广西狂犬病病毒与狂犬病疫苗株N基因序列分析

目的了解广西狂犬病病毒（RABV）街毒株与疫苗株N基因序列的差异,为疫苗使用提供理论依据。方法采用直接免疫荧光法（DFA）和巢式RT—PCR法检测,测定病毒N基因序列全长,同时根据N基因序列同源性及系统进化树比较,分析广西近年流行的RABV与国内外10株疫苗代表株N基因序列之间的差异。结果DFA法阳性率为8．84％（350／3961）,RT—PCR法检测阳性率1．29％（51／3961）,获得N基因全序15份;15份N基因核苷酸与氨基酸序列同源性为89．40％。100％和98．40％~99．80％;广西15份（RABV）与国内外10株疫苗代表株N基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85．70％～99．70％和94．90％～99．80％,与中国CTN疫苗株N基因的核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为89．60％,99．70％和98．40％。99．80％。N基因系统发生树分为两大分支,15份（RABV）与中国人用CTN株构成第一分支,其余的疫苗毒株构成第二分支。结论广西犬间流行的RABV与中国人用CTN疫苗株N基因序列同源性最高、亲缘关系最近,在广西地区使用CTN疫苗株效果可能较好。     

湖南省2006年狂犬病病原学监测

目的 了解湖南省狂犬病病毒的分布及来源,从病原学角度分析该省狂犬病疫情高发的原因.方法 采集湖南省人间狂犬病高、中、低疫区市售家犬脑组织及疑似病例、病犬标本,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR检测狂犬病病毒,RT-PCR阳性标本进行狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列分析. 结果 外观正常犬脑组织狂犬病病毒阳性率为2.78%,23株狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列同源性范围为88.8%～100.0%,表明主要足同义突变,病毒株在省内的分布无明显的地域性.系统发生树揭示狂犬病病毒在湖南省省内及与周边省份(贵州、湖北、广西)和其他省份(江苏、河南)间存在扩散循环传播.疑似病例的唾液、尿液、血液标本均未检出狂犬病病毒,皮肤标本检出1例阳性. 结论 湖南省内普遍存在狂犬病病毒感染犬只,省内与外省的病毒分离株有高度的亲缘关系,此为疫情高发的主要原因.     

广西玉林市2005—2012年狂犬病病原学监测及病毒N基因特征分析

目的分析2005—2012年广西玉林市狂犬病病原学监测结果及病毒N基因遗传变异特征,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2005—2012年在广西玉林市采集犬脑组织及临床诊断人狂犬病病例的唾液进行病原学检测,检测阳性标本进行N基因核苷酸序列测定、同源性比较和种系发生分析。结果共采集、检测外观健康犬脑组织728份、临床诊断人狂犬病病例唾液33份,RT-PCR检测阳性率分别为0.96%(7/728)和51.52%(17/33)。获得5条犬源、6条人源狂犬病病毒株N基因全序列。该11条序列之间的核苷酸同源性为94.7%~100.0%,与广西以往分离株GX01的核苷酸序列的同源性为94.5%~98.4%,与疫苗株CTN株的同源性为94.6%~99.7%。进化树分析显示,犬源株和人源株病毒N基因亲缘进化关系很近,处于同一分支,都属于基因Ⅰ型狂犬病病毒。结论从病原学和病毒分子水平证实玉林市外观健康犬携带狂犬病毒及17例临床诊断病例为确诊病例,其病原为狂犬病病毒基因I型,阳性带毒犬的流动是造成本病传播和扩散的主要因素,也是造成该地区疫情高发的重要原因之一。     

湖南省2007年狂犬病病原学监测

目的 了解湖南省狂犬病病毒的分布及来源,从病原学角度分析该省狂犬病疫情高发的原因.方法 采集湖南省人间狂犬病高、中、低疫区市售家犬脑组织及疑似病例、病犬标本,用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR检测狂犬病病毒,RT-PCR阳性标本进行狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列分析. 结果 外观正常犬脑组织狂犬病病毒阳性率为2.78%,23株狂犬病病毒N基因片段核苷酸序列同源性范围为88.8%～100.0%,表明主要足同义突变,病毒株在省内的分布无明显的地域性.系统发生树揭示狂犬病病毒在湖南省省内及与周边省份(贵州、湖北、广西)和其他省份(江苏、河南)间存在扩散循环传播.疑似病例的唾液、尿液、血液标本均未检出狂犬病病毒,皮肤标本检出1例阳性. 结论 湖南省内普遍存在狂犬病病毒感染犬只,省内与外省的病毒分离株有高度的亲缘关系,此为疫情高发的主要原因.     

湖南省1996-2010年狂犬病流行趋势和防治现状

目的分析1996-2010年湖南省狂犬病的流行趋势及防治现状。方法利用疫情报告资料回顾分析狂犬病的流行趋势;采用直接免疫荧光法（DFA）和巢式PCR等方法对监测标本进行病原学检测及病毒基因特征分析;通过抽样调查了解农村居民对狂犬病防治知识的知晓情况和狂犬病暴露后的处置情况。结果湖南省狂犬病疫情自1996年以来持续上升,于2004年达到高峰,2007年起呈逐步下降的态势;2008-2010年共检测健康犬脑组织标本2 437份,其中DFA初筛阳性72份,阳性率为2.95%;72份标本经巢式PCR复核,23份阳性（0.94%）;巢式PCR检测疑似狂犬病例唾液、脑脊液、血清及尿液标本104份,11份阳性（10.58%）;病毒流行株为基因Ⅰ型;90%以上的农村居民听说过狂犬病,但对于狂犬病的高危行为和暴露后的预防措施的知晓率仅为20.1%和17.3%;89.09%的Ⅲ级暴露者未使用狂犬病被动免疫制剂。结论随着各项防治措施的落实,湖南省的狂犬病疫情已呈下降趋势,居民对狂犬病缺乏科学认识、经济条件有限是导致狂犬病暴露后处置不合规范要求的主要原因。     

湖南省湘潭市2004-2010年狂犬病流行病学研究

目的分析湘潭市狂犬病流行病学特征并探讨狂犬病毒N基因的遗传进化关系,为狂犬病的防控提供科学依据。方法收集2004-2010年湘潭市狂犬病病例资料进行描述性流行病学分析,用巢式RT-PCR法从家犬脑组织标本内获得N基因并进行测序,并构建系统发生树进行遗传特征分析。结果 2004-2010年共报告91例人间狂犬病例,97.80%被犬所伤,平均潜伏期为44.18 d。共采集412份犬脑组织标本,经巢式RT-PCR确证6份标本核酸阳性,感染率为1.46%。测定3株狂犬病毒株的N基因序列,均为基因Ⅰ型,毒株间的核苷酸同源性为97.2%~98.1%,构建系统发生树属于同一组群,其中与湖南省内邵阳、湘西州、外省如贵州、江苏、河南、浙江省等分离的毒株表现出较近的亲缘关系,且与疫苗株CTN株有较近的亲缘关系。结论湘潭市仍然是狂犬病高发区,引起的病毒不是新型病毒,应做好综合防控措施遏制狂犬病疫情的发生。     

云南省保山市人间狂犬病调查及病毒分子生物学特征分析

目的 了解云南省保山市发生2例狂犬病患者的流行病学特点,根据病原分子生物学特征分析可能的传染来源.方法 采用狂犬病个案调查表进行流行病学调查,采集狂犬病死者脑组织标本,用直接免疫荧光试验(DFA)检测狂犬病病毒抗原,用RT-PCR法检测狂犬病病毒核酸,测定狂犬病病毒P、M和N基因全序列并根据其同源性比较及系统进化树进行分子流行病学分析.结果2006年7月保山市隆阳区发生1例人间狂犬病,2007年4月腾冲县发生1例狂犬病.2例患者犬伤暴露程度均为Ⅲ度.2例死亡病例均采集到脑组织(编号为CYN0601H和CYN0701H),经DFA和RT-PCR两种实验室方法检测确诊为狂犬病病毒阳性.CYN0601H和CYN0701H与国内外狂犬病病毒的P、M和N基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分析显示,CYN0601H和CYN0701H与泰国分离株的同源性最高.系统进化分析显示,2株病毒标本亲缘关系很近,同属于狂犬病病毒基因1型,且与泰国病毒株有较近的亲缘关系.结论从病原学和病毒分子水平证实云南省保山市2例患者均为狂犬病,保山市狂犬病病毒流行株可能为境外传人,应加强云南省边境地区狂犬病防制工作.     

内蒙古2009年流感病原监测及甲型H1N1流感血凝素基因分析

目的 探讨2009年流感流行病毒型别及亚型在内蒙古流感样患者中的流行情况及病毒型内血凝素(HA)基因变异情况.方法 采集流感样病例咽拭子标本,用Real-time PCR进行样本的检验,阳性标本进行鸡胚病毒分离培养,选取代表性毒株做病毒血凝素(HA)基因测序分析.结果 Real-time PCR方法共检测到阳性标本419份,其中甲型H1N1流感182份,占阳性样本总数的43.44％.对419份阳性样本全部进行鸡胚分离培养,获得阳性毒株162株,阳性分离率为38.66％.经鉴定甲型H1N1 155株,占阳性毒株的95.68％;甲型H1N1与季节性H3N2混合2株,季节性H3N2 4株,B型毒株1株.对其中3株甲型H1N1毒株进行HA测序后分析发现病毒分离株与参比毒株的HA基因序列具有高度同源性.结论 2009年在内蒙古地区流行的主要是甲型H1N1病毒,兼有其他亚型出现.甲型H1N1流感与当年的流行株无大的变异发生.     

郴州市2009年流感病原学监测及A(H1N1)NA基因特征研究

[目的]了解2009年郴州市流感病毒流行株的病原学特征,为流感防控提供科学依据。[方法]采集哨点医院ILI咽拭子标本,用MDCK细胞进行病毒分离,采用HA和HI试验对流感病毒进行分型鉴定;采集暴发疫情ILI咽拭子用PCR法检测流感病毒核酸;随机抽取4、10月份的季节性A(H1N1)流感毒株进行NA基因测序,测序结果与国内各省市流行株及WHO推荐的北半球疫苗株作同源性比对,绘制种系进化树。[结果]分离哨点医院监测标本2284份,阳性254份:其中季节性A(H1N1)109株、A(H3N2)97株、甲型H1N130株、B型18株;PCR检测3024份标本,甲型H1N1核酸阳性1002份,阳性率33.13%;BLAST比对结果显示,4、10月份的季节性A(H1N1)毒株与2009年WHO推荐的北半球疫苗毒株A/Brisbane/59/2007的核酸同源性分别为99%和98%;种系进化分析结果表明4月份分离株与疫苗株亲缘关系最近,而10月份分离株较4月份分离株已明显发生变异。[结论]2009年郴州市甲型流感病毒异常活跃,其中1～6月季节性A(H1N1)为优势毒株,7～9月A(H3N2)为优势毒株,10～12月甲型H1N1为优势毒株,且出现甲型H1N1流感大流行。季节性A(H1N1)病毒在流行过程中NA基因已经发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测其变异情况。     

广西狂犬病病毒M基因序列分析

目的 探讨广西13株狂犬病病毒M基因遗传变异特征及其与狂犬病在广西流行的关系.方法 用直接免疫荧光法(DFA)检测2006～2008年广西地区收集到的3961份犬脑组织标本,将榆测结果为阳性的脑组织标本进行RT-PCR扩增,双向测序M基因核苷酸序列,进行生物信息学分析.结果 DFA法检测阳性率为8.84%(350/39...     

浙江省慈溪市犬类狂犬病病毒携带状况调查及变异研究

目的研究犬类狂犬病病毒的携带状况及变异,为正确有效控制狂犬病疫情提供依据。方法根据狂犬病疫情分布,用分层采样法,采集相关地区犬脑51只,用免疫荧光法、夹心酶联吸附法、小鼠颅内接种试验法及RT-PCR进行检测。分离狂犬病病毒并进行N基因测序。结果在流浪犬只中发现狂犬病毒株(命名CXs)。流浪犬带毒率7.69%,CXs与疫苗株和固定毒株的NJ进化树比较,发现与WZO(H)株100%同源,与狂犬病毒固定毒株相比更接近CTN株(该地区使用的疫苗株)。结论当前使用的狂犬疫苗用于预防狂犬病是可靠的。经狂犬病流行特征和暴露后免疫预防处理分析,加强犬只的管理、免疫,暴露后采用规范清创,正确使用狂犬疫苗,合理使用狂犬免疫球蛋白(或血清)仍是当前防治狂犬病需遵循的原则。     

鼠类感染淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的RT—PCR检测与N基因序列分析

目的了解宁波市梅山口岸鼠类中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）流行情况和基因序列特征。方法以LCMVN基因设计2对引物,采用RT—PCR方法对2012年宁波市梅山口岸捕获的鼠类样品进行LCMV检测,并对阳性样品的PCR产物进行测序及同源性和系统进化树分析。结果共检测53份鼠类样品,其中2份小家鼠样品为LCMV核酸阳性,分离的2株LCMV与国外LCMV分离株的同源性在75％~87％之间,与WHI株同源性最高（87％）并在系统发生树上属于同一组。结论证实当地鼠类中存在LCMV流行,新检测到的2株病毒与国外LCMV分离株存在一定差异。     

湖南省武岗市洞口县狂犬病流行病学研究

目的分析2003-2004年间在湖南省武岗市与洞口县发生的狂犬病并探讨局部地区流行的因素.方法对狂犬病进行个案调查,用直接免疫荧光法检测犬脑组织中的狂犬病毒抗原,用RT-PCR法扩增N基因片段,测定核苷酸序列并构建系统发生树进行遗传特征分析.结果自1991-2002年武岗市与洞口县仅各报告1例人狂犬病,但2003-2004年间,分别报告30例人狂犬病.62例狂犬病患者中61例被犬所伤,1例被猫所伤.在有完整记录的50例患者中,平均潜伏期为44.18天.其中7例（14%）狂犬病患者的潜伏期≤15天,16例（32%）潜伏期≤20天.在疫点周围采集的99只犬脑组织中,13只犬脑组织狂犬病毒抗原阳性,阳性率为13.13%.将Wg13与Dk13株病毒的部分N基因核苷酸序列与已报道中国病毒株比较,发现2株病毒与广西及安徽的毒株有最高的同源性,构建的系统发生树也分在同一分支.用全N基因核苷酸序列分析发现,Wg13与Dk13毒株全为Ⅰ型狂犬病毒,2株病毒之间的同源性为99.4%以上.比较分析2株病毒N基因编码的氨基酸序列,发现包括第Ⅳ抗原位点区在内的多个氨基酸位点发生了氨基酸的替代.结论引起武岗市与洞口县的狂犬病流行的病毒不是新型狂犬病毒,犬饲养量大与病毒携带率高是狂犬病暴发的直接原因.     

中国狂犬病毒感染分布状况调查

目的 了解中国狂犬病不同流行区狂犬病毒的感染分布情况.方法 采集中国狂犬病高、中、低发病区动物脑组织以及疑似病例标本,利用直接免疫荧光法(DFA)和RT-PCR法检测狂犬病毒感染.结果 DFA法检测3007份犬脑组织标本,狂犬病毒阳性率为8.4%(254/3007),再经RT-PCR法验证,狂犬病毒阳性率为30.7%(78/254).DFA法检测93份伤人犬和猫的脑组织标本,狂犬病毒阳性率为67.7%(63/93),再经RT-PCR检测全部为阳性.此外,调查区域的黑线姬鼠、鼬獾和疑似病例标本中也检测到狂犬病毒.不同省份以及同一省份不同发病地犬狂犬病毒感染率差异无统计学意义.结论 中国狂犬病流行区家养犬(猫)中存在较高的狂犬病毒感染率,野生动物中也有狂犬病毒感染.     

宁波市狂犬病病毒NB0901株核蛋白基因的序列分析

目的通过RT-PCR方法对2009年宁波市狂犬病病毒分离株（NB0901）的N基因扩增并测序,了解宁波地区狂犬病病毒的流行特点。方法运用RT-PCR方法和序列测定方法获得NB0901株的N基因序列,并在核苷酸和氨基酸水平与疫苗株（3aG和CNT-1）进行同源性比较,同时进行遗传进化分析。结果狂犬病病毒NB0901株与疫苗株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别在86.6%～90.1%和95.5%～98.8%之间。NB0901株N蛋白的抗原表位与疫苗株相比后发现在NⅠ和NⅡ抗原表位存在突变。而在Th细胞表位上,NB0901株与CNT-1株完全一致,与3aG株相比变异较大。进化结果表明NB0901株属于狂犬病病毒Ⅰ群中的A亚型。结论狂犬病病毒NB0901株和当前疫苗株虽同属于Ⅰ群,但是与疫苗株相比存在差异,从氨基酸序列水平上分析,CNT-1株较3aG株更能有效保护流行毒株感染。