紫外线致成纤维细胞损伤及VitE保护作用的研究

目的观察UVB辐射对体外培养的真皮成纤维细胞的损伤作用及VitE对细胞的光保护作用。方法由健康人皮肤中分离培养成纤维细胞,用紫外线以一定时间(1、5、10、15分钟)进行照射,并加入VitE进行干预处理。MTT法检测细胞增殖活性,荧光显微镜检测各受试组细胞凋亡率。结果UVB照射后24h,上述细胞均出现增殖活性下降,活性下降程度与照光时间成正比;加入VitE处理后,细胞活性可有一定程度恢复。UVB照射可诱导真皮成纤维细胞产生凋亡,其凋亡率随UVB照射时间延长而增加。加入VitE处理后,各组HeLa上皮细胞和成纤维细胞凋亡率均明显下降。结论紫外线辐射可引起真皮成纤维细胞损伤,VitE可抑制紫外线辐射的损伤效应。     

紫外线对HaCaT细胞损伤作用的研究

目的 探讨中波紫外线(UVB)对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的损伤影响,建造UVB损伤人表皮细胞的模型,以方便进行实验室光损伤研究.方法 取培养的HaCaT细胞,用10、30、50、70、90 mJ/cm 的UVB照射后继续培养24 h,在光学显微镜下观察细胞的形态学改变,以MTT法检测细胞的增殖活性,以ELISE法测定细胞上清液中TNF-α的水平,以流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 随UVB照射剂量的增加,在光镜下可见HaCaT细胞不同程度的损伤,其增殖活性降低,P＜0.01;细胞上清液中TNF-α的水平增加,P＜0.01;凋亡率增加,P＜0.01.结论 UVB可损伤HaCaT细胞,降低增殖活性,增加细胞上清液中TNF-α的水平,诱导细胞凋亡,并且呈剂量依赖性.在实验中,可根据需要调节不同的UVB照射剂量,建造所需的细胞损伤模型.     

姜黄素对中波紫外线照射HaCaT细胞凋亡的影响

目的研究姜黄素对中波紫外线（UVB）照射HaCaT细胞凋亡的影响。方法使用MTT法测定不同浓度姜黄素对UVB照射HaCaT细胞增殖的影响;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分光光度法检测反映出细胞内caspase-3及cas-pase-9活性的改变。结果 UVB照射HaCaT细胞后细胞增殖较未接受UVB照射组明显下降（P〈0.05）,细胞凋亡率可增加5%以上;对姜黄素做预处理后,UVB照射可在一定程度上抑制HaCaT细胞增殖,尤其是当浓度在10.0μmol/L时,细胞凋亡明显,caspase-3及caspase-9的活性也明显增加。结论姜黄素能增强中波紫外线诱导HaCaT细胞的凋亡,这一过程可能是通过激活caspase-3及caspase-9而实现的。     

表没食子儿茶素没食子酸酯影响慢性紫外线辐射诱导的人皮肤成纤维细胞凋亡和突变的研究

目的 研究紫外线(UV)照射对人皮肤成纤维细胞的细胞凋亡率、细胞周期变化和次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变频率的影响以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的干预作用.方法 采用一定剂量的中、长波紫外线(UVA和UVB)慢性照射培养的新生儿包皮成纤维细胞.通过流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,HPRT突变分析法检测突变频率.结果 慢性UVA组引起的细胞凋亡率低于UVB组(P<0.05),而HPRT基因位点突变的频率是UVB组的4.79倍.EGCG干预组与单纯UV辐射组相比,成纤维细胞的凋亡率增加,HPRT基因位点突变的频率降低.结论 慢性照射日常剂量UVA,其损伤性高于UVB.EGCG可以升高慢性UV照射引起的细胞凋亡率,降低UV照射引起的突变频率,提示EGCG可以诱导不可逆损伤细胞的凋亡,从而减少突变细胞.     

枸杞多糖在UVB辐射人角质形成细胞氧化损伤中的保护作用

目的利用中波紫外线辐射体外培养的人角质形成细胞（HaCaT）建立紫外线损伤模型,探讨枸杞多糖（LBP）在紫外线辐射HaCaT氧化损伤中的作用及其机制,为抗氧化剂的研发提供理论依据。方法在HaCaT培养的基础上设置空白对照组、UVB照射组和不同浓度的LBP干预组,采用UVB辐射HaCaT进行造模,运用酶生化法检测不同浓度的枸杞多糖对UVB辐射HaCaT后的细胞增殖及抗氧化酶的影响。结果 UVB辐射对HaCaT造成明显损伤,LBP可提高UVB辐射后HaCaT细胞增值活性（MTT）,提高超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,降低丙二醛（MDA）产生。（P〈0.05）。结论 UVB对HaCaT细胞有损伤作用,LBP可拮抗UVB所致HaCaT细胞抗氧化酶活性的降低,从而具有抗氧化光保护作用。     

Ca2+在紫外线诱导成纤维细胞凋亡中的作用

目的了解细胞内外钙离子浓度对紫外线(UVB)辐射诱导成纤维细胞(NIH3T3)凋亡作用的影响.方法 UVB照射成纤维细胞10 min,培养12 h后,用流式细胞仪测定凋亡率. 结果 UVB照射组比UVB不照射组凋亡率有明显增加;UVB照射组内各组间凋亡率因细胞内外Ca2+浓度不同存在明显差异. 结论 UVB辐射诱导成纤维细胞发生凋亡与胞内外Ca2+浓度有关,Ca2+参与了凋亡的信号转导.UVB诱导成纤维细胞发生的凋亡,主要通过Ca2+转导凋亡信号这一途径,还反映出胞浆Ca2+升高既来源于胞内钙池,又来源于胞外游离Ca2+.     

p38和ERK信号途径在UVB导致细胞凋亡中的作用

目的 探讨p38和ERK信号途径在紫外辐射B(UVB)导致细胞凋亡中的作用.方法 以HaCat细胞为实验村料,"MTT"法观察细胞存活率;Hoechst33258染色后以荧光显微镜观察凋亡细胞的形态:免疫印迹观察此过程中的可能信号转导通路.结果 UVB照射剂量不同,培养时间相同时,随剂量增加,HaCat细胞存活率逐渐减少;照射剂量相同,培养时间不同时,随时间延长,细胞存活率下降到最低值后开始恢复;UVB照射5 min组的凋亡最高,并且5 min照射组在照后培养12h时.凋亡率最高;UVB照射后p38及其下游的p53表达,而P44/42无改变.结论 UVB照射,能引起HaCat细胞的生长抑制和凋亡且呈剂量依赖和时间依赖性;UVB导致细胞凋亡可能是通过p38信号途径,而不是ERK信号途径.     

中波紫外线诱导人真皮成纤维细胞凋亡的研究

①目的　探讨中波紫外线 (UVB)辐射所致人真皮成纤维细胞凋亡的机制。②方法　建立UVB(辐射强度为 1 .1 76× 1 0 - 4 J/cm2 )对体外培养人真皮成纤维细胞氧化损伤模型。用MTT法检测细胞增殖活性 ,酶法测定胞浆中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH px)活性和活性氧 (ROS)的含量 ,流式细胞仪An nexinV FITC法检测细胞的凋亡率和死亡率。③结果　在离体条件下 ,UVB可显著抑制成纤维细胞的增殖活性 ;UVB可降低细胞内SOD ,GSH px活性 ,显著提高ROS的含量 (t =3.87～ 2 4 .4 1 ,P <0 .0 1 ) ;同时可显著提高细胞的凋亡率 (t =57.4 7,P <0 .0 1 )和死亡率 (t =1 3.2 7,P <0 .0 1 )。④结论　UVB所致人真皮成纤维细胞凋亡与其产生氧自由基、抑制细胞清除自由基能力有关。     

紫外线照射对人外周血细胞凋亡及吞噬功能的观察

目的观察中波紫外线(UVB)照射对正常人外周血淋巴细胞(PBL)凋亡及吞噬功能的影响.方法采用50、100、200和400 J/m2不同剂量的UVB照射PBL,培养24 h后以及100和200 J/m2剂量下培养0、6、12和24 h后,用AO染色、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用葡萄球菌法观察受UVB处理后吞噬细胞的功能变化.结果 PBL受照后死亡方式之一是凋亡,AO染色法荧光显微镜计数凋亡细胞百分率及DNA梯状带检测结果发现,细胞凋亡有时间和剂量依赖性;AO染色法检测结果与FCM检测的凋亡细胞随剂量的加大及时间的延长而增多的结果不呈平行关系.同时PBL的吞噬功能有不同程度地受损.结论 UVB照射可诱导PBL凋亡,凋亡可呈现时间和剂量效应关系,PBL的凋亡与细胞功能相关.     

Tempol对紫外线照射所致HaCaT细胞损伤保护作用

目的 观察氮氧化物4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶(Tempol)对中波紫外线(UVB)照射所致人角质形成细胞(HaCaT细胞)损伤的保护作用,并探讨其发生机制.方法 在HaCaT细胞培养系统中加入不同浓度的Tempol进行培养,12 h后洗掉培养液中的Tempol,用30 mJ/cm2 UVB照射细胞后,重新加入培养液继续培养24 h.用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡率.RT-PCR方法测定FoxO3a和 BubR1基因的表达.结果 UVB照射组与正常对照组相比,细胞增殖活性明显降低(F=27.71,q=13.57,P<0.05), FoxO3a mRNA的表达明显增强(F=13.93,q=9.79,P<0.05),BubR1 mRNA的表达明显减弱(F=29.69,q=14.54,P<0.05), 凋亡率明显增高(χ2=93.69,P<0.05);与UVB照射组相比,不同浓度的Tempol可以恢复UVB照射细胞的增殖能力(q=3.24～13.60,P<0.05),降低照射细胞的凋亡率(χ2=12.02～101.02,P<0.05),下调FoxO3a mRNA的表达(q=2.92～9.95,P<0.05),上调BubR1 mRNA的表达(q=2.97～14.61,P<0.05).结论 Tempol可以保护HaCaT细胞免受UVB照射造成的损伤.     

黄芩对皮肤细胞紫外线辐射损伤的保护作用

目的 研究传统中药黄芩对紫外线(UVA、UVB)损伤皮肤细胞(角质形成细胞和成纤维细胞)的保护作用。方法 采用30、60、90ml／cm^2的UVB和4、8、12J／cm^2的UVA照射培养的原代角质形成细胞和成纤维细胞，加入中药黄芩进行干预处理，以MTT法检测细胞活性。结果 UVA、UVB照射可引起皮肤角质形成细胞和成纤维细胞损伤，而黄芩预处理后细胞活性可恢复8％～38％。结论 黄芩具有光保护性能，可减轻UVA、UVB对皮肤细胞的损伤作用。     

芦荟多糖对UVB辐射人角质形成细胞氧化损伤的保护作用

目的利用中波紫外线辐射体外培养人永生化角质形成细胞株（HaCaT细胞株）建立紫外线损伤人表皮细胞的模型,探讨芦荟多糖（AP）在紫外辐射HaCaT细胞氧化损伤中的保护作用及其机制。方法在HaCaT细胞培养的基础上,采用UVB辐射HaCaT后,立即加入AP进行干预,同时设置空白组与UVB对照组,分别运用MTT法及生化比色法检测不同浓度的芦荟多糖对UVB辐射人角质形成细胞增殖及抗氧化酶活性的影响。结果 UVB辐射对HaCaT造成明显损伤,AP可提高UVB辐射后HaCaT细胞增值活性,提高超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,降低脂质过氧化物酶（MDA）活性（P〈0.05）。结论 UVB对HaCaT细胞有损伤作用,AP可拮抗UVB所致HaCaT细胞抗氧化酶活性的降低,具有光保护作用。     

参芩仿生化提取物对中波紫外线照射致生物体损伤的保护作用

目的通过人参、黄芩仿生化提取物,对中波紫外线(UVB)照射致人永生化角质形成细胞(HaCaT)及小鼠皮肤损伤的保护作用进行研究,为中药抗辐射提供理论依据。方法采用MTT法检测HaCaT细胞生存率,黄嘌呤氧化酶法检测细胞溶解液中及小鼠皮肤组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法检测细胞溶解液中及小鼠皮肤组织匀浆中丙二醛(MDA)含量变化。结果参芩仿生化提取物能够显著提高UVB照射损伤细胞的活性,明显升高细胞溶解液及小鼠皮肤组织匀浆中SOD活力,降低MDA含量。结论参芩仿生化提取物对UVB辐射致HaCaT细胞和小鼠皮肤损伤均有明显的保护作用,能够有效的抵抗UVB所致的氧化损伤。     

抑制LRP16基因表达增加了肿瘤细胞辐射敏感性

目的:探索抑制LRP16基因表达对肿瘤细胞辐射治疗敏感性的影响。方法:采用逆转录病毒介导的小干扰RNA策略,建立了LRP16基因表达被稳定抑制的MCF7及HeLa细胞系,采用电离辐射及紫外线(UV)分别照射LRP16基因被稳定抑制表达的MCF7和HeLa细胞,于照射后不同的时间点进行Hoechst33342染色以检测细胞凋亡率,并进行DNA片段化分析;胎盘蓝染色检测不同时间点的细胞死亡率。结果:照射后2～10h之间,LRP16基因表达抑制组细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05);照射后10h胎盘蓝方法计数死活细胞,发现LRP16基因抑制组细胞的死亡率>40%,而对照组的死亡率在15%～20%之间;24h计数细胞死亡率发现LRP16基因抑制组细胞与对照组细胞差别不明显(P>0.05)。结论:抑制LRP16基因在肿瘤细胞中的表达增加了瘤细胞的辐射治疗敏感性,其机制可能是通过抑制LRP16基因表达干预了辐射诱导DNA损伤反应的早期信号途径。     

丹参和枸杞对中波紫外线损伤角质形成细胞的保护作用

目的:观察丹参和枸杞对中波紫外线(UVB)损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法:用丹参和枸杞对HaCaT细胞进行预处理24小时,采用20、40、60mJ/cm2剂量的UVB照射细胞,以MTT法检测细胞生存率,以酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中TNF-α及IL-1β的分泌量。结果:角质形成细胞损伤程度与UVB照射剂量有关,丹参和枸杞均可提高UVB照射后角质形成细胞的生存率,丹参可抑制角质形成细胞释放TNF-α和IL-1β;枸杞只抑制TNF-α的释放,而对IL-1β无明显抑制作用。结论:UVB对角质形成细胞有损伤作用,且与剂量相关;丹参、枸杞可以通过降低UVB引起的炎症因子TNF-α和(或)IL-1β的分泌从而减轻紫外线辐射引起的皮肤损伤。     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞改变后β-catenin基因表达水平的研究

【摘要】 目的 研究经过不同剂量紫外线中波(UVB)照射正常人皮肤成纤维细胞(HSF) 不同时间后β 链蛋白(β catenin)基因的表达改变,探讨UVB诱导HSF衰老可能的机制。方法 未经UVB照射的HSF为对照组;经过不同剂量(100、200、300) mJ/cm2 UVB处理不同时间(1、2、3)天后的HSF为实验组。实时荧光定量PCR技术(FQ PCR)检测实验组和对照组中β-catenin基因的表达;四唑盐比色法(MTT)观察HSF的生长活性改变,流式细胞仪检测HSF的凋亡率变化。结果 UVB照射对HSF细胞的生长有明显抑制作用,并且随着UVB照射时间延长和剂量的增加,HSF细胞生长率逐渐下降;UVB处理后实验组中β-catenin基因的相对表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜005);β-catenin基因的表达水平随着UVB作用的时间和剂量的不同而变化,存在较为明显的时间依赖性和剂量依赖性。结论 经过UVB处理的HSF细胞中调控皮肤衰老的基因β-catenin表达明显降低,大剂量长时间UVB照射可诱导HSF发生衰老改变。     

UVB对HaCaT细胞凋亡的影响

①目的　探讨紫外线B(UVB)对HaCaT细胞凋亡的影响及其作用机制。②方法　取培养的HaCaT细胞 ,用 30mJ/cm2 的UVB照射后继续培养 18h ,以流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位和细胞内游离Ca2 +水平 ,用透射电镜观察细胞的超微结构。③结果　UVB照射增加了HaCaT细胞的凋亡率 (t =5 .2 36 ,P <0 .0 1) ,降低了线粒体膜电位 (t=6 .897,P <0 .0 1) ,升高了细胞内游离Ca2 + 水平 (t =6 .0 4 6 ,P <0 .0 1)。细胞的超微结构因UVB照射而遭到严重破坏 ,胞浆内的细胞器大量减少 ,线粒体严重空泡化 ,髓样小体形成 ,核内染色质成块并边聚。④结论　线粒体膜电位的下降和胞内游离Ca2 + 的升高可能参与了UVB诱发HaCaT细胞凋亡的过程     

人参三醇组甙、VitE及VitC 对紫外辐射致皮肤损伤的防护机制初探

目的:探讨紫外辐射致皮肤损伤的药物防护机制.方法:以细胞凋亡、细胞周期及细胞内SOD、H2O2为观察指标,研究人参三醇组甙及VitE、VitC对UVB致人角质形成细胞(Colo16)损伤的保护作用.结果:一定剂量UVB可诱导明显的皮肤角质形成细胞发生S期阻滞和细胞凋亡,可使细胞内SOD下降、H2O2升高,人参三醇组甙及VitE、VitC对其均有不同程度的保护作用:减少S期细胞数、抑制细胞凋亡、激活细胞内SOD活性、降低细胞内H2O2.结论:紫外线照射后细胞内氧自由基变化可能是紫外线致皮肤损伤的机理之一.