儿童急性白血病微小残留病检测

目的 研究微小残留病(MRD)的检测在儿童急性白血病中的临床意义.方法 对已诊断并坚持治疗的40例急性白血病患儿采集骨髓标本,应用单克隆抗体直接免疫荧光标记法和三色流式细胞术(FCM)多参数分析技术的方法,进行MRD的检测并进行随访,随访期为1～5年.结果 40例急性白血病患儿中,已停药25例,维持治疗15例.停药的25例患儿中,诱导缓解结束时有18例MRD阴性,7例由阴性转阳性.15例维持治疗患儿中,缓解时至今MRD阴性者为8例,缓解时阳性者为7例.结论 连续监测MRD对儿童急性白血病预测预后及指导个体化治疗有重要的意义.     

流式细胞术检测急性白血病微小残留病的研究进展

近年来,随着新的化疗药物的出现,急性白血病在治疗上取得很大进展,患者的完全缓解率达50％-80％。尽管如此,从诊断开始的3—5年内仍有部分患者复发,目前认为其主要原因与微小残留病（MRD）的存在相关。多参数流式细胞术（FCM）是目前检测MRD的有效方法之一。它通过多参数分析白血病细胞与正常细胞表面不同的免疫表型,将两种细胞区分,具有快速、灵敏度高、定量准确的优点。通过FCM对急性白血病MRD的监测．不仅有助于判断疗效、指导个体化治疗,对预测疾病复发也具有重大意义。本文将对FCM检测急性白血病MRD的优势、面临的挑战、临床意义及应用前景进行综述。     

CD10在儿童期B-急性淋巴细胞白血病中的表达特点及其在微小残留病检测中的意义

本研究的目的是观察CDl0在儿童期B急性淋巴细胞白血病(BALL)中的表达情况，并探讨CDl0在白血病微小残留病检测中的应用价值。用流式细胞术分析58例儿童期急性淋巴细胞白血病表型，观察CDl0在BALL病例骨髓细胞中的表达特点，并将CDl0抗体与其它多种抗体构成四色组合用于B-ALL的微小残留病检测，评价其所起到的作用。结果表明，65、5％(38／58)的BALL具有CDl0过强表达(CDl0^bright)的特点，而且CDl0^bright与CD34的阳性表达率有关——CDl0^bright多出现于CD34阳性率高的B-ALL中。CDl0^bright在微小残留病检测中，与其它异常表达的抗原形成的组合能够在双参数点图上很好地区分出白血病细胞群与正常细胞群。即使在其他抗原表达无异常时，也可因CDl0的过强表达而使白血病细胞群与正常细胞群区分开。结论：CDl0^bright与BALL中CD34的高比例表达相关，CDl0^bright也是微小残留病检测的一个很好的指标，CDl0的表达与其他用于微小残留病检测的抗原表达的应用有互补作用。     

221例急性早幼粒细胞白血病免疫表型特点与微小残留病检测及基因标志的关系

本研究探讨急性早幼粒细胞白血病（APL）患者的免疫表型特点与微小残留病（MRD）检测及基因标志之间的关系。采用四色流式细胞术（FCM）分析了221例初诊APL患者的免疫表型,其中87例加做CD123抗体,196例同时运用PCR检测特异融合基因pml-rarer。结果发现：初诊APL患者中CD123、CD33和CD9的阳性表达率分别为100％、99．1％和96．0％,阳性患者中平均阳性细胞比例均在90％左右;虽然CD117、CD13、CD38及CD64的阳性表达率均高于96％,但阳性患者中阳性细胞比例分布不一致,平均阳性细胞比例在70％左右;部分患者表达CD15、CD56和CD11b,多数患者不表达CD34和HLA-DR,阳性患者中阳性细胞的平均比例均较低。196例初诊APL患者中,pml—rara基因的不同转录本bcr1、bcr2和bcr3所占比例分别为63．3％、4．6％和32．1％。bcr3型基因与CD34的阳性表达相关,以20％为界时bcr3和bcr1型中CD34^＋患者的比例分别为15．4％（10／65）和3．3％（4／121）（P〈0．05）;以10％为阳性界限,bcr3和bcr1型中CD34^＋患者的比例分别为47．7％（31／65）和5．8％（7／121）（P〈0．001）;其余抗原的表达无明显区别。APL细胞中CD34为阳性且表现为非高侧向角（NL-SSC）时高度提示基因为bcr3型。结论：APL患者的免疫表型具有独特特征,CD123、CD33和CD9更适用于APL的MRD检测,CD34的阳性表达、NL-SSC与bcr3基因亚型相关,CD34的阳性界限设为10％更能提示基因类型与抗原表达的关系。     

中期荧光原位杂交在急性早幼粒细胞白血病诊断和微小残留病检测中的应用

为研究中期荧光原位杂交(M-FISH)在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及其微小残留病(MRD)检测中的价值,应用17号全染色体彩涂探针对10例初诊时按细胞形态学诊断为急性髓细胞白血病(AML)的未治疗患者(初治APL 5例,复发APL 3例,AML-M1和AML-M5各1例)和10例治疗后获完全缓解(CR)的APL患者作了M-FISH检测,并与常规细胞遗传学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果相比较.10例未治AML中,7例M-FISH呈阳性结果,核型分析显示其中4例有t(15;17)易位,3例为正常核型,它们中除1例未检测外,其余6例的RT-PCR均检出PML/RARα融合转录本;3例M-FISH呈阴性结果,其中1例核型分析揭示del(2q)×2异常,RT-PCR显示PML/RARα融合转录本阳性,1例有复杂核型异常,RT-PCR显示PML/RARα融合转录本阴性,1例有t(9;22)易位,RT-PCR显示PML/RARα融合转录本阴性而BCR/ABL融合转录本阳性.后两者的诊断由AML-M3改正为AML-M2.10例CR后的APL核型分析均未见异常,而15次M-FISH检测有12次都发现1-5个阳性细胞,此与RT-PCR结果相一致.白血病复发见于其中1例,该例相隔13个月的两次检测均为阳性.上述结果表明,M-FISH对于APL的诊断及其MRD的检测有重要应用价值,它虽不如RT-PCR敏感,但由于它能定量检测增殖细胞内的染色体易位,似比RT-PCR更能预测白血病的复发.     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病（AML）中的表达及在微小残留病（MRD）检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关（P〈0.01）。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56＋组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19＋组（MRD阳性率25.00%,复发率0）比较,差异有统计学意义（P均〈0.01）。CD56＋CD19＋组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56＋组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,与单纯CD19＋组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的表达率。用CD45设门以CD56、CD19、CD34、CD117、CD33为组合的MRD方案能有效检测MRD。     

流式细胞术在急性髓系白血病微小残留病中的应用

目的研究多参数流式细胞术(FCM)监测微小残留(MRD)水平对急性髓系白血病(AML)的复发预测及治疗指导方面的临床意义。方法选取37例诱导化疗后形态学完全缓解的AML患者,在诱导化疗后和巩固治疗后,用FCM监测MRD水平。结果 17例MRD阳性的患者最终发生复发,其MRD阳性检测时间比形态学诊断时间平均提前5个月。诱导化疗后、巩固治疗后的MRD阳性组和阴性组的临床复发率均有显著性差异(P0.05),诱导化疗后MRD阳性组的临床复发率低于巩固治疗后MRD阳性组,二者之间没有显著性差异(P0.05)。结论 FCM连续监测MRD水平能够有效预测AML患者的复发,并指导临床治疗。     

儿童急性B淋巴细胞白血病微小残留病检测及其预后意义

摘要：目的：建立检测急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）微小残留病（MRD）的流式细胞术,评估监测MRD对于判断B ALL预后的价值。 方法：用四色荧光抗体组合流式细胞术对33例确诊并接受SCMC-ALL-2005方案治疗的B-ALL患儿进行MRD检测,并随访5年,分析监测结果、复发率、5年无事件生存率。 结果：建立了正常骨髓细胞分布的分析模板;流式细胞术检测结果表明,18例MRD阳性患儿的白血病复发率为55. 6%(10/18)、15例MRD阴性患儿复发率为13.3%(2/15),差异有统计学意义（P＜0.05）。其5年无事件生存率分别为44%和93%,差异有统计学意义（χ²=6.37,P＜0.05）。 结论: 监测MRD对于B-ALL患儿预后评估有重要意义,并为治疗方案的选择提供依据。     

CD56在急性髓系白血病细胞上的表达及微小残留病分析

目的探讨CD56在非M3急性髓系白血病(AML)中的表达及在微小残留病(MRD)检测的意义。方法应用流式细胞术分析145例非AML-M3 AML患者免疫表型,以CD56、CD19、CD117、CD34、CD33为标志,CD45设门MRD分析。结果 145例AML患者中CD56阳性37例,占25.52%,CD19阳性17例,占11.72%,分布在M1、M2、M4、M5。CD56或/和CD19阳性的AML患者共49例,其中CD56和CD19同时阳性5例,均为M2亚型。P170蛋白阳性36例,占24.83%,其表达率与CD56呈显著正相关(P<0.01)。48例AML患者在诱导治疗结束和维持治疗第14、32、56周作MRD检测。单纯CD56+组MRD阳性率93.55%,复发率77.41%,与单纯CD19+组(MRD阳性率25.00%,复发率0)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。CD56+CD19+组MRD阳性率100.00%,复发率80.00%,与单纯CD56+组比较,差异无统计学意义(P>0.05),与单纯CD19+组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD56、CD19在非M3 AML有较高的...     

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。     

急性髓系白血病微小残留病监测的研究进展

急性髓系白血病(AML)是常见的血液系统恶性肿瘤.近年来随着新的化疗药物的出现以及化疗方案的不断完善,急性髓系白血病的无病生存率及总体生存率不断提高,但是仍然要面对缓解后复发这一难题.目前认为复发的主要原因是微小残留病(MRD)的存在,AML的MRD监测对于AML疗效评价,预后预测和指导个体化治疗具有重要意义.近年来M...     

急性早幼粒白血病细胞CD59表达缺失

CD59是糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,通过抑制膜攻击复合物保护细胞免受补体介导的溶细胞作用。本研究探讨急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞CD59表达情况。应用流式细胞术检测19例急性早幼粒白血病细胞CD59的表达及NB4细胞经全反式维甲酸(ATRA)处理前后CD59的表达。用PCR方法扩增白血病患者和NB4细胞的pig-A基因编码序列并进行测序。结果表明,19例初治APL患者中12例CD59膜表达缺失,高于其他非APL细胞(40例non-APL中14例缺失,p=0.042)。对6例治疗前CD59表达缺失APL患者CR后再次检测CD59的表达,6例患者CD59的表达在CR后均恢复正常,这提示CD59的表达缺失只发生在早幼粒白血病细胞上。检测发现APL细胞系NB4的CD59表达也缺失,NB4细胞经ATRA处理后CD59的表达并没有随着细胞分化而出现变化。对NB4细胞和1例CD59表达缺失APL患者的pig-A基因编码序列测序显示,pig-A基因编码序列没有突变,因此APL的CD59表达缺失并不是由于pig-A基因的突变造成的。结论:APL细胞较多地有CD59表达缺失。     

中期荧光原位杂交在急性早幼粒细胞白血病诊断和微小残？…

为研究中期荧光原位杂交（Ｍ－ＦＩＳＨ）在急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）诊断及其微小残留病（ＭＲＤ）检测中的价值,应用１７号全染色体彩涂探针对１０例初诊时按细胞形态学诊断为急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）的未治疗患（初治ＡＰＬ５例,复发ＡＰＬ３例,ＡＭＬ－Ｍ１和ＡＭＬ－Ｍ５各１例）和１０例治疗后获完全缓解（ＣＲ）的ＡＰＬ患作耻Ｍ－ＦＩＳＨ检测,并与常规细胞遗传学和逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结     

两种方法动态监测急性早幼粒细胞白血病微小残留病变的前瞻性比较研究简

本研究对比聚合酶链式反应（PCR）和多参数流式细胞术（FCM）在急性早幼粒细胞白血病（APL）患者微小残留病变（MRD）动态监测中的价值.2011年1月至2012年12月,在我院接受巩固治疗的APL患者,均于化疗前行骨髓穿刺,每例留取3份标本,同时行骨髓细胞形态学检查、融合基因PCR和FCM检查,并对结果进行统计分析.对48例入选患者共检查159例次,留取标本477份.结果表明：骨髓细胞形态学检查发现3份复发,余均为完全缓解;PCR检查中阳性7份,FCM检查中阳性19份（kappa检测,P＞0.05）.结论：FCM与PCR检查对APL治疗效果的评估价值相似.     

白细胞来源微泡与急性髓系白血病微小残留病及预后的相关性

目的:探讨白细胞来源微泡与急性髓系白血病(AML)微小残留病(MRD)及预后的相关性。方法:用流式细胞仪检测47例AML患者诱导化疗后,21 d外周血的CD45⁺MP以及其中CD44⁺MP、CD24⁺MP的表达情况,并分析MP与MRD及预后的相关性。结果:MRD⁺组CD45⁺MP占比、CD44⁺MP占比、CD24⁺MP占比均显著高于MRD^-组;MRD⁺组CD45⁺MP、CD44⁺MP、CD24⁺MP与MRD水平呈正相关(r=0.589,r=0.548,r=0.711);CD45⁺MP、CD44⁺MP、CD24⁺MP预测MRD⁺的AUC分别为0.949、0.782、0.817;HCD45⁺MP组、HCD44⁺MP组、HCD24⁺MP组EFS及OS均显著短于低水平组(P<0.05)。结论:高水平CD45⁺MP、CD44⁺MP、CD24⁺MP可用来预测高水平MRD,高水平MP组预后差。     

儿童急性髓系白血病干细胞的测定及其临床意义

本研究检测儿童急性白血病患儿急性髓系白血病干细胞（AMLLSC）的水平,分析AML患儿缓解后白血病干细胞（leukemia stem cells,LSC）含量与微小残留病（MRD）水平之间的关联。采用流式细胞术（FCM）和直接免疫荧光法标记细胞,分别测定初诊AML、ALL和缓解AML、ALL及对照组患儿骨髓单个核细胞（mononuclear cell,MNC）中AMLLSC（CD34^＋ CD38-CD123^＋）表型阳性细胞的含量及AML患儿缓解后MRD水平。结果表明：初诊AML、ALL及对照组患儿骨髓MNC中AML LSC或AML LSC相同表型细胞的中位含量分别为166（14-1459）细肜10万细胞、7（0—560）细肜10万细胞和0（0—6）细胞10万细胞,未缓解AML患儿骨髓MNC中AML LSC的中住含量为36（5—224）细胞／10万细胞,缓解AML、ALL患儿骨髓MNC中AML LSC或AML LSC相同表型细胞的中位含量分别为6（0—41）细肜10万细胞和10（0～105）细胞／10万细胞,缓解期AML患儿AML LSC含量与同期MRD水平呈负相关（r=-0．466,P=0．006）。结论：初诊AML患儿骨髓细胞中存在AMLLSC,缓解后AMLLSC含量明显减少,维持一个较低水平;在初诊ALL患儿骨髓细胞中也存在AMLLSC（CD34^＋ CD38-CD123^＋）相同表型细胞,缓解后AML LSC相同表型细胞含量没有明显变化;AML患儿缓解后AML LSC含量与MRD水平呈负相关。