔3.4%(9/265)〕,差异有统计学意义(P0.05)。结论:与血培养相比,检测细菌16SrRNA基因对新生儿败血症诊断的特异性和敏感度更高。     

聚合酶链反应在嗜肺军团菌性肺炎诊断中的应用

目的 探讨聚合酶链反应在嗜肺军团菌肺炎快速诊断中的应用价值.方法 53例呼吸系感染病原不明性肺炎住院患者,采集痰液标本47份,支气管灌洗液标本6份,应用聚合酶链反应检测嗜肺军团菌DNA(LPN-DNA).结果 53例病原不明性肺炎患者检出LPN-DNA阳性5例,总阳性率为9.4%,其中47份痰液标本检出LPN-DNA阳性3例(6.4%),6份支气管洗液标本检出LPN-DNA阳性2例(33.3%).结论 聚合酶链反应检测临床标本中LPN-DNA诊断病原不明性肺炎具有良好的临床实际应用价值.     

应用聚合酶链反应（PCR）快速检测痰中嗜肺军团菌（Lp）

1989年国外研究者首次报道了应用PCR检测Lp。因PCR技术具有简便、快速、敏感和特异的特点,所以人们非常看重这一新的生物学技术在检测军团菌方面的应用。此后,一些研究者应用PCR技术分别检测和鉴定了不同标本中的军团菌。本实验室所做的是应用PCR直接检测痰中的Lp,同时把痰标本做常规培养。现把结果报告如下。     

应用PCR检测环境水体中的嗜肺军团菌

目的　建立检测Mip基因的PCR方法,以检出环境水体中的嗜肺军团菌。　方法　采用Godkey软件设计引物,制备菌种模块,对模拟和环境水样进行处理,然后作PCR扩增及其产物检测。　结果　该方法检测军团菌的灵敏度为5 .8×10 2 cfu/ml,6株标准军团菌均扩增出65 0bp的条带,4株非嗜肺军团菌和4株非军团菌无条带出现;检测71份环境水样,5份阳性,阳性率为7.0 %。　结论　该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法     

应用聚合酶链反应（PCR）检测血清HBV—DNA

用ＰＣＲ技术检测２１３分血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，ＥＬＩＳＡ法检测其血清五项标志（ＨＢＶＭ）。结果表明，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物中其血清ＰＣＲ结果有所不同。１０例健康正常人血清无１例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，２０３例免疫标志各异的血清共检出５４例存在ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

PCR方法从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的实验

[目的]探索快速、可靠的检测脑膜炎奈瑟菌的方法。[方法]以煮沸法裂解细菌获取PCR反应模板,或以基因组DNA纯化试剂盒提取DNA后,用PCR法扩增脑膜炎奈瑟菌crgA基因;对PCR产物进行DNA测序。扩增siaD(C)基因确认C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结果]煮沸法和试剂盒提取DNA法均可从1份标本中PCR扩增crgA基因阳性,PCR产物DNA序列与NCBI GenBankcrgA基因(登录号AF190471)序列一致。PCR扩增siaD(C)基因确认为C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结论]建立的从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的PCR方法,可以更快速、可靠地诊断流脑。     

聚合酶链反应检测HBV—DNA与HBV血清学标志的关系

目的探讨聚合酶链反应检测ＨＢＶ—ＤＮＡ与ＨＢＶ不同血清学标志中的关系。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对２７０例ＨＢＶ不同血清学标志及不同组合进行了ＨＢＶ—ＤＮＡ的检测。结果ＨＢＶ—ＤＮＡ在ＨＢｅＡｇ标志中检出率最高，阳性率为１００％；其次是ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｃ和抗—ＨＢｅ，阳性率分别为６６０％、６５９％和４６２％；在抗—ＨＢｓ标志物中未能检出ＨＢＶ—ＤＮＡ；在ＨＢｓＡｇ滴度为≤５１２、＞５１２和阴性者中阳性率分别为６０６％、７５７％和２１９％；在ＡＬＴ异常和正常者中阳性率分别为６８８％和２９５％。结论ＨＢＶ—ＤＮＡ在ＨＢＶ血清学标志不同组合、不同ＨＢｓＡｇ滴度和不同肝功能中的阳性率有着非常显著性差别。     

聚合酶链反应结合斑点杂交测定乙型肝炎病毒DNA的评价

分别以Ｄｏｔｂｌｏｔ，ＰＣＲ－ＥＢ，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ法测定了１４６例慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。结果显示在ＨＢｅＡｇ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ阳性率（１００％）显著高于ＰＣＲ－ＥＢ（９４．８％），在ＨＢｅＡｂ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ的检出率为５４％，ＰＣＲ－ＥＢ为３８％。两者总检出率分别为８４．２％和７５．３％，统计学处理差异显著。有３例ＰＣＲ－ＥＢ再现生信号，但ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏ     

子宫颈人乳头瘤病毒PCR检测及临床意义的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２３６例正常子宫颈，１０５８例宫颈炎，５６例宫颈癌的分泌物进行人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及１６、１８分型的检测。结果发现正常子宫颈中ＨＰＶ及ＨＰＶ－１６型和１８型的检出率明显低于宫颈炎和宫颈癌（Ｐ＜０．０１），宫颈癌中ＨＰＶ及ＨＰＶ－１６型和１８型的检出率明显高于宫颈炎（Ｐ＜０．０１）。提示ＨＰＶ感染与宫颈炎、宫颈癌的发生有一定的关系     

半套式PCR检测军团菌方法的建立及应用

目的建立检测军团菌的分子生物学方法。方法采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域和嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(mip)基因编码区域进行扩增,同时采用半套式PCR对常规PCR的扩增结果进行确证。结果采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域进行扩增,5种军团菌(包括3种嗜肺军团菌)扩增产物均可见654bp的特异性扩增带,非军团菌菌株PCR结果为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,扩增产物均可见430bp扩增带;同时采用常规PCR对嗜肺军团菌mip基因编码区域进行扩增,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见649bp扩增带,非嗜肺军团菌菌株均为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见399bp扩增带。敏感性为10CFU/ml.并且应用此方法成功检测环境水样中分离的疑似军团菌菌株。结论半套式PCR经济、简便、快速、敏感、特异,为军团菌的早期检测、环境监测、控制暴发流行提供了有效手段。