广东省食源性副溶血弧菌表型特征与分型比较研究

目的 了解广东省食源性副溶血弧菌的表型特征,并对其分型进行综合比较.方法 对分离自广东省水产品和食物中毒的74株副溶血弧菌分离株进行生化鉴定、药敏试验、耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素(trh)毒力基因的PCR检测.并对副溶血弧菌进行血清分型、核糖体基因分型(Ribotyping)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,应用BioNumerics软件对不同来源、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性.结果 副溶血弧菌除对氯霉素100.00％敏感外,对其余13种抗生素均有不同程度的耐药.tdh阳性率为24.32％、trh阳性率为4.05％.74株副溶血弧菌分为26种血清型,O5:K17和O2:K28型为水产品分离株的优势血清型,O3:K6型为食物中毒分离株的优势血清型.74株副溶血弧菌分为62个核糖体型、67个PFGE型,表现出较大的遗传多样性.结论 广东省大部分食物中毒副溶血弧菌分离株携带tdh毒力基因.3种分型方法中,PFGE的分辨率最高,Ribotyping居中,血清分型最低,3种方法相结合可提高分辨率.     

2008年广东省食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的了解2008年广东省副溶血弧菌食物中毒分离株的血清分型及分子特征。方法对2008年广东省14起副溶血弧菌食物中毒事件中90株分离自病例和9株分离自相关食物的菌株进行血清分型,耐热溶血素基因（tlh）、耐热直接溶血素相关基因（trh）和耐热直接溶血素基因（tdh）PCR检测以及选取优势菌型O3∶K6和O4∶K8血清型进行ER IC-PCR分子分型。结果 90株病例来源菌株以O3∶K6（62.2%）和O4∶K8（14.4%）血清型为主,9株食物来源菌株血清型别多样,无优势菌型,且同时分离到病例及食物来源菌株的4件事件中有3起食物来源菌株的血清型与同一事件中从病例分离到的血清型不同。PCR检测发现,99株副溶血弧菌tlh基因均为阳性,trh基因均为阴性,tdh基因88株阳性,其中食物来源菌株tdh基因阳性率为11.1%（1/9）,病例来源菌株tdh基因阳性率为96.7%（87/90）。选取22株O3∶K6血清型和10株O4∶K8血清型菌株（均分离自病例）进行ER IC-PCR分子分型分析,结果显示,2种血清型菌株可分为8个ER IC型别,且可区分为2类不同的聚类,这2类聚类之间的相似值为54.7%。同1起食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,其ER IC型别表现出多样性;而不同食物中毒事件中分离到的O3∶K6或O4∶K8血清型,部分菌株ER IC型别表现出100%的相似性。结论广东省副溶血弧菌食物中毒分离株血清型多样,同一血清型菌株存在遗传多样性,一群遗传关系密切的trh阴性、tdh阳性的O3∶K6和O4∶K8血清型为副溶血弧菌食物中毒优势菌型。     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

2009年四川省副溶血性弧菌血清型、致病力及分子分型研究

目的 了解四川地区2009年副溶血弧菌食物中毒疫情分离株和监测食品样品分离菌株菌型分布、致病力及分子分型特征,为四川地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用血清玻片凝集试验对2009年从食物中毒疫情和常规监测食品中分离的副溶血孤菌菌株进行血清分型、应用PCR方法进行耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关基因(trh)的检测、小鼠腹腔注射进行致病力实验和进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析等.结果 40株菌分属于5个血清群,疫情分离株分属于O3和O4群,监测分离株主要为O1群占43.75％ (7/16),其中2起疫情分离到多个血清型的菌株;所有菌株trh基因均为阴性,其中20株携带tdh毒力基因,携带tdh毒力基因和不携带tdh、tlh毒力基因的菌株均有致病力.40株菌通过PFGE分型,共得到29个带型,同一疫情分离株具有多个PFGE型别..结论 四川省食品分离株和暴发疫情无太多联系,食品分离株血清型和PFGE型别呈多样性.对于从同一起暴发疫情中检出的不同血清型和不同PFGE型别的副溶血性弧菌需要确认各菌株与暴发的关系.     

珠海地区副溶血性弧菌病原学特征及分子分型分析

目的研究珠海地区副溶血性弧菌血清型、毒力基因以及分子分型的病原学特征,分析流行株的分布情况。方法对珠海市2009年-2014年共81株副溶血性弧菌进行血清型鉴定及基因型耐热溶血素(tdh)、耐热直接相关溶血素(trh)和不耐热溶血素(tlh)检测,并从中选取60株进行多位点序列分析(MLST)。结果共分出35种血清型,其中优势型别为O3∶K6,占整个血清型的20.99%。所有菌株均含有tlh基因,含有tdh基因的有31株菌株,含有trh基因只有2株菌株为阳性。根据Pub MLST网络数据库提供的方法进行比对分析,60株副溶血性弧菌共分为33种ST型别。结论珠海市引起食物中毒的副溶血性弧菌主要为O3∶K6。tlh基因可以作为鉴别副溶血性弧菌的鉴定基因,多数食物中毒事件菌株中携带tdh基因。MLST的优势型别为ST3,为副溶血性弧菌其他型别共同祖先。而食品株血清型和MLST分型均呈多样化、分散趋势。     

深圳市2007--2008年腹泻病副溶血弧菌监测及分子特性分析

目的 了解深圳地区2007年和2008年腹泻病副溶血弧菌感染状况和临床分离株的分子生物学特征.方法 4个哨点监测医院每月至少对80份腹泻病例的粪便样本进行致病菌分离培养.对所分离的361株副溶血弧菌进行血清型分型和两个主要毒力基因tdh和trh的检测.对2007年8月和2008年9月6个疑似腹泻暴发地点的60株O3:K6型副溶血弧菌分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型.结果 4个哨点临测医院共检测4384份标本,分离出361株副溶血弧菌,361株副溶血弧菌分属于28种不同的血清型,其中O3:K6型占67.90%,其次是O4:K8和O1:KUT血清型,所占比例分别为7.50%和6.10%.深圳地区腹泻病副溶血弧菌临床分离株主要是tdh+trh-菌株,361株菌株中有337株是tdh+trh-菌株,11株为tdh-trh-菌株,13株为tdh+trh+菌株.60株副溶血弧菌分型得到20种图谱类型,分别属于3个克隆群.分离自同一个地点的副溶血弧菌菌株具有相同的PFGE图谱,来自不同年份的菌株仅有部分菌株有相同的PFGE图谱.结论 深圳地区腹泻患者的副溶血弧菌分离菌株主要以O3:K6型为主,大部分菌株携带tdh基因,少数携带trh基因.来自6个地点的副溶血弧菌都具有相同的PFGE图谱,说明该地区存在副溶血弧菌腹泻病的暴发.但2007年和2008年菌株的PFGE图谱又不相同,说明副溶血弧菌的来源存在多样性.     

副溶血性弧菌临床分离株血清型、毒力基因和PFGE分子分型特征分析

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血毒素基因(trh);采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE),分析56株O3∶K6型副溶血性弧菌的基因分型特征。结果 (1)168株菌可分为14种血清型,主要血清型为O3∶K6(114,67.9%)、O4∶K8(25,14.9%)、O3∶K29(6,3.6%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株血清型构成不同,但优势血清型均为03∶K6。(2)168株菌可分为4种毒力基因类型,分别为tdh+trh-(161,95.8%)、tdh+trh+(3,1.8%)、tdh-trh+(1,0.6%)、tdh-trh-(3,1.8%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株毒力基因类型构成不同,但优势毒力基因类型均为tdh+trh-。(3)56株O3∶K6型副溶血性弧菌共有15种PFGE带型(P1～P15),相似度>86%,有10个带型分别有多株菌处于同一聚类(P1～P4、P6、P7、P9、P10、P12、P15)。结论副溶血性弧菌临床分离株以tdh+trh-的O3∶K6为主;O3∶K6型副溶血性弧菌临床分离株的PFGE条带型相似性度高,菌株间亲缘关系较近。     

辽宁省腹泻病例中副溶血弧菌表型及基因型特征

目的了解辽宁地区副溶血弧菌腹泻病例分离株的表型及基因型特征。方法对2012—2013年辽宁地区101株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型;采用微量肉汤法,进行16种抗菌药物的药敏试验;通过PCR方法对其进行tlh、tdh和trh毒力基因检测;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对菌株进行基因分型。结果101株副溶血弧菌分属于25种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占37.62%(38/101);对磺胺甲恶唑、链霉素、氨苄西林产生耐药;对环丙沙星、强力霉素、头孢吡肟、甲氧苄啶、亚胺培南、头孢曲松钠等均具有较高敏感性;全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为84.16%(85/101);全部菌株trh基因阴性;O3:K6型菌株tdh基因阳性率100%,明显高于非O3:K6型菌株(76.19%,77/101)(P=0.000 81)。101株副溶血弧菌分成63种型别,38株O3:K6型菌株分成19种型别,带型分散,无明显聚集性。结论辽宁省感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主;毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强;副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性;PFGE结果提示辽宁地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源。     

食物中毒中副溶血性弧菌的毒力基因及同源性分析

目的探讨无锡一起食物中毒事件中副溶血性弧菌分离株的毒力基因、耐药性及分子分型情况。方法对5份食品样品、8份环境涂抹样品、7份患者肛拭子、1份厨师肛拭子分别进行致病菌的分离鉴定、毒力基因检测、血清学分型、药敏试验以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)图谱分析。结果分离自患者肛拭子的6株副溶血性弧菌血清型为O3∶K6型,毒力基因检测跨膜转录激活蛋白基因(tox R)阳性,耐热直接溶血素基因(tdh)阳性,耐热相关溶血素基因(trh)阴性,PFGE分型图谱一致;分离自食品和环境的2株副溶血性弧菌血清型为O4∶K42型,毒力基因检测tox R阳性,tdh阴性,trh阴性,PFGE分型图谱一致;两者之间的同源性50%。8株副溶血性弧菌对临床常用的8种抗生素均敏感。结论该起食物中毒由O3∶K6型副溶血性弧菌感染引起,排除了所采集食品和环境样品被污染作为传染源的可能。     

杭州地区2000-2002年副溶血弧菌的分子分型研究

目的了解杭州地区2000-2002年副溶血弧菌临床和环境分离菌株的分子流行病学特征.方法对172株2000年和2002年从临床食物中毒患者和散发腹泻病例以及外环境（小水产品）中分离的副溶血弧菌菌株进行血清分型.对40株临床来源O3：K6型菌株及环境来源O3：KUT（K抗原未分型）型菌株,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接溶血素相关基因（trh）的检测,并进行核糖体基因分型（ribotyping）、随机扩增多态性DNA分析（RAPD）、肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ERIC-PCR）等.结果在调查的13起副溶血弧菌引起的食物中毒中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型引起的有11起（84.6%）;tdh阳性、trh阴性的O4：K8菌引起有2起（15.4%）.在散发腹泻病例中,tdh阳性、trh阴性的O3：K6、O4：K8和O1：KUT菌株分别占26.5%（9/34）、17.6%（6/34）和38.2%（13/34）,未能分型的占17.6%（6/34）.在水产品中分离的菌株中,37株分属7种O血清型,其中未见有O3：K6和O4：K8血清型;另外有9株未能分型;其中除1株O1：KUT菌株trh阳性外,其余tdh和trh均为阴性.绝大部分食物中毒患者和散发腹泻病例分离的O3：K6菌株在ribotyping、ERIC-PCR及RAPD三种指纹上均属于一种密切相关的克隆群,而环境分离的O3：KUT菌株与临床分离的O3：K6菌株间,在三者指纹上均有明显差异.结论临床来源和小水产品来源的副溶血弧菌菌株间血清型分布有显著差别;一群关系密切、tdh阳性、trh阴性的O3：K6血清型菌株在杭州地区呈优势流行.     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株携带毒力基因的特征

目的　了解杭州地区临床和环境分离副溶血弧菌菌株的毒力基因特征。方法　对近年从食物中毒病人、临床散发病人和外环境 (小水产品 )中分离的 174株副溶血弧菌菌株 ,应用PCR技术进行耐热直接溶血素基因 (tdh)和耐热直接溶血素相关基因 (trh)的检测。结果　临床来源的副溶血弧菌 (94株来自食物中毒病人和 34株来自散发腹泻病人 )菌株的tdh携带率均大于 97% ,trh携带率为 0 % ;而所有 4 6株分离自环境 (小水产品 )的副溶血弧菌菌株未见有tdh携带 ,仅 1株trh阳性。 1株tdh阴性、trh阳性的副溶血菌株 ,其尿素酶试验为阳性 ,而在其他所有trh阴性的副溶血菌株中 ,不管其tdh是阳性或是阴性 ,尿素酶试验均为阴性。结论　引起杭州地区食物中毒及散发腹泻的副溶血弧菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株 ,外环境中存在的trh阳性的副溶血弧菌也是一个潜在的病原     

一起两种血清型副溶血性弧菌食物中毒的毒力基因及分子分型研究

目的:对一起两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究。方法:参照WS271-2007等标准对10名病人的肛拭进行致病菌的检测,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验;运用荧光定量PCR检测分离菌株的毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果:10份样本均检出O4:K8血清型副溶血性弧菌,其中5份样本同时检出O3:K6血清型副溶血性弧菌。两种血清型的副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,相似度在92.9%～100%之间,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆。结论:这是一起由O4:K8和O3:K6两种血清型副溶血性弧菌混合感染引起的食物中毒。     

2011-2014年北京市副溶血性弧菌血清型 及毒力基因特征分析

摘要:目的　了解2011-2014年北京市引起腹泻的副溶血性弧菌血清分型及主要毒力基因特点。方法　对561株副溶血性弧菌进行生化鉴定和血清学分型试验,应用实时荧光PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh。结果　561株副溶血性弧菌有9个O群和23个K型,共34个血清型,以O3∶K6血清型为主,占67.6%（379/561）。2011-2014年血清型分布存在差异。561株副溶血性弧菌tlh、tdh和trh基因阳性率分别为100.0%（561/561）,97.1%（545/561）和1.1%（6/561）。3种毒力基因分成4种类型,tlh+tdh+trh-为优势基因型,占96.4%（541/561）。结论　2011-2014年北京市引起腹泻的副溶血性弧菌有多种血清型,多为产毒株,以携带tlh 和tdh基因的O3∶K6为优势血清型。通过对生化、血清分型和毒力基因检测结果进行综合分析,有助于提高副溶血性弧菌鉴定的正确性。     

三餐次副溶血性弧菌引起食物中毒的溯源分析

目的采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对三餐次副溶血性弧菌引起食物中毒的分离株进行基因分型和溯源,并结合流行病学调查报告分析此次事件的传播途径和感染来源,确定事件的病原学病因。方法对此次事件的分离株进行血清学分离鉴定、耐药分析、PCR检测和PFGE同源性分析。结果三餐次腹泻患者总共分离出18株副溶血性弧菌,全部对头孢唑啉耐药,其中1株为O2抗原群、携带trh毒力基因,其余全为O4抗原群、携带tdh毒力基因,部分分离株PFGE相似度高达100%。结论三餐次同时分离到副溶血性弧菌,餐次内和餐次间分离株通过PFGE分型结果一致,确认是由副溶血性弧菌引起的食物中毒,为食物中毒溯源和科学防控食物中毒发生提供了有力的技术支撑。