微囊藻粗毒素染毒大鼠肝脏细胞的凋亡及相关基因的表达

目的研究亚急性微囊藻毒素染毒后,大鼠肝细胞凋亡及Bcl-2和p53基因在肝细胞凋亡过程中的作用,进而探讨微囊藻毒素肝毒性机制.方法将SD大鼠随机分为4组,每组雌雄各10只,经35d腹腔染毒后,剖杀、立即取肝脏,应用原位末端标记法观察亚急性染毒大鼠肝细胞凋亡,ABC免疫组化技术检测Bcl-2和P53蛋白表达.结果发现在4μg*kg-1*d-1剂量下,微囊藻毒素引起肝细胞凋亡与对照组相比无明显改变;但在8μg*kg-1*d-1和12μg*kg-1*d-1的染毒剂量下,微囊藻毒素可明显引起大鼠肝细胞凋亡,凋亡率分别为(2.90±0.81)%和(3.00±0.40)%;剂量12μg*kg-1*d-1时,肝细胞Bcl-2蛋白表达较对照组减弱;各染毒组P53蛋白的表达随着染毒剂量的增高较对照组增强.结论微囊藻粗毒素在较低剂量下主要引起肝细胞凋亡,Bcl-2和p53基因在其引起凋亡的过程中可能起着一定的作用.     

微囊藻毒素对肝细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨微囊藻毒素MC-LR促肝癌过程对Bcl-2和Bax表达的影响。方法采用二阶段致癌理论建立中期试验动物模型,GGT染色检验MC-LR的促癌作用,并以免疫组化法、RT-PCR结合图像分析技术精确测定大鼠肝脏Bcl-2和Bax的蛋白与mRNA表达情况。结果MC-LR在促大鼠肝癌过程中能显著增加γ-谷氨酰转肽酶（GGT）阳性率,GGT染色的阳性率DEN＋纯毒素组为100％显著高于二乙基亚硝胺（DEN）对照组22．22％。MC-LR在促大鼠肝癌过程中能显著增加大鼠肝脏BCL-2蛋白表达强度和面积,Bcl-2表达的强度和面积DEN＋纯毒素组分别为0．0977和0．0315,显著高于强度和面积分别为0．0460和0．0205的DEN对照组。同时显著降低大鼠肝脏Bax蛋白表达强度和面积,Bax蛋白表达的强度和面积DEN＋纯毒素组分别为0．0283和0．0073,显著低于强度和面积分别为0．0655和0．0244的DEN对照组。MC—LR在促大鼠肝癌过程中能显著增加大鼠肝脏Bcl-2mRNA表达强度,DEN＋纯毒素组表达强度为2．244,显著高于其他各组。BaxmRNA表达强度DEN＋纯毒素组虽然比其他各组低,但差别无统计学意义。结论调节与细胞凋亡相关的癌基因和抑癌基因表达可能是MC-LR促癌过程的重要机制之一。     

DNA碱基切除修复基因与化疗敏感性的研究

抗癌药物作用后,肿瘤细胞的DNA损伤修复是耐药性产生的重要机制。目前,碱基切除修复(BER)已被证实与DNA损伤型化疗药物的敏感性有关。鉴于国内这方面的研究较少,且缺乏系统的文献综述,本文重点介绍BER过程的最新研究进展以及BER中的关键基因与化疗敏感性及耐药性之间的关系。     

微囊藻毒素LR对小鼠肝脏和淋巴细胞的损伤效应

[目的]研究不同剂量微囊藻毒素LR（MCLR）经灌胃途径对小鼠肝细胞及外周血淋巴细胞细胞的损伤效应。[方法]生化法测定血清中谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），碱性磷酸酶（AKP），γ-谷氨酸转移酶（γ-GT）和乳酸脱氢酶（LDH）含量，单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）测定外周血淋巴细胞DNA迁移长度。[结果]MCLR在1μg/L浓度下即可引起ALT，LDH的显著升高；在达到100μg/L浓度时可引起ＡＫＰ明显升高；但各剂量组ＡＳＴ，γ－ＧＴ与对照组相比无显著差异；不同剂量ＭＣＬＲ均可引起外周血淋巴细胞ＤＮＡ迁移长度增加，且有剂量－反应关系。［结论］ＭＣＬＲ在１μｇ／Ｌ低浓度下对小鼠肝细胞及外周血淋巴细胞可产生一定损伤作用。     

微囊藻毒素LR对DNA和自然杀伤细胞的损伤效应研究

目的：研究和探讨微囊藻毒素LR（microcystins LR,MCLR)的致癌和促癌机制。方法：用单细胞微量凝胶电泳技术和^3H-TdR释放法研究了MCLR对大鼠DNA及小鼠自然杀伤细胞（NK细胞）的损伤效应。结果：研究表明,不同剂量的MCLR均可引起大鼠淋巴细胞DNA的损伤,其DNA迁移长度与对照组相比差异有高度显性;随着剂量的增加和注射时间的延长对DNA的损伤效应未发生现明显剂量反应关系;且在停止注射后DNA的损伤很快可得到修复。同时体内和体外动物试验还显示,MCLR可降低小鼠NK细胞对YAC－1细胞的杀伤性,与对照组相比其差别有显性,结论：本研究将为进一步从分水平及细胞水平阐明MCLR的促癌、致癌机制提供理论依据。     

氟对大鼠脑细胞DNA的损伤及诱导凋亡的作用

目的　探讨氟对大鼠脑细胞DNA的损伤作用及诱导凋亡的作用。方法　体内试验中 ,对照组大鼠腹腔注射蒸馏水 ,氟组大鼠注射氟化钠 ,染毒剂量为 2 0mg·kg- 1 ·d- 1 ;体外试验中 ,采用 5mmol/L氟化钠对急性分离的大脑神经细胞染毒 2h后用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)研究氟对细胞DNA的损伤 (单链断裂 )。采用TUNEL法和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡。结果　体内试验氟组大鼠大脑皮层神经细胞DNA损伤情况明显比对照组严重 ,Ridit值分别为 0 351和 0 639,体外试验对照组与氟组Ridit值分别为 0 650 1和 0 3844。TUNEL阳性细胞在氟组大鼠大脑皮层、海马及小脑颗粒细胞层均可见到 ,在对照组大鼠则很罕见。流式细胞术检测结果表明大脑皮层及海马神经细胞凋亡百分率氟组 (2 7 1 2± 3 0 8,34 97± 5 46)均高于对照组 (4 63± 0 98,5 35± 0 79) ,差异有极显著性意义。结论　氟化钠可引起大鼠脑细胞DNA损伤和细胞凋亡发生     

醋酸铅对人肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的影响

目的 探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的作用及对超微结构的影响。方法 经5、10、20 μmol/L醋酸铅染毒HK-2细胞24h后,Hochest33342染色法观察细胞形态学变化,透射电子显微镜下观察细胞超微结构的变化,分光光度计检测细胞培养上清中乳酸脱氧酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,DNA Ladder实验检测醋酸铅对HK-2基因组的影响,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 Hochest33342-PI染色显示,染铅组细胞呈凋亡形态学改变。透射电子显微镜下观察发现,染铅组细胞胞质内出现空泡,核同缩,核膜结构模糊,并出现凋亡小体。染铅组细胞培养上清中LDH活力及MDA含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01)。HK-2基因结果显示,染铅组出现较为明显的DNA损伤现象。5、10、20 μmol/L染铅组细胞凋亡率分别为14.16％±2.94％、19.45％±2.73％、25.01％±3.97％,均明显高于对照组(5.81％±2.18％),差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 醋酸铅可促进HK-2细胞凋亡,进而影响肾脏正常功能。     

电磁脉冲对小鼠脾脏淋巴细胞病理变化和凋亡的影响

目的 研究电磁脉冲(electromagnetic pulse,EMP)对小鼠脾脏淋巴细胞病理变化和凋亡的影响.方法 用场强为200 kV/m的EMP,辐照雄性BALB/c小鼠,每天照射400次,连续照射7d,照后1、3、7、14、28d共5个时间点处死小鼠取脾脏,观察其病理改变;处死后称取小鼠的体重和脾脏的重量,计算脾脏指数;然后提取淋巴细胞进行计数;通过流式细胞仪检测淋巴细胞的凋亡和周期;通过transwell实验观察淋巴细胞的趋化能力.结果 照后1d脾脏的组织结构无明显改变;3d后,脾脏血窦扩张,充血明显,脾小体结构不清;脾脏指数呈现波浪状的趋势,在第1、14天,辐照组与对照组无明显差异,在第3、7天,辐照组的脾脏指数高于对照组,第28天辐照组的脾脏指数低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);淋巴细胞数的变化也呈现先增后减的趋势,在第1、14、28天,辐照组与对照组淋巴细胞数量无明显差异,在第3和7天,辐照组淋巴细胞数多于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);辐照组和对照组淋巴细胞凋亡数量和细胞周期的差异均无统计学意义(P＞0.05);辐照组细胞的趋化能力与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脾脏是EMP辐射的靶点之一.脾脏淋巴细胞数量的增加,可能是由于EMP改变了淋巴细胞的趋化迁移能力而导致的.     

细胞凋亡的基因调控及检测方法的研究进展

细胞凋亡研究对现代医学产生了巨大推动作用,并已成为当前生命科学和医学领域的研究热点,因而熟悉细胞凋亡的调控机制和合理选择检测方法显得尤为重要。本文就近年来GraB、eIF4E、ced-13、Survivin等细胞凋亡调控基因和凋亡的检测技术加以综述。     

Genetic variation in base excision repair pathway genes, pesticide exposure, and prostate cancer risk

Background: Previous research indicates increased prostate cancer risk for pesticide applicators and pesticide manufacturing workers. Although underlying mechanisms are unknown, evidence suggests a role of oxidative DNA damage.Objectives: Because base excision repair (BER) is the predominant pathway involved in repairing oxidative damage, we evaluated interactions between 39 pesticides and 394 tag single-nucleotide polymorphisms (SNPs) for 31 BER genes among 776 prostate cancer cases and 1,444 male controls in a nested case–control study of white Agricultural Health Study (AHS) pesticide applicators.Methods: We used likelihood ratio tests from logistic regression models to determine p-values for interactions between three-level pesticide exposure variables (none/low/high) and SNPs (assuming a dominant model), and the false discovery rate (FDR) multiple comparison adjustment approach.Results: The interaction between fonofos and rs1983132 in NEIL3 [nei endonuclease VIII-like 3 (Escherichia coli)], which encodes a glycosylase that can initiate BER, was the most significant overall [interaction p-value (p_interact) = 9.3 × 10^–6; FDR-adjusted p-value = 0.01]. Fonofos exposure was associated with a monotonic increase in prostate cancer risk among men with CT/TT genotypes for rs1983132 [odds ratios (95% confidence intervals) for low and high use compared with no use were 1.65 (0.91, 3.01) and 3.25 (1.78, 5.92), respectively], whereas fonofos was not associated with prostate cancer risk among men with the CC genotype. Carbofuran and S-ethyl dipropylthiocarbamate (EPTC) interacted similarly with rs1983132; however, these interactions did not meet an FDR < 0.2.Conclusions: Our significant finding regarding fonofos is consistent with previous AHS findings of increased prostate cancer risk with fonofos exposure among those with a family history of prostate cancer. Although requiring replication, our findings suggest a role of BER genetic variation in pesticide-associated prostate cancer risk.     

苯作业工人淋巴细胞p53相关基因mRNA表达水平分析

目的 了解苯环境作业工人外周血淋巴细胞中,经p53介导的DNA损伤修复路径相关基因表达水平.方法 选择某喷涂厂直接接苯工人46人(直接接苯组)、间接接苯工人26人(间接接苯组)和无苯及其他毒物接触工人29人(对照组),应用SYBR GreenI嵌合荧光法实时RT-PCR分析技术,检测外周血淋巴细胞p53及相关基因mRNA表达水平,比较对照组与作业组问P53及相关基因mRNA表达倍数差异.结果 直接接苯组和间接接苯组p53、Ku80、Ape1和Mdm-2 mRNA表达水平与对照组比较磋异无统计学意义(P＞0.05);p21有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).直接接苯组的Rad51、Bcl-2、Bax、Xpa和Xpc mRNA表达水平下调、间接接苯组Rad51 mRNA表达下调,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).直接接苯组的白细胞、血红蛋白和血小板分别为(4.93±1.27)×10- /L、(123.97+11.80)g/L和(124.02±41.22)×109 /L,间接接苯组血小板为(135.80±39.44)×109 /L,均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 长期慢性的低浓度苯接触可使工人淋巴细胞中p53介导的部分DNA损伤修复相关基因mRNA表达水平发生改变,直接接苯工人的外周血白细胞、血红蛋白、血小板减低以及Bcl-2、Bax、Xpa和Xpc mRNA表达水平改变明显.     

苯并(a)芘对肺癌细胞DNA损伤及修复基因表达水平的影响

目的 探讨苯并（a）芘（BaP)对肺癌细胞DNA损伤及核酸切除修复（NER）基因－着色性干皮病B、C、G基因（XPB、XPC、XPG）和切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达的影响。方法 以噻唑蓝（MIT）法检测BaP对细胞的毒作用，单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况，逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测基因表达水平。结果 BaP(0.625－20.000μmol/L）处理肺癌A549细胞24h，细胞生存力从95.0%降至70.0%。10μmol/L BaP处理12、24h，细胞生存力分别降至87.0%、73.0%，DNA损伤逐渐加重；BaP染毒24h后孵育12h，细胞生存力降至59.0%，DNA损伤最严重；继续孵育至24h，细胞生存力恢复至71.0%，DNA损伤逐渐修复。BaP处理引起XPB和XPC基因表达升高，在染毒24h和染毒后12h达峰值，分别为基底水平的4.5和11.2倍，随后逐渐下降；XPG和ERCC1基因在染毒期间表达下降，染毒结束后逐渐恢复。结论 BaP导致肺癌A549细胞DNA损伤，细胞在修复受损DNA时伴随NER基因表达水平改变。     

温石棉诱导人支气管上皮细胞错配修复基因表达改变

目的研究温石棉诱导人支气管上皮细胞系的BEAS-2B细胞恶性转化活力及错配修复基因表达的变化。方法以2×10-3μg/m2温石棉纤维染毒BEAS-2B细胞,每10 d染毒24 h,待细胞出现生长抑制后用锚着不依赖性生长实验判断细胞恶性转化,并利用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测温石棉对BEAS-2B染毒12 h、24 h、48 h、60 d等不同染毒阶段的人类错配修复基因hMSH1和hMLH2的mRNA表达的变化。结果细胞染毒60 d后生长加快,接触抑制消失,呈现重叠生长,并可在软琼脂中生长。温石棉染毒24 h和48 h组mRNA表达下调,60 d组表达上调。结论温石棉可导致人支气管上皮细胞BEAS-2B错配修复基因表达发生变化。     

丙烯腈对大鼠神经胶质细胞凋亡、增殖及基因表达的影响

目的 研究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠神经胶质正常细胞(DI TNC1)和大鼠神经胶质肿瘤细胞(C6细胞)的生长、凋亡、增殖及相关基因表达的影响.方法 ACN作用于DI TNC1和C6细胞的浓度是25、50和75μg/ml,对于细胞生长、凋亡和增殖实验,作用时间是24 h;对于微点阵(microarray)试验,作用时间分别是4、24 h.结果 25、50和75μg/ml ACN作用DI TNC1后,DNA合成指数降低,分别为对照的93.1%、81.3%和74.9%,细胞凋亡指数增加,分别为对照的118%、122%和143%;C6细胞的DNA合成指数和凋亡指数在ACN作用后基本没有变化;cyclin和p53等细胞增殖和凋亡相关基因的表达也有一定的变化.结论 ACN抑制了DI TNC1细胞的增殖和促进了其凋亡,对C6细胞的凋亡和增殖没有变化.     

气阴两虚型胃癌前病变凋亡相关基因的表达及中药的影响

目的探讨气阴两虚证型患者凋亡相关基因的表达,观察善胃Ⅲ号治疗气阴两虚型胃癌前病变的疗效,并从细胞凋亡和相关基因的表达方面探讨其作用机理。方法77例患者均经胃镜与病理检查证实为胃癌前病变,随机分成两组,光镜观察治疗前后胃黏膜的增生情况,并采用Tunel法检测细胞凋亡,免疫组化检测fas、fas—L、bcl-2、bax的表达。结果治疗组（善胃Ⅲ号,气阴两虚型）有效率79．31％（29例）,优于对照组（猴头菌片）29．17％（48例）。治疗组细胞凋亡率和fas—L、bax表达率分别从（15．46±11．91）％、46．67％、42．88％升高至（71．43±19．87）％、76．92％、68．42％;而bcl-2表达率从87．50％下降至20．00％。对照组猴头菌片对上述指标无明显作用。结论善胃Ⅲ号能有效治疗气阴两虚型胃癌前病变,明显诱导胃癌前病变胃黏膜细胞凋亡,增强fas—L、box表达而抑制bcl-2表达。     

基因芯片筛选应力性骨折差异表达基因

目的 了解应力性骨折(SF)患者与正常人群相比较的外周血差异表达基因.方法 选取入伍新兵(均为男性),采用1:1配比的病例对照研究,正常对照组与SF组各3例.收集被测试者空腹肘静脉血提取RNA,纯化后进行人表达谱芯片试验.SAM软件分析芯片结果.选取表达差异最显著并有提示意义的差异基因,应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术进行验证.结果 SF组上调基因21条,下调基因1条.表达差异最显著的基因为TNFRSF10C,其验证结果显示,SF组TNFRSF10C的相对表达量与正常对照组相比较,3组上调,1组下调.结论 SF患者与正常人群外周血之间存在基因表达差异,SF的发生发展是一个涉及多种功能基因表达的复杂的生物学过程,为SF的生物力学研究提供了背景资料,并未其早期诊断和筛查提供了重要线索.     

细胞凋亡及相关基因联合检测对胃黏膜癌前病变的诊断及癌变预测的意义

目的探讨细胞凋亡及相关基因的表达在胃黏膜癌变中的作用及对胃癌的预测和早期诊断的意义。方法对胃镜活检确诊为胃癌（胃癌组）及不典型增生（分为轻、中、重度不典型增生组）的标本应用TUNEL法检测细胞凋亡，应用免疫组化法检测p16、bcl-2、raa、c—myc、p53基因的表达。结果p16、bcl-2、ras、c-myc和p53基因表达率在轻、中、重度不典型增生组和胃癌组分别为69．23％，30．77％，38．46％，23．08％，7．69％；50．00％，37．50％，81．25％，43．75％，18．75％：36．36％．63．64％．81．82％．72．73％，45．45％：27．50％，67．50％，95．00％。90．00％，60．00％。轻度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；ras、c—myc和p53基因表达率轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；p53与c—myc基因表达率中度不典型增生组与胃癌组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。p16、bcl-2、ras、c—myc和p53基因表达存在相关性。细胞凋亡指数胃癌组最低，轻、中度不典型增生组与胃癌组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。轻度不典型增生组与重度不典型增生组比较，差异也有统计学意义（P〈0．01）。结论细胞凋亡指数减少及ras、bcl-2、c—myc、p16、p53基因的异常表达在胃黏膜癌变过程中发挥重要作用。中、重度不典型增生为重要的癌前病变。     

毒物代谢酶、DNA修复基因多态与儿童白血病遗传易感性

儿童白血病是最常见的儿童恶性肿瘤。个体对致癌物代谢以及DNA损伤修复能力的差异 ,可能是肿瘤遗传易感性的重要基础。本文对毒物代谢酶、DNA修复基因多态与儿童白血病遗传易感性研究进行了简要的综述