Ghrelin对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响及机制

目的阐明Ghrelin对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养H9C2心肌细胞,分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+Ghrelin组及单纯Ghrelin组,采用MTT法检测细胞存活率,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,并应用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、1型及2型AngⅡ受体(AT1R,AT2R)mRNA表达。结果与空白对照组相比,AngⅡ组心肌细胞存活率明显下降;细胞凋亡数目明显增加;Caspase-3及促凋亡分子Bax表达明显增加,而抗凋亡分子Bcl-2表达明显减少;AT1R及AT2R表达均明显增加,AT1R增加尤为显著。与AngⅡ组相比,Ghrelin+AngⅡ组心肌细胞存活率明显增加;细胞凋亡数目明显减少;Caspase-3及促凋亡分子Bax表达明显减少,而抗凋亡分子Bcl-2表达明显增加;AT1R表达明显减少,而AT2R表达无明显变化。结论 AT1R及AT2R均参与AngⅡ诱导心肌细胞凋亡进程,Ghrelin可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与Ghrelin下调通过下调AT1R表达有关。     

SODD和Survivin在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的作用

为了研究死亡结构域沉默子（SODD）、survivin、caspase3、caspase8及caspase9在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的变化,以进一步明确凋亡调控基因的调控机制和寻找药物作用新靶点,采用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测化疗药物作用后Jurkat细胞凋亡发生率;采用免疫印迹法分析SODD、caspase3、caspase8及caspase9蛋白表达的变化;采用RT-PCR检测survivin mRNA表达的变化;采用免疫组织化学SABC法检测survivin蛋白表达的变化。结果表明：SODD及survivn高表达均抑制肿瘤细胞凋亡,VCR具有时间依赖性特异下调SODD蛋白的功能并能有效诱导Jurkat细胞凋亡,在该凋亡过程中caspase3、caspase8酶原呈时间依赖性逐渐被水解剪切,而caspase9及survivin均无明显变化趋势。结论：SODD参与了VCR诱导白血病细胞凋亡过程,VCR通过下调SODD表达并启动受体配体介导途径诱导Jurkat细胞凋亡,在该过程中线粒体凋亡途径并未被启动。     

活化蛋白C抑制血管内皮细胞凋亡的机制研究

目的 观察活化蛋白C(activated protein C,APC)对线粒体凋亡途径相关调节因子的影响,以阐述其抑制血管内皮细胞凋亡作用的可能机制.方法 人脐静脉血管内皮细胞与脂多糖(1μg/mL)孵育诱导细胞凋亡模型后,分别给予APC(10 ng/mL或50 ng/mL)建立药物治疗组,另设立对照和凋亡模型组,24 h后取材,RT-PCR和Western blotting检测Bcl-2,Bax,P53和Caspase 3 mRNA及蛋白表达.结果 不同剂量APC治疗组与凋亡模型组比较P53,Bax和Caspase 3 mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达上调,尤以APC 50 ng/mL治疗组为显著(P<0.05).结论 APC可能参与调节Caspase 3依赖性的线粒体凋亡途径相关因子的表达,发挥抑制LPS诱导的血管内皮细胞凋亡,从而为APC制剂在感染性疾病中的使用提供了理论基础.     

甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及诱导细胞凋亡机制研究

目的 探讨甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制.方法 应用流式细胞术检测甲异靛诱导K562细胞凋亡的情况以及线粒体膜电位稳定性.应用Western blot技术检测bcr-abl信号通路相关蛋白、caspase以及Bcl-2家族成员在甲异靛作用前后的表达情况.RT-PCR技术检测甲异靛作用前后bcr-abl mRNA表达水平,用电泳移动迁移速度分析检测STAT3、STATS的DNA结合能力.结果 20 μmol/L甲异靛町降低ber-abl融合蛋白的表达及其磷酸化水平,但并不改变其mRNA表达水平,甲异靛可降低STATS以及CRKL的磷酸化水平,抑制STAT3、STATS的DNA结合能力.5-20μmoL/L甲异靛可诱导K562细胞凋亡并且具有浓度依赖性.甲异靛诱导K562细胞凋亡中伴随caspase 3、8、9活化以及细胞线粒体膜电位降低,caspase 3、8、9特异抑制剂z-DEVD-fmk、z-IETD-cho和z-LETD-fmk可阻断甲异靛诱导的K562细胞凋亡.甲异靛诱导K562细胞凋亡前后不伴有Bcl-2、Bax、Bid蛋白表达水平的改变.结论 甲异靛通过降低bcr-abl融合蛋白的表达并抑制bcr-abl信号通路中相关蛋白活性从而抑制K562细胞的增殖.甲异靛诱导K562细胞凋亡依赖于caspase活化以及线粒体途径,但Bcl-2家族成员不参与凋亡的调控.     

甲状腺功能亢进性心肌病兔血管紧张素转换酶及血管紧张素Ⅱ型受体的表达

目的 探讨甲状腺功能亢进性心肌病(甲亢性心肌病)的发病机制.方法 将40只健康成年新西兰大白兔随机均分为空白对照组、L-甲状腺素(L-Thy)组、咪哒普利组和缬沙坦组4组.用L-Thy 45 μg· kg-1·d-1连续腹腔注射28 d建立甲亢性心肌病动物模型.测定各组动物左右心室肥厚指数和心肌细胞直径;用Masson染色法测定胶原容积分数;用放射免疫法检测血浆及组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测血管紧张素转换酶(ACE)、Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体(AT1R)、Ⅱ型血管紧张素Ⅱ受体(AT2R)的mRNA表达;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测ACE、AT1R、AT2R的蛋白表达.结果 L-Thy可诱导心肌肥厚及心肌纤维化,使血浆与局部组织AngⅡ浓度升高,并可使ACE、AT1R、AT2R的mRNA及蛋白表达均上调(P均＜0.01).咪哒普利和缬沙坦均可显著抑制L-Thy诱导的心肌肥厚和纤维化(P均＜0.05);咪哒普利还可降低血浆与局部心肌组织AngⅡ水平(P均＜0.01),对AT1R、AT2R和ACE的mRNA和蛋白表达均无影响(P均＞0.05);缬沙坦能显著升高血浆AngⅡ浓度(P＜0.01),但不升高组织AngⅡ浓度(P＞0.05),并能显著上调AT1R、AT2R的mRNA及蛋白表达(P均＜0.01),对ACE的mRNA和蛋白表达无影响(P均＞0.05).结论 肾素-血管紧张素系统可能参与甲亢性心肌病的发病机制.咪哒普利和缬沙坦可以改善L-Thy诱导的心室重构.     

补骨脂素联合长波紫外线A诱导HL-60细胞凋亡作用的研究

本研究探讨中药补骨脂素（psoralen，PSO）加长波紫外线A（ultraviolet A，UVA）（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60凋亡的作用及其可能的作用机制。采用MTT法观察PUVA对HL-60细胞增殖的影响；采用电子显微镜技术观察细胞超微结构改变；流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率、线粒体跨膜电位水平以及细胞Fas、FasL蛋白的表达；荧光定量PCR技术检测细胞Fas、FasL mRNA的表达；免疫细胞化学法（immunocytochemistry，ICC）检测caspase 8、caspase3蛋白的表达。结果表明，PUVA可抑制HL-60细胞的增殖，使凋亡率增加，作用呈时间、浓度依赖性；UVA照射时间15分钟和PSO浓度为80μg／ml时，HL-60细胞增殖的抑制率、凋亡率达峰值；PUVA作用后HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变，细胞线粒体跨膜电位水平下降；PUVA作用4小时Fas mRNA的表达升高，FasL mRNA的表达下降；PUVA作用24小时Fas、FasL在蛋白水平的表达亦呈现相同规律；PUVA可使HL-60细胞caspase 8、caspase 3蛋白的表达增强，在作用后8小时强度达峰值。结论：PUVA能够抑制HL-60细胞的增殖，并诱导其凋亡，可能的机制是PUVA作用于Fas／FasL系统，使Fas基因表达升高、FasL基因表达下降，激活下游caspase 8、caspase 3的表达，线粒体膜电位水平降低亦可能参与了这个过程。     

TRAIL/死亡受体5途径在缺氧再给氧诱导人肝细胞凋亡中的作用及相关机制

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)/死亡受体5(Death receptor 5,DR5)途径在人肝细胞缺氧/再给氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用,并探讨其作用机制。方法:在体外建立肝细胞H/R模型,模拟肝脏的缺血再灌注。H/R处理后,培养基中加入不同浓度外源性TRAIL蛋白,噻唑盐比色法(MTT)和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。半定量RT-PCR检测DR5mRNA的表达。结果:以正常人肝细胞为对照,H/R使人肝细胞的DR5 mRNA的表达上调,再给氧2小时达峰值,此后直至再给氧20小时维持在相对高的水平。单纯缺氧6小时不能引起肝细胞的大量凋亡。TRAIL诱导H/R处理后的肝细胞发生凋亡,并呈浓度依赖性。H/R大大增强TRAIL的肝毒性。结论:H/R使DR5在人肝细胞的表达上调,增加TRAIL的肝毒性。TRAIL/DR5途径可能在IRI诱导人肝细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

细胞凋亡的线粒体信号通路在大鼠缺血延迟预适应抗心肌细胞凋亡机制中的作用

目的：以细胞凋亡的线粒体途径为切入点,探讨心肌缺血延迟预适应抑制心缺血再灌注（MI/R）后细胞凋亡的可能机制.方法：SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、延迟缺血预处理组.缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1h,再灌1h.延迟缺血预处理组采用缺血5min,再灌5min,反复循环3次,24h后缺血1h,再灌1h.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,进行细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的Western blotting分析及Caspase-3活性测定,并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌HSP70的表达.结果：与缺血再灌注组相比较,心肌缺血预处理24h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率,抑制CytC和AIF自线粒体向胞浆的释放及caspase-3的活化,上调HSP70蛋白表达.结论：心肌缺血延迟预适应可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制与其诱导HSP70的生成,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关.     

血管紧张素Ⅱ诱导急性肺损伤大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体表达调控的研究

目的 探讨静脉注射血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)阻断药氯沙坦对大鼠肺组织AT2R表达的影响及AT2R与急性肺损伤(ALI)的相关性.方法 24只SD大鼠被随机分为4组,每组6只正常对照组和AngⅡ组:持续皮下注射生理盐水或AngⅡ1 μg·kg-1·min-1 72 h;AngⅡ+氯沙坦组:注射AngⅡ前24 h及注射过程中给予氯沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃,连用4 d;氯沙坦组:仅用氯沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃,连用4 d.给药后活杀大鼠,分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织AT2R 的mRNA和蛋白表达,并行组织损伤病理评分.结果 AngⅡ组肺组织病理评分[(3.33±1.14)分]明显高于正常对照组[(0.73±0.09)分];AngⅡ+氯沙坦组评分降至(1.98±0.30)分,而氯沙坦组为(0.95±0.20)分,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).AngⅡ组AT2R mRNA表达[(47.90±9.88)%]明显低于正常对照组[(86.33±5.90)%];AngⅡ+氯沙坦组AT2R mRNA表达上调[(90.63±19.66)%],而氯沙坦组为(68.65±4.88)%,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).正常对照组肺组织AT2R蛋白表达为(78.80±41.26)%,AngⅡ组为(68.98±23.93)%,AngⅡ+氯沙坦组为(68.13±23.23)%,氯沙坦组为(70.15±17.16)%,各组间比较差异均无统计学意义.结论 AngⅡ可以诱导大鼠ALI并下调AT2R mRNA在肺组织中的表达,此时应用氯沙坦可上调AT2R mRNA表达,改善肺损伤;AT2R可能在ALI中发挥肺保护作用.     

长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的增殖抑制和凋亡促进作用及其机制

目的 观察长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞增殖的抑制及凋亡促进作用,探讨其作用的分子机制.方法 以0、5、10、20、50、100 μg·L-1不同浓度长春新碱处理的MG63细胞,分别经CCK-8及Hoechest 33342检测细胞增殖和细胞凋亡水平,用实时定量RT-PCR分析mRNA表达水平.结果 长春新碱可抑制MG63细胞增殖;长春新碱可以促进细胞凋亡;长春新碱可以下调c-myc及上调caspase9基因表达（P〈0.05）.结论 长春新碱从较低浓度起即有抑制细胞增殖及促进细胞凋亡作用,其作用机制是通过下调c-myc及上调caspase9的基因表达实现的.     

ALA-PDT对尖锐湿疣凋亡及细胞因子的影响

目的:检测5-氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)治疗前后尖锐湿疣皮损凋亡相关因子(Fas、caspase3、Bcl-2)及促炎症细胞因子(CCL-20、TNF-α、IL-1)的表达,探讨AL A-PDT治疗尖锐湿疣的可能机理。方法:收集10例尖锐湿疣患者ALA-PDT治疗前后皮损(同时以正常健康者皮肤组织对照),采用荧光定量PCR检测其Fas、caspase3、Bcl-2、CCL-20、TNF-α、IL-1 mRNA表达;Western blot检测其Fas、caspase3、Bcl-2、CCL-20、TNF-α、IL-1蛋白表达。结果:尖锐湿疣皮损组织内Fas、caspase3、Bcl-2、CCL-20、TNF-α、IL-1 mRNA和蛋白表达均高于正常皮肤组织(P0.05);与治疗前比较,治疗后Bcl-2、CCL-20、TNF-α、IL-1 m RNA和蛋白表达水平明显降低(P0.01),Fas、caspase3 m RNA和蛋白表达水平明显升高(P0.01)。结论:AL A-PDT是一种能有效治疗尖锐湿疣的方法,它可诱导细胞表面凋亡蛋白Fas、caspase3的表达、减少凋亡抑制因子Bcl-2的表达,从而可能依靠内源性途径(线粒体介导的凋亡)和外源性途径(死亡受体介导的凋亡)促进尖锐湿疣角质形成细胞凋亡;并可能通过抑制促炎细胞因子CCL-20、TNF-α、IL-1而发挥局部免疫调节作用。     

镇肝熄风汤对SHR大鼠Ang Ⅱ 1型受体蛋白和mRNA表达的影响

目的研究不同剂量镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠(SHR)腹主动脉血管组织中Ang Ⅱ 1型受体(AT1R)蛋白和Ang Ⅱ 1型受体(AT1R) mRNA表达的影响。方法 60只24周龄的SHR大鼠随机分为:模型组、镇肝熄风汤低剂量组、镇肝熄风汤中剂量组、镇肝熄风汤高剂量组、复方罗布麻组,每组12只; 12只24周龄的同源雄性魏-凯二氏大鼠(WKY)作为:正常对照组。每组灌胃给药45天后,Western Blotting检测方法,检测腹主动脉血管组织中AT1R蛋白表达;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,测定大鼠AT1R mRNA基因表达。结果与模型组比较,正常组、镇肝熄风汤中剂量、高剂量组和复发罗布麻组AT1R蛋白表达和AT1R mRNA表达明显降低(F=863. 465,P 0. 01)。结论镇肝熄风汤可以调低SHR大鼠腹主动脉血管组织中AT1R蛋白表达和AT1R mRNA表达,减少SHR大鼠的血管收缩能力,起到有效降低SHR大鼠血压作用。     

血管紧张素Ⅱ对猪动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶基因表达的异质性研究

目的:通过观测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体循环和肺循环系统动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响,探讨体、肺循环系统病理生理学上的差异。方法:采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法(LSAB法)观察AngⅡ对培养的猪主动脉和肺动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质表达的影响。结果:AngⅡ分别作用6、12、24、36、48h后,主动脉内皮细胞eNOSmRNA及蛋白质的表达下调。在AngⅡ作用的早期(≤24h),肺动脉内皮细胞eNOSmRNA和蛋白质的表达也呈时间依赖性下调,但作用48h后,肺动脉内皮细胞eNOSmRNA恢复至正常水平,并且eNOS蛋白水平上调超过空白对照组,表现出先抑制后促进的特性。结论:AngⅡ对主动脉和肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的影响不同,可能是由于不同的AT受体亚型或是不同的信使途径所调节,表明体循环和肺循环动脉之间存在着病理生理学的异质性。     

99mTc-甲氧基异丁基异腈显像评价肺癌化疗后疗效的研究进展

【目的】通过观测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对体循环和肺循环系统动脉内皮细胞eNOS基因表达的影响，探讨体、肺循环系统病理生理学上的差异。【方法】采用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法（LSAB法）观察AngⅡ对培养的猪主动脉和肺动脉内皮细胞eNOS mRNA和蛋白质表达的影响。【结果】以10－6mol/L浓度的AngⅡ分别作用6、12、24、36、48小时后，主动脉内皮细胞eNOS mRNA的表达下调，在作用24小时达低谷，为对照组的53.2±8.1％(p<0.01)；其eNOS蛋白质的表达也被抑制到相应水平，为对照组的45.5±7.4％(p<0.01)，表现出时间依赖性。在AngⅡ作用的早期（≤24h），肺动脉内皮细胞与主动脉内皮细胞相似，其eNOS mRNA和蛋白质的表达也呈时间依赖性下调，分别为对照组的50.6±4.6％(p<0.01)和63.7±6.5％(p<0.01)；但随着AngⅡ作用时间的进一步延长，肺动脉内皮细胞eNOS mRNA和蛋白质的表达逐渐恢复正常；作用48h后，肺动脉内皮细胞eNOS mRNA恢复至正常水平、为对照组的96.5±5.3％(p>0.05)，并且eNOS蛋白水平上调超过对照组、为121.7±9.6％(p<0.05)，表现出先抑制后促进的特性。【结论】AngⅡ对主动脉和肺动脉内皮细胞eNOS基因表达的影响不同，可能是由于不同的AT受体亚型或是不同的信使途径所调节，表明体循环和肺循环动脉之间存在着病理生理学的异质性。     

血管紧张素Ⅱ2型受体——肿瘤细胞凋亡诱导因子

血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）是由8个氨基酸组成的线性小肽,是肾素．血管紧张素系统（renin—angiotensin system,RAS）的主要效应因子。血管紧张素Ⅱ1型（angiotensinⅡ 1 receptor,ATIR）和血管紧张素Ⅱ2型受体（angiotensin Ⅱ 2 receptor,AT2R）分别是AngⅡ作用的靶细胞的表面特异性G蛋白偶联1型和2型受体。AreⅡ通过上述2种受体参与调节血管舒缩、水盐平衡、细胞增殖、炎性反应、细胞凋亡等生物学功能。目前对AT1R的研究较多,在多种组织和器官中AT1R几乎介导了AngⅡ所有已知的生物学功能,但还不十分明确AT2R功能。随着对AngⅡ受体与肿瘤关系认识的深入,AT2R与肿瘤之间的联系也越来越受到重视。近年来AT2R诱导细胞凋亡的作用在肿瘤细胞中也有所发现,这提示AT2R可能作为肿瘤凋亡诱导因子来发挥作用,并有望成为肿瘤治疗的新靶点。     

浅蓝菌素改变多发性骨髓瘤U266细胞凋亡相关基因表达谱的研究

目的研究浅蓝菌素改变多发性骨髓瘤（MM）细胞系U266细胞凋亡相关基因的表达谱变化，进一步明确浅蓝菌素引起U266细胞凋亡的分子机制。方法用SuperArray cDNA基因芯片，分析U266细胞在浅蓝菌素（20μg／ml）处理前后细胞凋亡相关基因的表达谱变化，对Rip2、caspase9及TRAF2代表性主要差异基因进行半定量RT-PCR进行验证。结果浅蓝菌素处理U266细胞12h后，与空白对照组比较，在研究的96个基因中，共有44个细胞凋亡相关基因表达改变较明显，其中表达上调2倍以上的基因41个，表达下调2倍以上的基因3个。caspase9表达的显著上调，说明线粒体途径在凋亡中起了主要作用；TRAF2基因表达的变化，提示在凋亡过程中有细胞核内转录因子的参与。结论浅蓝菌素引起U266细胞的凋亡有死亡受体信号通路和死亡受体非依赖的信号通路共同参与，线粒体途径在凋亡中起了主要作用，细胞核内转录因子参与了浅蓝菌素引起U266细胞的凋亡。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

氯沙坦介导AngⅡ/AT1R信号通路减轻百草枯诱导肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨氯沙坦在减轻百草枯诱导人肾小管上皮细胞损伤的机制和效果。方法:体外培养人肾小管细胞并将其分为对照组、实验组和干预组,以CCK8方法测得百草枯和氯沙坦的半数有效剂量。干预组使用百草枯+氯沙坦干预24小时,制成细胞爬片使用HE、TUNEL染色镜下查看细胞情况;采用RT-PCR技术测定AngⅡ、AT1R、IL-1C、IL-6和TNF-α的变化;采用Westen Blot技术检测AT1R。结果:实验组细胞可见空泡变性与凋亡增加,AngⅡ,AT1R,IL-1胞,IL-6和TNF-胞表达量增加,差异有统计学意义(P0.05);干预组细胞可见空泡变性与凋亡减少,AngⅡ,AT1R,IL-1β,IL-6和TNF-变表达量下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论:氯沙坦可能通过抑制AngⅡ/AT1R的表达,进而减轻百草枯诱导人肾小管上皮细胞的炎症和凋亡。     

TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响;用AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降。此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达。结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平。TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性。     

藤黄酸通过MAPK通路诱导Jurkat细胞凋亡的机理

本研究探讨藤黄酸对Jurkat细胞的抑制作用及可能机理。以不同浓度藤黄酸与抑制剂处理Jurkat细胞,AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞的凋亡;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平;免疫印迹检测pro-caspase 3、pro-caspase 9、磷酸化JNK及P38蛋白水平。结果表明,藤黄酸呈浓度依赖性诱导Jurkat细胞凋亡;藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平升高,caspase 3、caspase 9活化蛋白及磷酸化JNK及P38蛋白水平升高;ROS、CaMKⅡ、caspase 3、caspase 9、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂减弱藤黄酸诱导Jurkat细胞凋亡的作用;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 3、caspase 9活化蛋白水平;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化JNK蛋白水平;ROS、CaMKⅡ、MAPKK、P38抑制剂减弱藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化P38蛋白水平。结论:藤黄酸通过激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡,该过程可能与ROS-CaMKⅡ-MAPKK-JNK/P38通路有关。