PAX-5在小细胞肺癌和淋巴瘤诊断中的意义

目的 探讨B细胞特异性激活蛋白(PAX-5)在淋巴瘤及小细胞肺癌诊断中的应用价值.方法 分析应用免疫组化技术得出明确诊断、且进行了PAX-5染色的70例淋巴瘤(34例非霍奇金B细胞淋巴瘤、36例霍奇金淋巴瘤)及33例肺小细胞癌的病理结果,总结其在实际诊断工作中的意义.结果 PAX-5在非霍奇金B细胞淋巴瘤瘤细胞核中均呈弥漫强( ),且阳性率及阳性强度均高于CD79a;在经典型霍奇金淋巴瘤中,PAX-5阳性细胞的大小与CD30阳性细胞对应,并且其阳性强度明显弱于周围B淋巴细胞,此为重要的判断依据.33例肺小细胞癌中,22例PAX-5( ),其阳性细胞的百分率和阳性强度并不优于Syn和CD56染色,但确有Syn和CD56均(-)仅PAX-5阳性的小细胞癌.结论 PAX-5是CD20、CD79a阴性B细胞淋巴瘤的重要诊断依据,其阳性表达率高于CD79a;PAX-5在霍奇金淋巴瘤的诊断和鉴别诊断中具有重要意义,在肺小细胞癌诊断中可作为Syn和CD56阴性时的补充.     

类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤小鼠模型的免疫学特征

本研究建立类似人弥漫型大B细胞淋巴瘤的BALB／c小鼠模型并探索其免疫学特征。将鼠源性B淋巴瘤细胞株（A20细胞）接种于同源BALB／c小鼠以建立B细胞淋巴瘤鼠模型。实验分为3组：成瘤小鼠组,未成瘤小鼠组和正常小鼠组（对照组）。用流式细胞术检测肿瘤细胞CD抗原表达及成瘤小鼠、未成瘤小鼠和对照正常小鼠的外周血和脾脏的T／B淋巴细胞亚群比例。结果表明：在成功构建病理学形态类似人弥漫大B细胞淋巴瘤的BALB／c鼠模型肿瘤组织中,检测到CD3、CD4、CD8、CD19、CD30阳性细胞的比例分别为（49．27±23．75）％,（6．07±3．65）％,（51．2±23．1）％,（67．06±16．39）％,（37．93±17．03）％,与接种前A20细胞相比,其CD3和CD8阳性细胞比例显著升高,CD19阳性表达比例显著下降（P〈0．05）。成瘤小鼠外周血淋巴细胞亚群阳性表达比例较正常小鼠有显著差异,其CD3和CD4阳性细胞比例显著降低（P〈0．05）。未成瘤小鼠脾脏淋巴细胞亚群的阳性表达比例与正常小鼠相比,CD3、CD4、CD8阳性细胞比例降低,而CD19阳性细胞比例升高（P〈0．05）。结论：本研究为在有免疫功能的小鼠体内进行B细胞淋巴瘤相关研究提供了免疫相关实验依据。     

免疫组化结果误判导致淋巴瘤误诊三例分析

目的 提高对正确分析判断免疫组化结果的重要性的认识.方法 对3例淋巴瘤误诊病例进行复习,并增加相关抗体标记予以鉴别诊断.结果 例1为淋巴结经典霍奇金淋巴瘤,富淋巴细胞型(LRCHL),误诊为滤泡性淋巴瘤与形态学观察遗漏R-S样细胞以及误判免疫组化标志BCL-2、CD20有关,即将BCL-2、CD20阳性的非肿瘤细胞误判为肿瘤细胞;误诊为结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤与免疫组化标志误判有关,把围绕瘤细胞的背景小淋巴细胞CD20阳性误判为R-S样大细胞CD20阳性,将CD30阳性的肿瘤性大细胞误判为活化性B淋巴细胞.例2为急性髓系白血病,误诊为T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL),主要由于对瘤细胞表达非特异性抗体TDT、CD7、CD43的意义认识不足.例3为胸腺瘤B1型误诊为T-LBL,主要与抗体CK标记不理想而遗漏了肿瘤性上皮细胞,将表达TDT、CD99的反应性细胞误认为肿瘤细胞,以及对Ki-67表达率的意义认识不足有关.结论 淋巴瘤的诊断建立在形态学、免疫组化标志、临床资料和遗传学分析基础上,免疫组化结果的正确分析判断对淋巴瘤确诊至关重要.     

原发性纵隔(胸腺)大B细胞性淋巴瘤3例临床病理分析

目的 探讨原发性纵隔(胸腺)大B细胞性淋巴瘤(PMBL)的临床病理特点、诊断与鉴别诊断及预后.方法 回顾性分析3例PMBL的临床病理和免疫表型特点,并复习相关文献.结果 3例PMBL中男性2例,女性1例.其中2例临床主要表现为纵隔肿块,其中1例有颈部淋巴结转移,另1例表现为胸骨肿块.光镜下可见大量异型淋巴细胞弥漫浸润,伴不同程度的硬化性纤维性间质背景,瘤细胞被硬化的胶原纤维束分割;瘤细胞中等偏大,胞质丰富透亮,胞核圆形或椭圆形,其中可见少量呈分叶状异型核的大细胞.免疫组化:肿瘤细胞CD20和CD79a均(+),CD3和CD5均(-).其中2例CD30(+),1例CD23(+);Ki-67阳性指数＞70％.结论 PMBL是一种少见的非霍奇金淋巴瘤,形态学表现多种多样,光镜下易误诊,诊断需依靠组织病理学特点结合相关免疫组化标记.     

EBV诱发淋巴瘤的组织病理学观察及肿瘤发生来源鉴定

目的 观察EB病毒(EBV)在人淋巴细胞/SCID嵌合体小鼠(hu-PBL/SCID)体内诱发肿瘤的病理形态，检测诱发瘤的免疫标志和人特异性Alu序列，确定EBV诱发肿瘤的性质、类型和来源。方法 从无偿义务献血员取外周静脉血分离淋巴细胞(PBL)并将人PBL移植到SCID小鼠体内，再经腹腔注射EBV悬液进行实验感染。观察4月后处死动物进行病理解剖，取小鼠体内肿瘤进行组织病理学观察，以及免疫组化染色、原位分子杂交。结果 在34只存活的hu-PBL/SCID嵌合体小鼠中，有24只小鼠诱发出肿瘤。诱发瘤常见于小鼠腹腔后壁和纵隔，呈结节状实体瘤。光学显微镜下观察肿瘤细胞呈圆形，体积较大，弥漫排列，为大裂一无裂混合细胞，伴有浆样淋巴细胞和免疫母细胞样形态。电子显微镜观察瘤细胞核为圆形或不规则状，核内可见成群或散在的EB病毒颗粒。诱发瘤免疫组化染色结果为人类白细胞共同抗原CD45(LCA)阳性，B细胞标记CD20(L26)阳性，T细胞标记CD3(PSI)和CD45RO(UCHL-1)全为阴性。以人Alu序列为探针标记地高辛进行原位分子杂交，肿瘤细胞核显阳性信号。结论 在人淋巴细胞/SCID嵌合体小鼠建立了EBV诱发性肿瘤模型，病理分类是非何杰金氏恶性淋巴瘤(大裂-无裂混合细胞型)，肿瘤起源于移植的人B淋巴细胞。     

肠道淋巴瘤临床病理、免疫表型及与EB病毒相关性的研究

目的研究肠道非霍奇金淋巴瘤的临床病理、免疫表型及与EBV感染的相关性。方法应用多种抗体标记B淋巴细胞(CD20，CD79a，CD45RA，k，λ，CD5，CD10，bcl-2，cyclin D1)和T淋巴细胞(CD3g，CD8，CD45RO，CD56，GramB，TIA)，同时进行细胞增殖活性的检测(Ki-67)、免疫组织化学染色(SABC法)、EBV寡核苷酸探针(EBER)原位杂交。结果60例中，免疫组化证实B细胞性淋巴瘤48例(80％)，T细胞性淋巴瘤12例(20％)。EBV—EBER原位杂交40例中6例阳性表达，均为T细胞性淋巴瘤，阳性细胞占肿瘤细胞的30％～80％，34例B细胞性淋巴瘤：EB病毒检测阴性。结论肠道淋巴瘤以B细胞淋巴瘤多发，并以惰性的黏膜相关性边缘区B细胞性淋巴瘤多发，与EBV无相关性。肠道T细胞性淋巴瘤侵袭性较强，且与EBV相关性较高。     

CD45RO、CD3阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤1例报告及文献复习

目的：报告1例CD45RO、CD3阳性表达的弥漫性大B细胞淋巴瘤．并结合文献讨论弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床特征、病理特点、治疗和预后因素。方法：回顾1例弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理资料、HE染色、免疫组化和基因重排检测结果。结果：患者女性，32岁，肿块位于右颈部，镜下瘤细胞形态多样性，核大于正常淋巴细胞2倍以上，免疫组化显示瘤细胞膜除CD45、CD20、CD79a阳性外，CD45RO和CD3也呈弥漫强阳性。结论：弥漫性大B细胞淋巴瘤一般表达B细胞标记，也可同时表达T细胞标记。     

姥鲛烷联合鼠源性B淋巴瘤A20细胞株诱导淋巴瘤小鼠模型的实验研究

目的建立有一定免疫功能的B细胞淋巴瘤小鼠模型。方法 38只BALB/c小鼠,其中32只小鼠尾静脉注射1×106个A20细胞后分为实验组16只和对照组16只,分别腹腔注射姥鲛烷0.5mL和生理盐水0.5mL,观察2组小鼠成瘤情况、时间、部位和成瘤率,并分别取各脏器组织行组织病理检查,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织免疫表型。另6只小鼠作为空白对照组,采用流式细胞术检测3组小鼠的免疫功能。结果对照组小鼠成瘤率为43.8%,成瘤时间为(72.6±8.7)d;实验组小鼠成瘤率为87.5%,成瘤时间为(32.5±4.1)d,差异有统计学意义(P<0.05);荷瘤鼠的免疫功能未明显改变,实验组成瘤小鼠CD19阳性细胞表达率为(90.01±3.51)%,对照组为(87.79±5.62)%,差异无统计学意义(P>0.05);实验组、对照组小鼠第30天NK细胞数(40.7±2.2和60.3±1.9)均明显高于空白对照组(15.1±0.6)(P<0.05),对照组高于实验组(P<0.05)。结论姥鲛烷联合A20细胞株成功构建了有一定免疫功能的播散性B细胞淋巴瘤小鼠动物模型,成瘤率高,成瘤时间短,且保留了较好的免疫功能。     

美罗华治疗后CD20阴性的弥漫性大B细胞性淋巴瘤1例

患者男性,53岁.右颈部包块2月余,直径约1.5 cm,无发热,2～3天后长至7 cm,抗炎治疗无效.在当地医院活检疑为非霍奇金淋巴瘤.上级医院会诊:考虑B细胞淋巴瘤(弥漫性大B细胞性淋巴瘤可能性大).化疗2个疗程,颈部淋巴结缩小,但彩超示全身仍多处淋巴结肿大,遂到本院会诊.镜检:破碎的淋巴组织内可见多灶出血,大部分细胞形态模糊,不易观察.仅局部区域细胞中等偏大,可见核仁,染色质粗,核分裂可见.免疫组化:CD20弥漫(+)(图1),CD79a(+);CD3和bcl-2散在细胞(+);局灶区域Ki-67阳性细胞数＞40%.     

TRAF1在霍奇金淋巴瘤细胞中的表达和作用机制的探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)1以及CD30-TRAF1信号通路在B细胞件霍奇金淋巴瘤细胞中的作用.方法分别采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测B细胞性霍奇金淋巴瘤细胞株TRAF1 mRNA和蛋白质表达水平,并进一步研究CD30信号活化对TRAF1表达的作用.采用RNA干扰技术研究TRAF1沉默对霍奇金淋巴瘤细胞存活的影响,并通过TransAM方法定量分析核转录因子(NF)-κB的DNA结合活性的变化.通过Western blot法测定NAPK/ERK信号通路中JunB蛋白的表达.结果 B细胞性霍奇金淋巴瘤细胞株LA28和KM-H2细胞中TRAF1在mRNA和蛋白质水平均表达.CD30配体作用后L428细胞中TRAF1 mRNA相对表达水平自3.50±0.20上调至7.26±0.23;蛋白相对表达水平自2.31±0.35上升至4.53±0.55.TRAF1沉默后凋亡细胞百分率由(5.7±1.2)%上升至(27.7±5.8)%,并伴随p50和RelA活力的下降.JunB的表达在TRAF1沉默细胞中未发生明显变化.结论 TRAF1在B细胞系来源的霍奇金淋巴瘤细胞中表达增加,并受到CD30信号通路活化的调控.TRAF1为介导经典性NF-κB活性的关键性调节分子,参与霍奇金淋巴瘤细胞的抗凋亡活性.     

Osteoblast differentiation; Hyperglycemia; Osmotic stress; Diabetes 散发性伯基特及伯基特样淋巴瘤临床病理分析

目的：探讨伯基特淋巴瘤（BL）的临床病理特征、免疫表型及鉴别诊断。方法：运用组织病理学、免疫组织化学和EBER原位杂交，对13例BL及7例伯基特样淋巴瘤（BLL）患者的肿瘤组织进行检测．并复习相关文献。结果：20例散发性病例中，病变部位在淋巴结内者，位于颈部淋巴结6例．颌下淋巴结4例，锁骨下淋巴结1例，腋下淋巴结1例；病变部位在淋巴结外者，位于回盲部3例，精索、睾丸、结肠、肌肉、前列腺各1例。光镜下可见瘤组织由单一的、弥漫浸润的中等大小圆细胞组成，其中散在分布着吞噬细胞碎片的组织细胞，呈“星空”样改变。免疫表型检测示，瘤细胞弥漫表达CD20和CD79α，部分表达CD10，〉90％的瘤细胞Ki-67阳性，而CD3、CD43、bcl-2和TdT呈阴性。EBER原位杂交发现，3例瘤细胞呈阳性。结论：散发性BL属高度恶性肿瘤，确诊依赖于病理组织学与免疫组化标记。     

抗CD20单克隆抗体诱导B淋巴瘤细胞株凋亡的实验研究

本研究探讨抗CD20单克隆抗体体外诱导B淋巴细胞株凋亡情况及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率;用流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namalwa细胞经Rituximab 20μg／ml作用24小时后Bcl-2的表达情况。结果表明：抗cD20单克隆抗体对Daudi、Raft和Namalwa淋巴瘤细胞有轻度的抗增殖作用,对Ramos细胞无抗增殖作用,抗增殖作用与单克隆抗体作用浓度无关。抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3％-10％之间波动。Na—malwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后,Bcl-2蛋白表达下调。结论：单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa和Raji细胞株有轻度抗细胞增殖作用,但与作用浓度和作用时间无明显相关。单药抗CD20单克隆抗体对Daudi、Namalwa、Raji和Ramos细胞株有微弱的诱导凋亡作用。Namalwa和Raji细胞株经抗CD20单克隆抗体作用24小时后Bcl-2表达下调,这可能是抗CD20单克隆抗体增敏细胞毒药物作用的机制之一。     

抗CD20单克隆抗体提高淋巴瘤细胞对X射线的敏感性

本研究观察抗CD20单克隆抗体制剂利妥昔（RTX）对X射线所致的人淋巴瘤细胞损伤的影响。用SRB法检测细胞存活,FITC-Annexin—V／PI试剂盒测定细胞凋亡,透射电子显微镜观察细胞形态,激光共聚焦显微镜检测胞质内钙离子浓度。结果显示,RTX可明显增强X射线时的肿瘤细胞生长抑制作用（P〈0．05）;与单照射组比较,RTX可增加辐射诱导的细胞凋亡;透射电子显微镜下可见多种凋亡表现;细胞内[Ca^2＋]离子明显升高。结论：RTX可提高淋巴瘤细胞对X射线的辐射敏感性,诱导较多细胞的凋亡,并且与细胞内钙离子的变化有关。     

利用SCID小鼠模型评价-80℃冷冻人血小板的体内生存能力

为了评估人血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力,取新鲜机采血小板加入二甲基亚砜（DMSO）,使其终浓度为5％,于～80℃保存10天后,取出立即放置于37℃水浴箱中快速解冻,并离心浓缩10倍。用带有超细针头的胰岛素注射器抽取浓缩血小板1130μl,经尾静脉注入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内,在注入0．5、2、4、6、12、24小时时采集小鼠全血,肝素抗凝,用CD61-PE标记后,流式细胞术计数人血小板,以30分钟时的人血小板计数为100％,计算人血小板存活率。结果表明：冷冻血小板在活体内存活率明显降低,新鲜血小板和冷冻血小板输注SCID小鼠体内4小时时的存活率分别为（79．5±9．1）％和（40．6±6．6）％（P〈0．01）,推算半寿期（T1/2）分别为7小时和2．5小时。结论：血小板-80℃冷冻保存后在活体内的生存能力降低。     

Use of a SCID mouse/human lymphoma model to evaluate cytokine-induced killer cells with potent antitumor cell activity

C.B-17 severe combined immune deficient (SCID) mice, which lack functional B and T lymphocytes, allow xenografts and, therefore, can be used to study the biology of human malignancies. Two different human B cell lymphoma cell lines, SU-DHL-4 and OCI-Ly8, which both harbor the t(14;18) chromosomal translocation, were injected into C.B-17 SCID mice. Mice injected intravenously or intraperitoneally developed tumors and died in a dose-dependent manner. The presence of tumor cells in various murine tissues could be demonstrated by a clonogenic tumor assay, staining of frozen sections with a monoclonal antibody (mAb) against a human B cell antigen (CD19), and with the polymerase chain reaction technique. A protocol using cytotoxic effector cells was developed and used to selectively deplete the tumor cells from bone marrow. These cells were developed by growing peripheral blood mononuclear cells in the presence of interferon gamma (IFN-gamma), anti-CD3 mAb, and interleukin 2 (IL-2). The timing of IFN-gamma treatment was critical and optimal if IFN-gamma was added before IL-2 treatment. The cells that were stimulated by IFN-gamma, followed by IL-2, could be expanded by treatment with a mAb directed against CD3. These cells could be further activated by IL-1, but not by tumor necrosis factor alpha. With this protocol, a tumor cell kill of 3 logs was obtained as measured by a clonogenic assay. Interestingly, despite their high cytotoxic activity against lymphoma cells, these cells had little toxicity against a subset of normal human hematopoietic precursor cells (granulocyte/macrophage colony-forming units). These cells were further tested by treating murine bone marrow contaminated with the human lymphoma cell line SU-DHL-4, and injecting these cells into SCID mice to assay for tumor growth in vivo. The animals injected with bone marrow contaminated with SU-DHL-4 cells had enhanced survival if the bone marrow was treated with the cytokine-induced killer cells before infusion. The SCID mouse provides a useful in vivo model for evaluation of new therapeutic approaches for lymphoma treatment. The cytokine-induced killer cells generated as described here could have an important impact on bone marrow purging for autologous bone marrow transplantation as well as for adoptive immunotherapy.     

原发性乳腺淋巴瘤术后同侧乳头复发一例

目的 总结原发性乳腺淋巴瘤(primary breast lymphoma,PBL)的临床病理学、免疫组织化学特征、综合治疗及复发情况.方法 对2010年11月入院手术切除的PBL术后同侧乳头复发的1例患者的临床资料进行回顾分析,病理常规切片及免疫组织化学观察.结果 光学显微镜检查低倍镜下肿瘤细胞弥漫性浸润破坏乳头组织...     

体外Rituximab增敏吉西他滨/长春瑞宾细胞毒作用的实验研究

本研究探讨抗CD20单抗利妥昔(Rituximab,RTX)对Gemcitabine和Navelbine的化疗增敏作用及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率,计算出各自的IC50;比较Gemcitabine或Navelbine单药及Gemcitabine或Navelbine分别与RTX两药协同作用的IC50;用Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namlwa细胞经RTX20μg/ml作用24小时后抗凋亡蛋白BCL-2的表达情况。结果表明:单药抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3%-10%之间波动。RTX可使Gemcitabine或Navelbine对Daudi、Namalwa和Raji细胞株的细胞毒作用有明显增强;在Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后,BCL-2蛋白表达下调。结论:RTX对新一代细胞毒药物Gemcitabine或Navelbine有明显的细胞毒增敏作用。Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后BCL-2表达下调,这可能是RTX增敏细胞毒药物的机制之一。     

30例原发性小肠淋巴瘤病理分析

目的：研究原发性小肠淋巴瘤（PSIL）的病理特点。方法：对30例PSIL患者的组织标本行苏木精-伊红（HE）染色、免疫组化检查,其中2例行基因重排检查,并结合文献进行分析。结果：30例PSIL患者的病理诊断均为非霍奇金淋巴瘤（NHL）,其中B细胞来源23例（76.7%）、T细胞来源7例（23.3%）。其组织学类型分别为弥漫大B细胞淋巴瘤16例（53.3%）、黏膜相关淋巴组织（MALT型）B细胞淋巴瘤7例（23.3%）、外周T细胞淋巴瘤6例（20.0%）、自然杀伤（NK）/T细胞淋巴瘤1例（3.4%）。免疫组化结果示,30例PSIL均表达CD45,AE1/AE3均阴性,4例B细胞淋巴瘤EMA弱阳性。23例B细胞淋巴瘤均表达CD20和CD79α,7例T细胞淋巴瘤均表达CD3和CD45RO。NK/T细胞淋巴瘤还表达CD56和TIA-1。16例弥漫大B细胞淋巴瘤有6例（37.5%）表达Bcl-2蛋白,10例（62.5%）表达MIB-1。7例MALT型B细胞淋巴瘤中有5例（71.4%）表达Bcl-2,1例（14.3%）表达MIB-1。基因重排结果示,2例B细胞淋巴瘤均呈Fr2A、Fr3A阳性,TcR阴性。结论：PSIL大多为B细胞来源的NHL,最常见的组织学类型是弥漫大B细胞淋巴瘤。Bcl-2、MIB-1的阳性率与肿瘤病理分型相关。     

三株人白血病细胞系/SCID小鼠模型的建立及其生长特性

本文报道了3株人白血病细胞系(HL-60,CEM和J6-1/SCID)小鼠模型的建立及其生长特点。发现人粒细胞白血病细胞系(HL-60)和T淋巴细胞系(CEM)给SCID小鼠静脉或腹腔移植后均发生全身性白血病,外周血可见白血病细胞。J6-1细胞(可能来自恶性淋巴瘤)眼眶后静脉移植后具有恶性淋巴瘤生长特点,在局部形成瘤块(与瘤细胞漏出血管有关),并侵及颌下淋巴结,无全身性播散。由此可见,人白血病细胞/SCID小鼠模型更类似于人类白血病,是进行人类白血病研究新的良好的模型。