增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的改变及意义

目的检测增生性瘢痕（Ｈ）和瘢痕疙瘩（Ｋ）组织中ＴＧＦβ１及Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达,了解其相互关系及意义。方法斑点杂交分析检测Ｈ和Ｋ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ稳态水平的改变;原位杂交检测ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ在组织中的空间分布。结果①Ｋ和Ｈ组织中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ稳态水平明显高于Ｎ组和Ｓ组;②Ｋ选择性Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达增强,而Ｈ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ表达均增强。结论ＴＧＦβ１在Ｈ和Ｋ的发病机理中起了重要作用,Ｋ和Ｈ发生发展中具有不同的分子机理。     

增生性瘢痕增生过程中转化生长因子β表达的动态研究

通过对３４例不同时期增生性瘢痕组织标本进行ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交检测，结果发现：随着增生性瘢痕的发生、发展成熟，ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ的总表达量明显呈由强至弱的变化，在１至６个月瘢痕组织内表达丰富，９个月时明显减弱，１２个月以后的瘢痕组织及正常皮肤对照标本中含量很少；ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ表达的定位检测显示：除真皮层组织细胞有部分表达外，许多瘢痕表皮基底细胞内有较强表达。由此可见：①ＴＧＦβ表达与瘢痕增生发展有着密切联系；②ＴＧＦβ在瘢痕表皮组织中的表达对其自身增殖起抑制作用，导致表皮萎缩。     

骨痂组织冰冻切片前胶原及转化生长因子－β1基因表达的原位定位

目的观察骨痂组织中前胶原、转化生长因子－β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１,ＴＧＦ－β１）基因表达模式,分析ＴＧＦ－β１在骨折愈合过程中的作用,探索骨组织冰冻切片原位杂交技术。方法采用不脱钙的大鼠骨痂组织冰冻切片进行原位杂交,观察骨痂组织中前胶原和ＴＧＦ－β１基因的表达,并与先前研究作对照。结果杂交信号清晰,定位良好,特异性高。骨折第１周末,成纤维细胞的Ⅲ型前胶原基因表达占主导,Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ阳性成骨细胞也出现于膜内化骨区。ＴＧＦ－β１在分化、增殖的成骨细胞以及接近成熟的软骨细胞有显著表达。骨折第２周末,Ⅱ型前胶原和ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ在成熟的软骨细胞大量表达,而Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达也明显增加。骨折第４周末,软骨骨痂基本被骨组织替代,见散在Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达阳性的成骨细胞。同时证实共有表型表达的现象存在。结论实验结果与以往有关研究结果的吻合,提示ＴＧＦ－β１在骨折愈合过程中,尤其在细胞分化、增殖中,起重要的调节作用。同时,也说明了此方法是一种快捷、灵敏、又不失特异性的骨组织原位杂交方法。     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中TGF-β_1及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的改变及意义

目的检测增生性瘢痕(H)和瘢痕疙瘩(K)组织中 TGF-β_1及Ⅰ、Ⅲ型前胶原 mRNA的表达,了解其相互关系及意义。方法斑点杂交分析检测 H 和 K 组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原及 TGF-β_1mRNA 稳态水平的改变;原位杂交检测 TGF-β_1 mRNA 在组织中的空间分布。结果①K 和 H 组织中 TGF-β_1 mRNA 稳态水平明显高于 N 组和 S 组;②K 选择性Ⅰ型前胶原 mRNA 表达增强,而 H 组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原 mRNA 表达均增强。结论 TGF-β_1在 H 和 K 的发病机理中起了重要作用,K 和H 发生发展中具有不同的分子机理。     

转化生长因子β1对肾间质成纤维细胞胶原表达的影响

目的　探讨肾间质纤维化的机制。方法　体外培养大鼠肾间质成纤维细胞,采用Ｌ３Ｈ脯氨酸掺入法测定胶原合成及ＲＴＰＣＲ 技术观察转化生长因子β（ＴＧＦβ１） 对体外培养的大鼠肾间质成纤维细胞Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 表达的影响。结果　ＴＧＦβ１ 可促进肾间质成纤维细胞的３Ｈ脯氨酸掺入,且随着ＴＧＦβ１ 剂量的增加,３Ｈ脯氨酸掺入量增加,胶原合成增多。ＴＧＦβ１ 可促进Ⅰ和Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ 的表达,且在ＴＧＦβ１ 浓度２ ～１０ ｎｇ／ｍｌ 时ｍＲＮＡ 的表达量与浓度呈现正相关;在６ ～４８小时内与时间呈现正相关。结论　ＴＧＦβ１ 可能通过促进肾间质成纤维细胞胶原的合成及ｍＲＮＡ 的表达而参与肾间质纤维化。     

瘢痕疙瘩不同部位Ⅰ、Ⅲ型前胶原 mRNA的原位表达研究

目的基于瘢痕疙瘩浸润、增生和老化部组织形态学上的差异，为了明确瘢痕疙瘩不同部位及正常皮肤Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达是否存在差异。方法对４例瘢痕疙瘩和２例正常皮肤通过原位杂交方法，观察了Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达。结果瘢痕疙瘩的Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达比正常皮肤明显增强，尤以Ⅰ型为甚，导致Ⅰ／Ⅲ型前胶原的比率增高，且其表达在瘢痕疙瘩浅层多于深层，浸润及增生部多于老化部，浸润和增生部的表达无明显差别。结论瘢痕疙瘩的不同病理部位和正常皮肤Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达存在差异，是形成瘢痕疙瘩不同病理部位的原因之一。     

转化生长因子β对椎间细胞Ⅰ,Ⅲ型胶原基因表达的调节作用

探讨转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ,ＴＧＦ－β）对椎间盘Ⅰ,Ⅲ型胶原基因表达的调节作用。方法应用斑点杂交和原位杂交技术检测了ＴＧＦ－β１对椎间盘原代培养及传代培养的纤维环细胞,髓核细胞中Ⅰ型胶原ｍＲＮＡ的调节作用,采用ＶＩＤＡＳ软件计算杂交膜斑点及发校涂片中细胞的平均光密度值,进行胶原ｍＲＮＡ相对定量。结果（１）对于原代培养的椎间盘纤维环细胞Ⅰ型胶原ｍＲＮＡdisp     

TGF-β和α-SMA在瘢痕组织中的表达及相关性研究

目的 检测转化生长因子－β（ＴＧＦ－β１,ＴＧＦ－β２,ＴＧＦ－β３）在增生性瘢痕和表浅性瘢痕中的表达,探讨其对增生性瘢痕的形成及α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ表达的可能作用。方法 采用免疫组化法检测２８例增生性瘢痕,１９例表浅性瘢痕和１６例正常皮肤组织中ＴＧＦ－β和α－ＳＭＡ的表达水平,并按年龄,性别,病程分组进行比较及ＴＧＦ－β和α－ＳＭＡ相关性分析。     

转化生长因子-β1及其Ⅱ型受体在肝细胞癌中的基因表达

目的 探讨转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）及其Ⅱ型受体（ＴＧＦ－βＲⅡ）在肝细胞癌中的基因表达。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化技术,分别检测３０例肝癌组织和癌旁肝组织中ＴＧＦ－β１及ＴＧＦ－βＲⅡ在ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。结果 （１）ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ阳性表达,在肝癌组织中为２４／３０,癌旁肝组织中为２６／３０,Ｐ〉０．０５;但ＴＧＦ－β１蛋白水平在肝癌组织阳性表达低于癌旁肝组织（Ｐ〈０．０     

瘢痕疙瘩不同部位Ⅰ,Ⅲ型前胶原mRNA的原位表达研究

目的基于瘢痕疙瘩浸润，增生和老化部组织形态学上的差异，为了明确瘢痕疙瘩不同部位及正常皮肤Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达是否存在差异。方法 对４例瘢疙塔和２例正常皮肤通过原位杂交方法，观察了Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的表达。     

Effect of Sucrose on Collagen Metabolism in Keloid, Hypertrophic Scar, and Granulation Tissue Fibroblast Cultures

Sucrose has been used to treat wounds with excellent results and with minimal abnormal scarring. In this study the effects of sucrose on collagen metabolism in fibroblast culture was evaluated. Sucrose (5.5, 15, or 25 mM) was added to granulation tissue, hypertrophic scar, and keloid fibroblast cultures. mRNA levels and procollagen aminopropeptides for type I and III collagens in cell culture medium were studied. Sucrose decreased mRNA levels for proα1(I) and proα1(III) collagens in fibroblast cultures derived from hypertrophic scar and keloid. In normal granulation tissue fibroblast cultures, 5.5 mM sucrose increased mRNA levels for proα1(I) and proα1(III) collagen, and higher concentrations decreased them. The synthesis of type I collagen decreased dose-dependently in all cell strains, whereas the synthesis of type III collagen decreased only in granulation tissue fibroblasts. To conclude, in vitro high concentrations of sucrose down-regulate both collagen gene expression and synthesis in normal granulation tissue fibroblasts, whereas in fibroblasts derived from abnormal scar sucrose down-regulates only type I collagen gene expression and synthesis, changing the pattern of collagen metabolism toward normal.     

增生性瘢痕动物实验模型的建立与应用

目的建立由动物自身产生的增生性瘢痕实验模型.方法选用47只日本大耳白兔,在耳腹侧面制作6mm圆形全层皮肤缺损创面、1.5cm×4.5cm长方形创面以及耳背圆形创面共388个,进行组织学等多项观察.结果70%兔耳圆形创面可发生与人增生性瘢痕类似的增生块,增生块持续时间最长为150d;长方形创面增生块发生率为80%以上,持续时间已超过262d.增生块内有特征性的结节或漩涡状结构.创基注入TGF-β1、IFN-y,可以促进或抑制增生块的发生.原位杂交,查明内源性TGF-β1mRNA为强阳性表达.利用此模型证实成纤维细胞凋亡在病理性瘢痕发生、发展过程中起着重要的调控作用.结论兔耳可以产生与人增生性瘢痕类似的病理改变,可以用作瘢痕研究的实验模型.     

肾上腺素对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1、bFGF及Ⅰ型前胶原表达的影响

目的实验研究肾上腺素对体外培养人皮肤成纤维细胞中Ⅰ型前胶原、TGF—β1及bFGF表达的影响。方法实验采用RT-PCR检测。肾上腺素作用24h后bFGF、TGF-β1、人Ⅰ型前胶原的mRNA表达差异，并以ELISA检测bFGF、TGF-β1在肾上腺素作用24h后的蛋白表达差异。结果与对照组比较，肾上腺素上调bFGF mRNA及蛋白的表达和下调TGFβ1 mRNA及蛋白的表达；但在增生性瘢痕成纤维细胞中，0．20μmol／L的。肾卜腺素可显著下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，而在正常皮肤成纤维细胞中，0．05、0．1和0．2μmol／L的。肾上腺索均可下调人Ⅰ型前胶原mRNA水平的表达，且其差异有统计学意义。结论在增生性瘢痕成纤维细胞生长融合后早期（24h），肾上腺素可促进成纤维细胞bFGF的mRNA和蛋白的合成，降低TGF—β1的mRNA和蛋白的生成，降低Ⅰ型前胶原mRNA的表达。     

增生性瘢痕转化生长因子β及其受体的分布及表达

目的　探讨转化生长因子 β(TGF β)及其受体在增生性瘢痕形成中的作用机制。　 方法　收集临床手术切除后的正常皮肤组织 7例和增生性瘢痕组织标本 11例 ,用免疫组织化学和原位杂交的方法检测TGF β及其TGF β受体 (TGFR)Ⅰ、TGFRⅡ在组织中的定位分布、蛋白和mRNA表达。　结果　在正常皮肤组织中 ,与TGF β1 、TGF β2 、TGFRⅠ比较 ,TGF β3和TGFRⅡ呈较高表达 ;在增生性瘢痕组织中则呈现与正常皮肤组织中的表达相反的结果。与正常皮肤组织相比 ,增生性瘢痕组织中TGF β1 、TGF β2 和TGFRⅠ的蛋白和mRNA表达均明显增加 ,而TGF β3和TGFRⅡ的蛋白以及mRNA表达相对减少。　结论　创面愈合过程中TGF β及其受体不同水平的表达与增生性瘢痕的形成直接相关。     

增生性瘢痕中TGF—β和胶原酶,TIMP—1 mRNA表达的定量研究

目的 观察ＴＧＦ－β和胶原酶、ＴＩＭＰ－１ ｍＲＮＡ在增生性瘢痕中的表达,探讨ＴＧＦ－β对ＭＭＰ－１和ＴＩＭＰ－１表达的影响以及它们在ＨＴＳ形成中的作用。方法 采用原位杂交和图像分析技术,进行定性和定量分析。结果 增生性瘢痕组织中ＴＧＦ－β和ＴＩＭＰ－１表达较正常皮肤明显增高,平均积分光密度分别增加了８倍和７倍,产较胶原酶的表达明显增高,相关非常显著,ＴＧＦ－β表达与ＴＩＭＰ－１表达呈高度正相关。     

periostin在过度增生性瘢痕的表达及其与TGF-β1和受体的相关性

目的检测periostin在过度增生性瘢痕中的表达，研究其与TGF-β1和受体的相关性，探讨periostin与瘢痕过度增生的关系。方法采用RT-PCR法检测瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、正常皮肤组织中periostin、TGF-β1，及其受体Ⅰ、Ⅱ的mRNA表达，Western blot法检测periostin的蛋白表达。结果在基因水平，periostin在瘢痕疙瘩的表达高于正常皮肤，TGF-β1在瘢痕疙瘩的表达高于增生性瘢痕和正常皮肤，TGF-βRⅠ在瘢痕疙瘩的表达高于增生性瘢痕和正常皮肤，上述差异有统计学意义（P〈0．01）；TGF-βRⅡ的表达在3组间差异无统计学意义。在蛋白水平，periostin在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的表达均高于正常皮肤（P〈0．05）。periostin和TGF-β1的表达呈正相关（P〈0．01）。结论periostin在瘢痕疙瘩组织中表达增高，是瘢痕相关基因；其在瘢痕疙瘩形成中可能发挥重要作用，该作用与TGF-β1密切相关。