IL-1预刺激对反义IRAK-2寡核苷酸抑制NF-κB活化的影响

目的 研究白介素-1（IL-1）预刺激对反义受体相关激酶-2寡核苷酸（IRAK-2 ODN）抑制IL-1激活核因子-kappa B（NF-κB）的影响。方法 实验分IL-1预处理组和非预处理组,以脂质体介导反义 IRAK-2 ODN转染293细胞,以夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB的含量。结果 IL-1非预处理组反义IRAK-2 ODN不能抑制NF-(B活化,而预处理组NF-κB活化受到明显抑制（4 (g 反义 IRAK-2 ODN与细胞共孵育8 h时,NF-κB的光密度值从ODN转染前的0.835±0.013下降到转染后的 0.261±0.008）,且这种抑制作用具有时间（5~24 h）和剂量（1~8 (g）依赖性。结论 IL-1预刺激在反义IRAK-2 ODN抑制IL-1诱导的NF-κB活化中起决定性作用。     

白介素-1受体相关激酶-2和磷脂酰肌醇 3-激酶协同调控白介素-1诱导的NF-κB 活化

目的研究白介素1受体相关激酶2(IRAK-2)和磷脂酰肌醇 3-激酶(PI 3-激酶)在白介素-1(IL-1)诱导核因子- κB(NF-κB)活化中的作用.方法 Lipofectin介导反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸转染HepG2细胞后,用逆转录PCR法检测IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶 mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测NF-κB的活化.结果 (1) 反义IRAK-2寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸分别抑制IRAK-2 mRNA和PI 3-激酶mRNA的表达;(2)反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸部分抑制NF-κB活化;(3)与反义IRAK-2寡核苷酸或反义PI 3-激酶寡核苷酸单独转染HepG2细胞相比,反义IRAK-2 寡核苷酸和反义PI 3-激酶寡核苷酸共转染HepG2细胞对NF-κB的抑制作用明显增强.结论在HepG2细胞中,IRAK-2和PI 3-激酶都调控NF-κB活化但都不能完全激活NF-κB,IRAK-2和PI 3-激酶在调控NF-κB 活化时有协同作用.     

bcl-2硫代反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞对顺铂的敏感性

目的　研究凋亡抑制基因bcl 2硫代反义寡核苷酸 (S ODN)转染T2 4细胞后对顺铂药物敏感性影响。方法　将培养细胞分为 6组 :反义S ODN组 ,正义S ODN组 ,反义S ODN +顺铂组 ,正义S ODN +顺铂组 ,顺铂组和对照组。应用脂质体法介导bcl 2正义、反义S ODN转染T2 4细胞。通过免疫细胞化学方法观察细胞内BCL 2的蛋白表达 ,RT PCR方法检测细胞内bcl 2mR NA的相对表达量 ,MTT法测经顺铂 (cis platinum)处理的各组细胞的生成率 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡率。结果　bcl 2反义S ODN处理过的T2 4细胞中BCL 2蛋白和bcl 2mRNA表达明显下降。顺铂对反义S ODN组细胞的半抑制浓度 (IC50 )为 (2 .2 5± 0 .0 9) μg/ml显著低于正义S ODN组 (5 .83± 0 .15 ) μg/ml和对照组 (6 .11± 0 .2 1) μg/ml(P <0 .0 1)。顺铂处理反义S ODN组细胞的凋亡率显著高于其它组。结论　bcl 2反义S ODN能显著抑制T2 4细胞中BCL 2蛋白的表达并增强T2 4细胞对顺铂的药物敏感性     

韧粘素反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨韧粘素 (TN)反义寡核苷酸 (ODN)对培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用。方法采用细胞计数及快速竞争性逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)等方法 ,观察不同剂量 ( 5、10、2 0 μg/ml)TN反义ODN和正义ODN对体外培养大鼠VSMC的增殖以及TNmRNA表达水平的影响。　结果TN反义ODN可有效抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,作用呈剂量依赖性 (反义组 5、10、2 0 μg/ml剂量细胞计数分别为 10 5/ml× ( 4 .99± 0 .2 1)、( 4 .0 8± 0 .14 )、( 2 .85± 0 .39) ,对照组为 10 5/ml× ( 5 .95± 0 .41) ,(P <0 .0 5 ) ;TN反义ODN亦可下调TNmRNA表达水平 (反义组 0 .32± 0 .0 5 ,对照组为 0 .5 2± 0 .0 8;P <0 .0 1) ;而TN正义ODN则无上述作用。　结论TN反义ODN可能通过下调TNmRNA表达水平而抑制血管平滑肌细胞的增殖。     

反义寡核苷酸对内毒素刺激的巨噬细胞血栓素A_2合成的影响

目的　筛选有效抑制内毒素刺激的巨噬细胞血栓素合酶基因表达和血栓素 A2 生成的反义寡脱氧核苷酸片段。方法　人工合成的 3条反义寡核苷酸片段 (ODN 、ODN 、ODN )和内毒素刺激的大鼠腹腔巨噬细胞共温育 2 4h,以放射免疫方法检测血栓素 A2 的稳定代谢产物血栓素 B2 的含量 ;以分子杂交技术检测血栓素合酶m RNA的表达水平。结果　 ODN 组血栓素 B2 的含量为 (6 9.7± 10 .9) pg/ μg细胞蛋白 ,明显低于对照组的 (10 0 .6± 2 8.6 ) pg/ μg细胞蛋白 (P<0 .0 5 ) ;且血栓素合酶 m RNA水平也明显低于对照组。ODN 组、ODN 组血栓素 B2水平和血栓素合酶 m RNA水平均与对照组无明显差异。结论　 ODN 能有效抑制内毒素刺激的巨噬细胞血栓素A2 的合成。     

TLR4 及MD2 反义基因对内毒素诱导的肺泡Ⅱ型细胞活化的影响

目的 观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)及myeloid differentiation protein 2(MD2)反义基因对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响. 方法 培养的肺泡Ⅱ型细胞分为:正常细胞(对照)组、LPS组、LPS+转染空载体组、LPS+转染TLR4反义基因组、LPS+转染MD2反义基因组、LPS+转染TLR4-MD2反义基因组(n=8).Northern blot检测转染细胞的TLR4 及MD2 mRNA表达,Western blot检测转染细胞TLR4及MD2蛋白表达,电泳迁移率改变法检测 NF-κΒ的活性,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量. 结果 与对照组比较,LPS刺激后的细胞TLR4及MD2 mRNA和蛋白表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6的生成均显著增加(P<0.01);而转染反义基因组细胞与其他LPS刺激组比较,TLR4 及MD2 mRNA和蛋白的表达、NF-κB活性及TNF-α和IL-6的含量均明显降低(P＜0.01). 结论 TLR4及MD2反义基因能有效抑制LPS诱导的肺泡Ⅱ型细胞的活化.     

反义寡聚核苷酸治疗支气管哮喘的实验研究

目的探讨反义寡聚核苷酸治疗支气管哮喘的可能性及效果。方法根据小鼠IL-5cDNA序列设计合成反义寡聚核苷酸片段,用T4噬菌体多核苷酸激酶标记反义寡聚核苷酸的5′端,观察硬脂胺(SA)脂质体对反义寡聚核苷酸的转染效率的影响。用卵蛋白和氢氧化铝复制哮喘模型。用聚酰纤维分离小鼠脾T淋巴细胞进行体外培养并导入由阳离子脂质体携带的不同浓度的反义寡聚核苷酸,观察其对T淋巴细胞合成IL-5的影响。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞培养上清液中IL-5浓度。结果SA脂质体能显著提高反义寡聚核苷酸的转染效率,1∶15m/m(反义寡聚核苷酸和SA脂质体质量比)时转染效率最佳,提高反义寡聚核苷酸转染效率12倍。未经卵蛋白刺激的正常鼠和哮喘鼠T淋巴细胞培养上清液中未测到IL-5,经卵蛋白刺激后,T淋巴细胞培养上清液中IL-5含量明显增高。导入不同浓度的反义寡聚核苷酸(10、20及30μmol/L)后,脾T淋巴细胞合成IL-5明显降低,细胞培养上清液中IL-5含量由(44.60±6.23)pg/ml分别降低到(30.70±7.362)、(17.20±6.181)和(8.16±2.34)pg/ml,抑制IL-5合成百分率分别为31.17%、61.43%和81.7%。结论反义寡聚核苷酸可明显抑制IL-5的合成,且呈明显的量效关系。支持其通过抑制致敏小鼠T淋巴细胞IL-5的转录而抑制其合成,为反义基因治疗哮喘提供了依据     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对人脑胶质瘤细胞U251的作用

目的:研究缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以H IF-1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性。方法:设计合成针对H IF-1α的寡核苷酸片段.实验分6组:空白对照组、脂质体组、正义组和反义组(1.0μmol/l、2.5μmol/l和5.0μmol/l)。利用脂质体包裹瞬时转染人胶质瘤细胞系U251,MTT法检测细胞增殖;采用AO/EB染色及末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化。结果:转染后各组细胞增殖抑制率分别为(1.30±0.05)%、(1.98±0.35)%、(2.47±0.48)%、(22.30±2.08)%、(33.60±4.19)%和(56.20±4.22)%。转染H IF-1α反义寡核苷酸组较各对照组相比细胞增生下降,凋亡增加(P<0.01)。结论:H IF-1α反义寡核苷酸转染人胶质瘤U251细胞系可以抑制细胞增生并诱导胶质瘤细胞凋亡,H IF-1α有望成为一个极具潜力的肿瘤治疗的靶点。     

红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白介素-8与谷胱甘肽的影响

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞(16-HBE)表达炎症介质白介素-8(IL-8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响.将传代后的细胞按24、36、48 h 3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的含量;应用免疫印迹实验(Western印迹)检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γ-GCS-HS)蛋白表达.结果红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE上清中IL-8的含量;红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以下调H2O2(0.01 mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NF-kB、AP-1的活性;红霉素(5 μg/ml)预孵育48 h抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γ-GCS的含量(3.46±0.41)以及γ-GCS-HS蛋白表达、γ-GCS-HS 启动子区域AP-1转录活性.结论红霉素通过下调NF-κB、AP-1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL-8的释放,进而影响GSH及γ-GCS的合成调控.     

转化生长因子β1对大鼠腹膜间皮细胞IL-8表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)IL-8表达的影响及机制.方法 10 μg·L-1 TGF-β1刺激体外培养的RPMCs,RT-PCR法检测IL-8的表达;体外转染Smad7和pcDNA3空载体至RPMCs后,观察10 μg·L-1 TGF-β1刺激RPMCs对IL-8和p38表达的影响.采用p38抑制剂SB203580(10 μmol·L-1)预处理RPMCs后,加入10 μg·L-1TGF-β1,观察阻断p38信号通路对IL-8表达的影响.结果 与0 h刺激组相比,3、6、12 h TGF-β1刺激组IL-8表达明显增加(P＜0.05或P＜0.01),其中3 h达高峰.上调表达Smad7以及SB203580均能显著抑制TGF-β1刺激RPMCs产生IL-8(P＜0.01).与正常对照组比较,TGF-β1刺激磷酸化p38(p-p38)的表达显著增加(P＜0.05),与TGF-β1刺激组比较,外源性Smad7转染组p-p38的表达显著减弱(P＜0.05).结论 TGF-β1促进RPMCs IL-8的表达,其机制可能是TGF-β1通过活化p38磷酸化来实现的.     

脑卒中患者血清IL-1β、IL-1Ra、IL-1Ra/IL-1β比值的监测及临床意义

目的:研究白细胞介素1β( IL - 1β)、白细胞介素1受体拮抗剂( IL - 1 Ra)以及IL -1 Ra/IL - 1β比值在脑卒中患者血清中的水平变化以及IL- 1β与IL - 1 Ra水平之间的相关关系。方法:用酶联免疫吸附试验检测了5 5例脑梗死患者、48例脑出血患者和60例对照者血清IL - 1β、IL - 1 Ra和IL- 1 Ra/IL - 1β水平。结果:脑梗死组和脑出血组患者血清IL - 1β水平均显著高于正常对照组( P<0 .0 1 ) ;脑梗死组和脑出血组患者血清IL - 1 Ra以及IL - 1 Ra/IL - 1β水平显著低于正常对照组( P<0 .0 1 ) ;脑梗死组和脑出血组患者血清IL- 1β和IL - 1 Ra水平无明显相关性( P>0 .0 5 )。结论:IL - 1β在脑卒中发病过程中可能起着促进作用,而IL - 1 Ra可能起着抑制作用;两者的免疫失调状态可能与脑卒中密切相关;IL - 1 Ra/IL - 1β比值可作为脑卒中病情监测的指标     

白细胞介素-1α、LDL及HDL对血管内皮细胞VCAM-1表达的影响及意义

目的 :探讨白细胞介素 - 1α(IL - 1α)、低密度脂蛋白 (LDL)、高密度脂蛋白 (HDL)对血管细胞粘附分子 - 1(VCAM -1)表达的影响及在动脉粥样硬化发生中的意义。方法 :用细胞培养、免疫荧光定量检测技术观察不同分组条件下白细胞介素- 1α、氧化低密度脂蛋白、高密度脂蛋白对血管内皮细胞VCAM - 1表达的影响 ,并进行比较分析。结果 :IL - 1α组VCAM - 1表达显著高于对照组 ,HDL组VCAM - 1表达显著低于单核细胞粘附状态下对照组 ,而oxLDL组VCAM - 1表达与对照组无显著性差异。单纯培养对照组VCAM - 1表达显著低于单核细胞粘附状态下对照组。结论 :IL - 1、单核细胞粘附可显著增强内皮细胞VCAM - 1表达 ,HDL可显著抑制单核细胞粘附状态下VCAM - 1表达 ,oxLDL对VCAM - 1表达无显著影响     

IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1的影响

目的：探讨IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1的影响。方法：将大鼠随机分为正常对照组（A组,n=10）、阿霉素肾病组（B组,n=10）、阿霉素肾病IL-1Ra治疗组（C组,n=10）、阿霉素肾病生理盐水治疗组（D组,n=10）,2周后检测尿24hUP、血清IL-6、IL-10、IL-13、IL-1、Al、T—ch、BUN、Scr。结果：B、C、D组血清IL-6、IL-10、IL-13水平明显高于A组（P〈0．01）,IL-1Ra治疗后,24hUP、T—ch较B、D组及C组IL-1Ra治疗前明显降低（P〈0．01）,Al、IL-6、IL-10、IL-13水平均较B、D组及C组IL-1Ra治疗前增高（P〈0．05）．IL-1血清水平较B组、D组、C组IL-1Ra治疗前明显降低（均P〈0．01）,接近A组水平（P〉0．05）。结论：IL-1Ra对阿霉素肾病大鼠有明显治疗作用的同时能提高抗炎细胞因子IL-6、IL-10、IL-13的血清水平。     

IL-1ra抑制IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1

【目的】明确IL-1ra是否对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1有抑制作用及生物学意义,探讨表达ICAM-1在IL-1α诱导的外周血单个核细胞与眼眶成纤维细胞黏附中所起的作用。【方法】以IL-1α或/和IL-1ra处理培养的Graves’眼病(GO)患者和正常人眼眶成纤维细胞。用半定量RT-PCR法检测IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1 mRNA的影响;用Western blot法和细胞免疫化学法检测IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1蛋白的影响;用荧光显微镜检测预先标记的外周血单个核细胞(PBMC)与培养的眼眶成纤维细胞的黏附能力。用抗ICAM-1中和抗体来显示ICAM-1在IL-1α诱导的黏附过程中所起的作用。【结果】IL-1ra抑制IL-1α诱导的GO患者和正常人眼眶成纤维细胞表达ICAM-1 mRNA和蛋白呈剂量依赖性;IL-1ra抑制IL-1α诱导的PBMC与眼眶成纤维细胞的黏附呈浓度及时间依赖性。ICAM-1 mRNA和蛋白被抑制的方式与眼眶成纤维细胞受IL-1ra处理后与PBMC黏附的减弱明显平行。而且,抗ICAM-1单克隆抗体抑制PBMC黏附到眼眶成纤维细胞呈浓度依赖性。【结论】IL-1ra能够在mRNA和蛋白水平抑制IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1,IL-1ra抑制IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1可能在减弱IL-1α诱导的PBMC黏附到成     

白细胞介素-1B-511和白细胞介素-1RN基因多态性与消化性溃疡的关系

目的 研究白细胞介素-1B-511(IL-1B-511)和白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RN)基因多态性是否与消化性溃疡的易感性有关.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测217例消化性溃疡患者(十二指肠溃疡患者115例、胃溃疡患者102例)和110例正常对照组基因多态性.结果十二指肠溃疡患者IL-lRN*2基因频率明显高于正常对照组(18.7% vs 9.5%,=0.005),L-1RN L/2和2/2基因型的OR为1.93,5%CI为1.04～3.58,在幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染阳性的人群中,这种基因多态性的影响表现更为明显,R为2.18(95%CI=1.01～4.68).十二指肠溃疡组和胃溃疡组IL-lB-511基因频率及基因型和正常对照组比较均无统计学意义(P>0.05).Logistic回归分析显示IL-lRN *2等位基因及H.pylori感染是十二指肠溃疡发生的独立危险因素,其OR分别为3.04(95%CI=1.44～6.40)和15.27(95%CI=5.42～43.00).结论 IL-1RN *2等位基因与十二指肠溃疡的易感性有关,IL-lRN *2与H.pylori感染是十二指肠溃疡发生的独立危险因素,并发挥着协同作用.     

白介素-8及1β、硫酸脱氢表雄酮、前列腺素 E2共同引起白鼠宫颈组织的生化改变

目的：观察IL-8、IL-1β、硫酸脱氢表雄酮（ DHEA-S）、前列腺素E2（ PGE2）对宫颈组织的作用机制。方法5组数量、体型、孕龄等均相同的孕白鼠分别受试于安慰剂或阴道栓剂（3次/d，连用3d）。分别应用人重组IL-8（100ng），IL-1β（200ng）， DHEA-S（10mg），PGE2（1mg）。白鼠均连续应用3d。宫颈坚实度、扩张度及含水量在末次给药24h后监测，用抗白鼠RT2抗体标记的宫颈组织行白细胞浸润检测，苏木苏-伊红染色后检测相关胶原浓度，胶原酶、凝胶酶及弹性蛋白酶的活性在100mg宫颈组织均浆中检测。结果含水量在所有受检宫颈组织中增加意义重大。 IL-8、IL-1β、前列腺素受试组的中性粒细胞数第3次给药后明显增加，硫酸脱氢表雄酮受试组的中性粒细胞数无明显改变。第1天用药后的IL-8，IL-1β和PGE2受试组胶原含量显著降低。第3天用药后，DHEA-S受试组胶原含量明显降低。2次用药后，除外对照组及前列腺素受试组，各组胶原酶活性均明显增高，所有受试组凝胶酶活性均增高。弹性蛋白酶同凝胶酶。结论白鼠宫颈的成熟由不同机制引发。细胞因子，如IL-8，IL-1β，DHEA-S，PGE2等在宫颈成熟中起重要作用。     

IL-1B及IL-1RN基因多态性与江苏地区宫颈癌遗传易感性相关

目的：探讨炎症因子IL-1B（T-31C和C-51IT）及其拮抗基因IL-1RN基因多态性与宫颈癌遗传易感性的关系。方法：采用病例对照研究,对经组织学确诊的宫颈癌新发病例273例按年龄和城乡频数匹配正常对照402例,以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法进行多态性检测,比较不同基因型与宫颈癌发病风险的关系。结果：在调整年龄、城乡等因素后,携带-511CT基因型比携带cc基因型个体发生宫颈癌的危险性增加93％（调整OR=I．93,95％CI=1．00．3．72）;携带-511TT基因型比携带-511CC基因型个体发生宫颈癌的危险性增加115％（调整OR=2．15,95％CI=1．02～4．53）。分层分析表明,携带IL-1B T-31C变异基因型的个体发生宫颈癌的风险仅在年龄≥50岁（调整OR=1．72,95％CI=1．01．2．93）、妊娠次数≥2次（调整OR=1．83,95％CI=1．07—3．11）和农村地区女性（调整OR=1．63,95％CI=1.04—2．54）中显著。IL-1RN各基因型在病例组和对照组中分布的差异均无统计学意义。结论：IL-1BC-511T多态性可能与江苏地区妇女的宫颈癌易感性相关。     

肉豆蔻不同炮制品对小鼠肠推进及药物性腹泻的影响

对肉豆蔻不同炮制品对小鼠小肠推进及药物性腹泻的影响进行了实验观察。结果表明肉豆蔻经煨制后可对抗番泻叶及抗蓖麻油的致泻作用,且肉豆蔻的炮制品与生品比较,能明显抑制小鼠小肠推进运动,并能抑制新斯的明引起的小肠推进功能亢进。