电位滴定法测定青霉素G酰胺酶的酶活力

<正> 青霉素G酰胺酶是一种重要的酶催化剂,可用于由青霉素G到6-氨基青霉烷酸(6-APA)和由青霉素G到7-氨基去乙酰氧基头孢霉烷酸(7-ADCA)的反应中。6-APA和7-ADCA在医药上是半合成抗菌素的两种重要中间体,利用它们可合成一系列新的青霉素和头孢菌素。青霉素G酰胺酶的酶活力直接影响着6-APA和7-ADCA的质量和成本,因此,准确测定酶活力具有重要的意义。采用分光光     

头孢菌素C酶裂解的进展与产生7—ACA产黄顶孢霉菌株的构建

产黄顶孢霉(A.chrysogenum(C.acremonium))产生的头孢菌素C(CPC),经过化学裂解,形成的母核7-ACA,成为许多半合成头孢菌素的起始原料.自从20世纪60年代初开始探索CPC酰化酶产生菌以来,假单胞菌菌株SY77-1的GL-7ACA酰化酶工作(1975),为CPC酰化酶的获得(1985)打下了基础;虽然迄今报道的CPC酰化酶,还不能像青霉素酰化酶那样应用于工业生产,但随着产黄顶孢霉中基因转化系的逐渐完善(1982~1989),近来矶贝隆夫等(1991)首先报告了构建产黄顶孢霉的7-ACA产生菌     

β-内酰胺抗生素合成中酶的应用

用固定化酶法已能大量地将青霉素G或V转化为6-APA,但用酶法大量地将头孢菌素C转变为γ-ACA则尚未成功.由产黄青霉菌、顶头孢霉菌、小小棒状链霉菌及诺卡氏菌等产生青霉素、头孢菌素和头霉素共有八个生物合成反应步骤,每一步都有选择性的酶和特殊辅酶参与才能促进反应进行.第一步:由ACV合成酶使L-α-氨基己二酸(A),L-半胱氨酸(C)和L-缬氨酸(V)连成所有青霉素和头孢菌素中间体的前体,即三肽化合物(LLD-ACV).第二步:由异青霉素合成酶将LLD-ACV氧化,环化为异青霉素N,加入Fe~(2+)和维生素C,可促进反应.第三步:经异青霉素N异构化酶使之差向异构为青霉素N.第四步:通过脱乙酰氧头孢菌素C合成酶及Fe~(2+)、维生素C和α-酮戊二酸     

青霉素V酰化酶在生产6—APA中的潜力

目前发酵生产的青霉素G(Pen G)和青霉素V(Pen V)多半是用作生产β-内酰胺中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基脱乙酰氧头孢烷酸(7-ADCA)的原料.有效、稳定的固定化青霉素酰化酶的开发,为合成具有不同抗菌性能的6-APA和7-ADCA衍生物创造了有利条件.现6-APA年产量约7500t,为此需消耗10~30t固定化青霉素酰化酶.     

用酶法从头孢菌素C生产7-氨基头孢霉烷酸

本文简介两种从头孢菌素以酶法生产7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)的方法,介绍如下:1.应用脱酰基化的酰基转移酶从 GL7-ACA 制取7-ACA 的方法:把头孢菌素 C进行氨基氧化,经过酮型7-ACA 制取7-(4-羧丁酰胺)-3乙酰氧甲基-3-头孢烯-4-羧酸(GL7-ACA)的方法已经完成。从头孢菌素 C 制取 GL7-ACA 的方法,有酶法和化学法二种。利用酶法使头孢菌素 C 的     

产生GL-7ACA酰化酶的假单胞菌的分离与特性

具有水解青霉素G和青霉素V成为β-内酰胺母核6-氨基青霉烷酸(6-APA)能力的酰化酶已在许多报告中作过论述,且在工业生产半合成青霉素及头孢菌素的中间体上得到广泛应用.随着医疗上新的几代头孢菌素类逐渐取代青霉素,头孢菌素母核7-氨基头孢烷酸(7-ACA)已成为一种关键性中间体.最初希望能找到一种与某些青霉素酰化酶一样有效的酰化酶,可直接转化头孢菌素C(CPC)成为7-ACA.然而,对稀有的CPCD-氨基己二酸侧链具有特异性的酰化酶极为少见.已报道的一些CPC酰化酶,一般活性都很低,至今尚无法证明其工业应用价值.     

青霉素的化学转化

β-内酰胺族抗生素的研究与发展,已进入一个新阶段。临床应用的β-内酰胺族抗生素绝大多数由青霉素或头孢菌素C裂解成6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基头孢烷酸(7-ACA) 后,再行化学改造而得[头霉素C(Cephamycin C)衍生物也可类似地合成],其中也有部分是通过青霉素的化学转化制得。由于现代发酵技术已降低了青霉素的成本,因此,将青霉素化学转化为头孢菌素类或其母核类似物已成为重要课题。青霉素(1)和头孢菌素(2)的母核,具有相同数目的硫、氮和碳原子,仅仅是与β-内酰胺环稠合的环的排列以及氧化态不同。因此在理论上,这两类抗生素化学上相互转化是可能的,     

β-内酰胺抗生素的发现的最近进展

引言青霉素母核6-APA的发现为研制半合成青霉素铺平了道路,并使化疗取得了惊人的进展。7-ACA制备方法的发现促进了广泛研制半合成头孢菌素。β-内酰胺抗生素选择性抑制细菌细胞壁中肽葡聚糖生物合成的最后一步,给化疗带来一种最适的作用机制。因此,半合成头孢菌素类和青霉素类在抗生素生产中占首要的地位,而且对研究新的β-内酰胺抗生素仍有很大兴趣。半合成β-内酰胺抗生素主要来源于青霉素G或头孢菌素C。两者均由发酵产生。多年来,β-内酰胺生物合成局限于这两种化合物。通过各种微生物(如青霉菌和曲霉菌)生     

Temocillin—从发现到生产

40年前,β-内酰胺类抗生素在治疗感染症中的位置已被确定,现在它们所占费用是抗生素费用160亿美元的一半以上。目前使用的约60个β-内酰胺抗生素是由6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基头孢烷酸(7-ACA),经氨基酸化制备得到。由于6-APA和7-ACA的可用性,酰化工艺的简单性,以及抗菌性能可变性导致半合成青霉素和头孢菌素的广泛使用。 6-取代青霉素 Beecham对青霉素的兴趣是众所周知的,其中广泛使用的羟氨苄青霉素和替卡西林是该公司的实验室在1957年6-APA分离后首次制成的。1970年该公司决定了从x替     

DNP法测定D—氨基酸氧化酶活力

半合成头孢菌素由于其在临床上卓苦的疗效而愈来愈引人注目。大多数的半合成头孢菌素都以7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)作母核。长期来,7-ACA是由发酵产物头孢菌素C(CPC)经化学方法裂解制得。但由于化学裂解法存在着成本高,三废污染等问题,二十余年来,国内外在探索采用酶法制备7-ACA的可能性。尤其是近年来生化工程的迅速发展,酶法裂解CPC制备7-ACA,越来越为研究者所重视。由于CPC7位侧链中D-α氨基的立体障碍,由CPC通过一步酶法裂解制备7-ACA较困难,而研究较多的是利用酶法或化学法先将侧链氨基进行氧化后再通过酰化酶的水解制得7-ACA。     

棒状链霉菌的cefE 基因克隆於产黄青霉的迈向发酵产生脱乙酰氧头孢菌素V的首次尝试

头孢氨苄、头孢拉定、头孢羟氨苄在头孢菌素生产中占据比重很大,它们都从青霉素 G 或经过化学扩环,制得7-ADCA,再通过半合成制备而得,另外据估计至2000年,国外7-ADCA 的需求量将达930吨,相当于7-ACA 需求量的76%;而口服头孢菌素中间体的发展,趋向于发展7-ADCA。青霉素     

构建7-ACA生物合成操纵子,并使产黄顶头孢霉直接产生7-ACA

生产许多临床上重要的头孢菌素所用的起始原料7-ACA,系从头孢菌素 C(CPC),通过复杂的化学方法,或近来开发的包括化学及酶的二步法,制取而得。长期以来,虽曾考虑建立用微生物方法生产7-ACA 的高效工艺过程,但迄今为止还没有报告过能够产生7-ACA 的菌株。另外虽然已经克隆了天然抗生素的生物合成基因簇,并在异种宿主中得到表达,但是关于“人工的”抗生素生物合成操纵子的表达,还未见报告。在此,我们报告于 CPC 工业生产的唯一真菌产黄顶头孢霉(A.chrysogenum)中,引入新的7-ACA 生物合成途径(附图)。这个途径包括:由 D-氨基酸氧化梅(DAO)使CPC 转变成酮基己二酰7-ACA(keto-AD-7ACA);部分反应产物进而与 H_2O_2发生非酶反应,形成戊二酰7-ACA(GL-7ACA);然后由头孢菌素酰化酶,将 GL-7ACA、keto-AD-7ACA 及 CPC 水解成7-ACA。     

β-内酰胺酶抑制剂的作用机制

早在1940年,Abraham和Chain就发现在对青霉素不敏感的大肠杆菌提取物中,含有青霉素酶。此酶能打开青霉素分子中的β-内酰胺环,命名为β-内酰胺酶,它能转化青霉素形成相应的青霉噻唑酸,使青霉素完全失去抗菌活性。β-内酰胺酶对头孢菌素也是敏感的,可使头孢菌素无效。故β-内酰胺酶的定义为凡能催化6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基头孢烷酸(7-ACA)及其酰基衍生物的β-内酰胺环中酰胺键使之水解裂环的     

青霉素酰化酶基因的克隆与表达

青霉素酰化酶可永解青霉素为6-APA和相应的侧链,6-APA是半合成青霉素的关键中间物,目前工业生产中已用酶法取代化学法制备6-APA,用青霉素G酰化酶或青霉素V酰化酶水解相应的青霉素.青霉素酰化酶可由各种细菌和霉菌产生,其生理功能还不清楚.这些酸的底物专一性都取决于青霉素分子的侧链.青霉素G酰化酶除了作用于青霉素G之外,还可水解各种苯乙酰衍生物.用7-ACA代替6-APA作为底物,对青霉素G酰化酶活力无明显影响.大肠杆菌和雷氏变形杆菌的青霉素G酰化酶都由α、β两个亚基组成,亚基重组试验表明α亚基决定酶的底物专一性,而活性中     

头孢菌素常用合成起始原料及其质控进展

头孢菌素是我国市场用量很大的一类抗生素,其质量一直受人关注.该类抗生素的关键合成起始原料7-ACA、7-ADCA、GCLE和GCLH,以及由上述原料衍生得到的其他合成中间体,其质量高低直接决定了终产物的质量高低.本文对头孢菌素的几种主要合成起始原料的合成方法,使用途径以及质控方法进行了分析,以期引起研制单位对起始原料质量控制的重视.     

作为头孢菌素C硫原子的S—磺基半胱氨酸

青霉素和头孢菌素分子结构中所含的硫原子都来源于半胱氨酸。已有报导,产黄青霉所产生青霉素,其中的硫是直接从硫酸盐经硫酸盐还原途径获得,而顶孢头孢霉(C.acremoniurn)产生的头孢菌素中的硫是优先从蛋氨酸经逆转硫化作用途经获得的。作者用头孢菌素 C 类、(包括头孢菌素 C、脱乙酰头孢菌素和其它对头孢菌素酶敏感的     

产生酰化酶菌种的选育

青霉素酰化酶(penicillin acylase)是半合成抗菌素工业上的一种重要酶类,它可用于青霉素或重排酸(7-苯乙酰氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸)的裂解,以生产6-氨基青霉烷酸(6-APA)或7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA);也可用于缩合制取氨苄青霉素、羟氨苄青霉素及其他半合成青霉素或头孢菌素。但目前国内广泛使用的产生酰化酶的菌种,酶产量较低,因此我们开展菌种选育工作。以大肠杆菌B-EC-1及B-EC-2二株为出发菌株,经紫外线(UV)诱变二次累积处理,选育到1.236菌株,使酰化酶产量由原来的24.84单位/     

药物中间体7-氨基头孢烷酸的制备

药物中间体7-氨基头孢烷酸（7-ACA）的工业化生产国内多局限于化学裂解法，由于该法有某些缺点，因此，本文介绍了环保型的酶法催化生产7-ACA的制备方法。该制备方法以头孢菌素C为起始原料，经固定化D-AOD氧化酶和GL-脱酰酶的作用，酶法裂解制得7-ACA，得到7-ACA的总收率达到74％。实验结果说明该方法是可行的，并且具有重要的现实意义。本文还对影响反应的因素做了进一步的讨论。     

7-氨基头孢霉烷酸的双波长薄层扫描定量法

7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)是半合成头孢菌素的极重要的母体原料。本文用双波长薄层层析扫描仪,直接在薄层板上对7-ACA进行原位扫描定量测定。应用硅胶H板、3％NaCl水溶液作展开剂,脱乙酰7-ACA、7-ACA内酯以及头孢菌素C的存在均无影响,分析结果稳定。     

口服有效的头孢菌素和青霉素衍生物

作者将7种不同的羧酸R-COOH(R=a～g等),大多经拆分、保护后,分别与7-ACA或6-APA缩合,再经去保护等步骤,合成一系列口服有效的头孢菌素(1)和青霉素衍生物(2)。其中三种氨基酸(R=(a),(c),(d)用(+)联萘磷酸拆分。氨基酸(R=(a),(b),