硒对染尘肺泡巨噬细胞脂质过氧化和抗氧化酶影响的实验研究

目的探讨硒(Se)抗石英尘的细胞毒作用及其机理.方法采用体外细胞培养法,观察在不同浓度硒作用下,染石英尘的肺泡巨噬细胞(AM)膜脂质过氧化物丙二醛(MDA)生成量和AM内抗氧化酶-超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果在体外染石英尘中加入硒有效抑制AM膜丙二醛生成量,其中以1.0×10-4mo/L硒作用最为明显,并可提高AM内超氧化物歧化酶活性,且有一定的剂量反应关系.结论硒具有抗石英尘对肺泡巨噬细胞脂质过氧化的作用.     

烟草尘对豚鼠肺巨噬细胞毒性的体外研究

作者用比色、组化、电镜等方法观察了不同剂量的纯烟草尘对体外培养的豚鼠AM损伤率、形态及SDH、LDH、酸性磷酸酶含量的影响。结果表明烟草尘25μg/ml组AM无明显改变;50—100μg/ml组AM中SDH逐渐增加,200—800μg/ml组逐渐降低;100μg/ml组培养液中酸性磷酸酶明显增高;200μg/ml组细胞器形态有改度;400—800μg/ml培养液中LDH明显增高,细胞核破碎较明显。各毒性指标均呈剂量反应关系。石英尘上述指标变化更明显,400μg/ml组细胞核大都呈固缩状态。这些结果说明纯烟草尘对豚鼠AM有明显的毒性作用,且呈剂量反应关系毒性明显小于石英尘;毒性作用带宽,损伤部位及线粒体功能均与剂量有关。     

三七多糖抗氧化活性研究

目的:探讨三七多糖的体外抗氧化活性。方法:三七粗多糖经Sevage法纯化后用苯酚—硫酸法测定其含量,并采用还原/抗氧化能力、清除DPPH自由基、OH自由基和ABTS+自由基能力考察三七多糖的抗氧化能力。结果:三七多糖含量为80.49 mg/g;与对照品BHA和茶多酚相比较,还原/抗氧化能力和清除DPPH自由基能力(FRAP=11586.3μmol/g、IC50=0.055 mg/ml)都比茶多酚(FRAP=6507.5μmol/g、IC50=0.143mg/ml)强,但都比BHA(FRAP=1536.5μmol/g、IC50=0.030 mg/ml)弱;清除羟基自由基能力比BHA(IC50=0.028 mg/ml)及茶多酚(IC50=0.002 mg/m L)都强;清除ABTS+自由基能力(IC50=0.018 mg/ml)比BHA(IC50=0.175 mg/ml)强,但比茶多酚(IC50=0.002 mg/ml)弱。结论:三七多糖具有较强的抗氧化能力,为其生物活性的深入研究提供了参考依据。     

矽肺患者血清内纤维粘连蛋白水平的研究

纤维粘连蛋白(Fn)是体内一种重要的结构蛋白和调理素,参与许多疾病的发病过程。本研究在吴县地区,对正常人(28名)、各期矽肺病人(119名)以及接触石英尘5年以上的健康工人(40名)的血清Fn 水平进行了调查研究,结果表明,血清内Fn 平均含量正常人为194.15μg/ml,0—Ⅰ、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期矽肺患者分别为244.4(?)μg/ml、249.99μg/ml、264.60μg/ml、232.52μg/ml,均明显地高于正常人。各期矽肺患者之间无差异。接尘5年以上工人血清内Fn 含量偏高(222μg/ml),但尚与正常人无差异。本研究结果提示测定血清内Fn 浓度有助于矽肺的诊断。     

矽肺患者血清内纤维粘连蛋白水平的研究

纤维粘连蛋白(Fn)是体内一种重要的结构蛋白和调理素,参与许多疾病的发病过程。本研究在吴县地区,对正常人(28名)、各期矽肺病人(119名)以及接触石英尘5年以上的健康工人(40名)的血清Fn水平进行了调查研究,结果表明,血清内Fn平均含量正常人为194.15μg/ml,0-Ⅰ、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期矽肺患者分别为244.43μg/ml、249.99μg/ml、264.60μg/ml、232.5μg/ml,均明显地高于正常人。各期矽肺患者之间无差异。接尘5年以上工人血清内Fn含量偏高(222μg/ml),但尚与正常人无差异。本研究结果提示测定血清内Fn浓度有助于矽肺的诊断。     

石英尘对肺泡巨噬细胞膜性质影响的实验研究

采用体外细胞实验方法,观察了石英尘对DPH和ANS标记的肺胞巨噬细胞膜流动性和荧光性质的影响,同时测定了肺泡巨噬细胞活性氧的产生。结果表明,石英尘可以使DPH和ANS标记的肺泡巨噬细胞膜流动性降低,增加ANS标记的肺泡巨噬细胞膜复合物的荧光强度,在200～1000μg石英尘之间呈剂量反应关系,进一步分析其原因,表明石英尘通过增加ANS在肺泡巨噬细胞膜上的结合量而使其荧光强度增加。肺泡巨噬细胞在石英尘作用下活性氧增加,可能与肺泡巨噬细胞膜性质的改变和活性氧对细胞膜结构的影响有关。     

葡萄糖酸锌、MnCl2对SiO2致肺泡巨噬细胞 NO、NOS水平变化的影响

[目的]观察葡萄糖酸锌(ZnG)、氯化锰(MnCl2)及其联合作用对二氧化硅(SiO2)致肺泡巨噬细胞(AM)一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)水平变化的影响,寻找两者的最佳剂量组合.[方法]采用大鼠肺灌洗法纯化获得1×106/ml AM后按设计分为①生理盐水对照组;②SiO2组含SiO2 200μg/ml;③SiO2+ZnG组内含SiO2200μg/ml外,ZnG分别为1.0、1.5、2.25μg/ml;④SiO2+MnCl2组内含SiO2 200μg/ml外,MnCl2分别为0.25、0.5、1.0μg/ml;⑤ZnG、MnCl2联合作用组每组内含SiO2 200μg/ml外,ZnG和MnCl2各按上述3种剂量,采用两因素三水平正交设计,共设9个剂量组.37℃,5%CO2培养箱培养18 h后,检测细胞内NO含量、NOS活性.[结果]与SiO2组比,ZnG、MnCl2可以显著降低肺泡巨噬细胞NO水平及NOS的活性(P＜0.01);ZnG和MnCl2的交互作用具有统计学意义,1.5μg/ml的ZnG与0.25μg/ml的MnCl2联合作用效果最好,NO、NOS水平分别降为(1.440±0.070)μmol/L、(0.761±0.101)U/ml.[结论]Zn、Mn及两者联合作用在体外可有效降低SiO2粉尘致AM的NO、NOS水平,为Zn、Mn应用于矽肺的防治提供了实验依据.     

黄芩苷联合万古霉素对金黄色葡萄球菌生物膜的体外影响

目的通过建立体外金黄色葡萄球菌(SAU)生物膜(BF)模型,研究黄芩活性成分-黄芩苷(BC)对BF的影响及其与万古霉素(VAN)的协同杀菌效果。方法选取临床分离并且能够稳定形成BF的SAU 17564,采用TSB-G系统,复制体外BF模型,试管二倍稀释法测定药物的最低抑菌浓度,连续稀释法进行活菌计数,激光共聚焦显微镜(CLSM)结合BF定量软件COMSTAT对BF结构进行分析。结果建模3d,BF经256μg/ml BC组、4μg/ml VAN组作用后BF内活菌数分别为(7.91±0.21)、(7.95±0.19)log10 CFU/ml,与空白对照组相比差异无统计学意义;256μg/ml BC+4μg/ml VAN组的活菌数为(7.56±0.28)log10 CFU/ml,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);建模7d,BF经4μg/ml VAN组、512μg/ml BC组、256μg/ml BC组、128μg/ml BC组及128μg/ml BC+4μg/ml VAN组作用后,BF内活菌数分别为(8.12±0.18)、(8.12±0.10)、(8.11±0.11)、(8.22±0.12)、(8.21±0.16)log10 CFU/ml,与空白对照组相比差异无统计学意义;512μg/ml BC+4μg/mlVAN组、256μg/ml BC+4μg/mlVAN组活菌数分别为(7.47±0.16)、(7.52±0.17)log10 CFU/ml,与空白对照组相比P<0.05;建模3d或7d的BF经CLSM观察及COMSTAT分析,256μg/ml BC+4μg/ml VAN组的生物量均比空白对照组、256μg/ml BC组及4μg/mlVAN组明显减少(P<0.05)。结论黄芩苷能破坏SAU已形成的3d及7dBF,增强VAN对BF内SAU的清除作用。     

大气污染物对肺泡巨噬细胞的影响

自Myrik 1961年首创肺灌洗技术收集肺泡巨噬细胞(AM)以来,许多学者利用AM体外培养研究大气污染,为探求大气污染的生物学检测方法和某些职业病的发病机理提供了大量的实验依据。一、大气污染对AM存活率、附壁、运动能力的影响石英对AM有明显的杀伤作用。根据台盼蓝排斥试验,有人发现AM在石英含量100μg/ml条件下培养20小时,存活的细胞仅相     

纳米硫化镉对人肾小球系膜细胞的氧化损伤研究

目的探讨人工合成纳米硫化镉对人肾小球系膜细胞(HMC)的损伤及可能的作用机制。方法采用不同浓度(0~80μg/ml)的纳米硫化镉对HMC细胞进行24 h染毒,采用MTT法检测纳米硫化镉对HMC细胞增殖的抑制作用,并选择0、10、20、30和40μg/ml纳米硫化镉剂量作用于HMC细胞,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物还原酶(GSH-Px)活力、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,HMC细胞的存活率随着纳米硫化镉浓度的增加而下降(P0.05);纳米硫化镉染毒24 h后,40μg/ml组HMC细胞内的SOD及GSH-Px活力减弱(P0.05),GSH含量减少(P0.05),而MDA含量增加(P0.05)。结论抗氧化系统的损伤可能是纳米硫化镉引起HMC细胞毒性的机制之一。     

桦木酸对巨噬细胞免疫功能和抗氧化作用的研究

目的为了研究桦木酸对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能和抗氧化作用的影响。方法从白桦树的树皮中提取与合成桦木酸,采用体外培养方法,测定了桦木酸对巨噬细胞能量代谢水平、吞噬能力、胞外一氧化氮(NO)释放量、肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌量与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及胞内超氧化物歧化酶(SOD)与溶菌酶(LSZ)活性的影响。结果桦木酸在2.5～10μg/ml浓度范围内,能够显著性地(P0.05)促进小鼠腹腔巨噬细胞增殖,5～20μg/ml桦木酸能促进巨噬细胞吞噬中性红的能力(P0.05);桦木酸在1.25～10μg/ml浓度范围内,能增强胞外NO的释放量与GSH-Px活性以及胞内SOD与LSZ的活性(P0.05),以1.25μg/ml桦木酸作用最强(P0.01),桦木酸在1.25～20μg/ml浓度范围内,能显著地提高TNF-α的分泌量。结论桦木酸能激活小鼠腹腔巨噬细胞,提高其吞噬能力和能量代谢水平,增强抗氧化能力,提高机体的免疫力。     

维生素E琥珀酸脂对顺铂致人胚肾细胞毒性的保护作用

目的研究维生素E琥珀酸脂(Vitamin E succinate,VES)对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)所致人胚肾293(HEK293)细胞毒性的保护作用。方法体外培养人胚肾293细胞(HEK293),设空白对照组、VES(20μg/ml)对照组、CDDP(25μg/ml)单独染毒组以及低剂量CDDP(25μg/ml)+VES(5μg/ml)联合处理组、中剂量CDDP(25μg/ml)+VES(10μg/ml)联合处理组、高剂量CDDP(25μg/ml)+VES(20μg/ml)联合处理组,染毒12 h。采用MTT法观察细胞增殖效应,测定细胞还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活力,采用荧光法检测DNA链间的交联情况。结果与CDDP单独染毒组比较,各剂量CDDP+VES联合处理组HEK293细胞的存活率均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。VES能明显抑制CDDP所致HEK293细胞MDA含量和细胞培养液中LDH活力的升高,并能提高细胞GSH的含量(P<0.05,P<0.01)。高剂量CDDP+VES联合处理组HEK293细胞的交联率低于CDDP单独染毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VES能抑制CDDP所致HEK293细胞的细胞毒性,其机制可能与VES的抗氧化作用和对DNA损伤的防护作用有关。     

维生素对肺泡巨噬细胞NOS活性的影响

目的 研究维生素E(VE)和维生素C(VC)拮抗石英粉尘细胞毒的作用及机制。方法 采用体外细胞培养法测定在不同浓度的VE和VC的共同作用下，体外染石英尘肺泡巨噬细胞(AM)的存活率和细胞活力，同时观察细胞内一氧化氮和活性氧的产生以及一氧化氮合酶活性的变化。结果在体外染石英尘肺泡巨噬细胞中加入不同浓度的VE和VC后可提高该细胞的存活率，降低NOS的活性，减少NO和活性氧的产生，尤以100μmol／LVE和100μmol／LVC作用组效果最为明显。结论 VE和VC具有拮抗石英尘对肺泡巨噬细胞的细胞毒作用，具有保护AM的作用。     

茶多酚对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨茶多酚(teapolyphenols,TP)对氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)凋亡的抑制作用及其机制。方法:实验分为四组:TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)+TP(25μg/ml)组、ox-LDL(200μg/ml)组、对照组(等体积溶剂)。采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活性、吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Westernblotting分析Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达。结果:ox-LDL可明显抑制HUVEC细胞增殖,TP与ox-LDL共同加入后,细胞增殖率明显上升,与ox-LDL组相比差异显著(P<0.05)。ox-LDL可诱导细胞发生凋亡,而TP能减弱其作用。Westernblotting结果:ox-LDL下调HUVEC细胞Bcl-2表达、上调Bax和caspase-3表达,TP与ox-LDL共同加入后,Bcl-2表达升高,Bax和caspase-3表达下降。结论:茶多酚对ox-LDL诱导的HUVEC凋亡具有抑制作用,且与上调Bcl-2蛋白和下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌生物被膜特性的研究

目的 研究含新的mucA突变基因黏液型铜绿假单胞菌(PAE17)在不同条件下形成的生物被膜,以了解新的mucA突变基因对铜绿假单胞菌生物被膜的影响.方法 采用PIA平板法鉴定3种铜绿假单胞菌的黏液表型,色氨酸反应法测定其胞外多糖蛋白复合物的合成量;刚果红染色法和静态培养法分别观察其在固态及液态条件下形成的生物被膜;采用电转化法将绿色荧光蛋白表达质粒(pGFPuv)导入上述3种病原菌中,应用改良平板法建立体外生物被膜模型,激光共聚焦显微镜观察不同时问点生物被膜的形成.结果 PAE17与PDO300呈现明显的黏液表型,其胞外多糖的产量(101.6 μg/ml、118.3μg/ml)显著高于PAEO1(56.3μg/ml),但无论在固态、液态和改良平板法体外生物被膜模型中,PAE17形成的生物被膜均与PDO300迥异,而表现类似PAEO1.结论 新的mucA突变基因可能存在藻酸盐以外的其他途径调节生物被膜的形成.     

过氯酸铵对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞影响的研究

目的通过探讨过氯酸铵(AP)对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)损伤及对肺成纤维细胞(FB)增殖的影响,研究AP的致肺纤维化作用。方法用AP浓度分别为0.5,1.0,2.0 mg/ml和SiO2浓度为0.1 mg/ml 的培养液培养AM,对照组采用RPMI1640培养液培养,24 h 后收集培养上清液,分别检测AM内MDA含量、GSH-Px活力以及上清液中LDH活力。并用AM上清液培养FB,检测FB增殖活力和FB内羟脯氨酸含量.结果 1.0,2.0 mg/ml AP组及SiO2组MDA含量(2.21,2.58,2.32 nmol/ml)均比对照组(1.97 nmol/ml)增加,差异有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 2.0 mg/ml AP组及SiO2组GSH-Px活力(29.47,30.79 U/106 AM)比对照组(26.70 U/106 AM)明显增强,差异有显著或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01); 0.5,1.0,2.0 mg/ml AP组和SiO2组LDH活力(151.03,252.31,446.50,583.88U/106 AM)均明显高于对照组(77.06U/106 AM,P＜0.05或P＜0.01), 且随AP染毒剂量的增加而升高。SiO2组AM上清液使FB羟脯氨酸含量(0.900 μg/ml)及增殖活力(0.165)明显高于对照组(0.379 μg/ml,0.138,P＜0.05或P＜0.01)。结论 AP对肺泡巨噬细胞具有一定的细胞毒作用,而AP染毒的AM上清液未发现有促进FB的增殖和胶原合成的作用。     

某些环境和生产性粉尘颗粒对大鼠背根神经元HVA钙通道的影响

目的分析呼吸系统感觉神经细胞、肺泡巨噬细胞在不同粉尘颗粒作用下HVA钙通道电流的变化,探讨它在粉尘性炎症中可能发挥的作用。方法用呼吸性粉尘采样器采集焦炉逸散物、钢铁厂、城区大气和清洁区大气颗粒物,加上标准石英,共5种粉尘配成浓度为0、5、15、45、135μg/ml的悬液,对大鼠背根神经元(DRG)和肺泡巨噬细胞(AM)体外染尘;运用膜片钳技术记录全细胞高电压激活(HVA)钙通道电流。结果石英组DRG HVA最大激活钙电流(Ica)增大,且随浓度增加而升高,当浓度达到135μg/ml时,Ica为-95.89±38.82 pA/pF,明显高于阴性对照组和低剂量组(P<0.05),存在一定的剂量反应关系(R2=0.99)。焦炉逸散物5μg/ml组和钢铁厂粉尘颗粒135μg/ml组HVA钙电流最大激活斜率明显高于对照组(P<0.05);石英、城区和东湖大气颗粒物对HVA钙电流最大激活斜率的影响不明显。5种尘均能引起V1/2显著增大(P<0.05),向正值方向移动约4~6 mV。本研究未能记录到AM电压依赖性钙电流。结论各粉尘颗粒导致DRG HVA钙通道的电流变化不一,它可能作为信号而引发不同的后续生物效应。     

表皮葡萄球菌生物被膜内细菌对红霉素敏感性的检测

目的为进一步研究表皮葡萄球菌生物被膜的耐药机制提供实验基础,对表皮葡萄球菌浮游菌、膜内重悬浮菌和膜内菌对红霉素的敏感性进行探讨。方法检测表皮葡萄球菌1457和野生株S 68浮游菌在100倍MIC红霉素(分别为25μg/ml和320μg/ml)作用下,浮游菌、生物被膜内菌和膜内重悬浮菌的细菌对数减少值,并在透射电镜下观察膜内细菌的变化。结果表皮葡萄球菌1457在100倍MIC红霉素作用4 h后,浮游菌和重悬浮菌细菌数对数减少值分别为5.56±0.11和5.28±0.08,明显高于膜内菌1.21±0.13(P<0.05),当作用时间延长到60 h,膜内菌细菌数对数减少值为1.51±0.1;细菌形成生物被膜后重新悬浮的细菌对抗菌药物的敏感性与浮游菌相似(P>0.05);S68的细菌数对数减少趋势与1457类似;透射电镜结果显示,红霉素作用前被膜内细菌呈圆形,分布较均匀;红霉素作用12 h后,被膜内细菌含有膨胀、液化的细胞和细胞碎片,细菌排列较对照组疏松。结论膜内菌对红霉素的耐药性较高,生物被膜能保护细菌逃逸抗菌药物的杀菌作用。     

银杏叶提取物对氯化镉损伤人肾近曲小管细胞的保护作用实验研究

目的探讨银杏叶提取物对氯化镉所致人肾近曲小管细胞损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养人肾近曲小管细胞系HK-2细胞,以氯化镉处理细胞建立损伤模型。设对照组(仅细胞)、1个单染镉组(40μmol/L)、3个银杏叶提取物干预组(40μmol/L氯化镉+28μg/ml银杏叶提取物、40μmol/L氯化镉+56μg/ml银杏叶提取物、40μmol/L氯化镉+84μg/ml银杏叶提取物),共同处理HK-2细胞24小时,噻唑蓝比色法(MTT)检测HK-2细胞活力,流式细胞术检测HK-2细胞凋亡,试剂盒检测HK-细胞内活性氧水平、脂质过氧化产物丙二醛含量,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞凋亡相关因子p53、Bax、Bcl-2 mRNA基因表达水平。结果 (1)与对照组相比,氯化镉单独处理组HK-2细胞存活率降低(P0.01),早期凋亡率上升(P0.05),细胞内活性氧、丙二醛含量升高(P0.05),细胞内p53、BaxmRNA基因的表达水平上升(P0.05),细胞内Bcl-2 mRNA基因表达水平下降(P0.05);(2)与氯化镉单独处理组相比,56μg/ml、84μg/ml银杏叶提取物干预组HK-2细胞存活率上升(P0.05),细胞凋亡率下降(P0.05),细胞内活性氧、丙二醛含量降低(P0.05),细胞内p53、Bax基因表达水平下降(P0.05),Bcl-2基因表达水平上升(P0.05)。结论 56μg/ml～84μg/ml银杏叶提取物对氯化镉所致的人肾近曲小管细胞生长抑制、细胞凋亡有保护作用,其保护作用机制与抗氧化应激有关。     

大环内酯类抗菌药物对加替沙星透过细菌生物被膜的影响

目的研究克拉霉素(CLR)和阿奇霉素(AZT)对加替沙星(GAT)透过铜绿假单胞菌生物被膜的影响.方法使用0.22 μm孔径医用微孔滤膜建立了铜绿假单胞菌生物被膜体外模型;采用改良的Franz扩散池,用HPLC方法测定GAT透过细菌生物被膜的情况,并测定64μg/ml CLR和AZT对GAT透过被膜的影响.结果经过7 d的连续培养后,铜绿假单胞菌可在微孔滤膜表面形成均匀、致密的被膜,被膜中多糖蛋白复合物的含量为(57.69±32.97)μg/cm2,被膜中活菌数为(2.15×107)CFU/cm2;经测定,GAT可缓慢地通过细菌生物被膜,约7 h后达到平衡,而合用64μg/m1的CLR或AZT可明显增加第3～6小时期间GAT的透过速度.结论以医用微孔滤膜为载体可成功地建立铜绿假单胞菌生物被膜体外模型;大环内酯类药物,如CAM或AZT可以显著地促进GAT对细菌生物被膜的透过.