多发性硬化患者外周血中记忆性T细胞亚群的水平

目的测定多发性硬化（MS）患者记忆性T细胞亚群的水平,并探讨可能导致记忆性T细胞亚群变化的机制。方法采用流式细胞仪和酶联免疫吸附分析（ELISA）分别检测未治疗MS、脑梗死和正常对照组的外周血记忆性T细胞亚群表型和血浆白细胞介素-15（IL-15）浓度。结果MS患者CDS＋中心记忆性T细胞（TCM）明显高于正常对照组（20％±11％和13％±6％,P〈0．05）,CD8＋终末效应记忆性T细胞显著少于正常对照组（24％±15％和39％±19％,P〈0．05）;MS患者血浆IL-15水平较正常对照显著升高（36．01pg／ml和9．53pg／ml,P〈0．05）。结论MS患者外周血CD8＋TCM的上调可能反映了在MS早期被诱导产生的一个持续的慢性炎性应答,而IL-15则可能参与了促进TCM分化的调节过程。     

氧化低密度脂蛋白干预记忆性CD8+T细胞亚群的分化

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对CD8+记忆性T细胞亚群分化的影响及其机制.方法 将雌性10周龄未发生糖尿病NOD小鼠随机分为2组(n=5):ox-LDL组及对照组.断颈处死各组小鼠磁珠分离脾脏CD8+T细胞体外培养(IL-2),ox-LDL组加入ox-LDL 30μg/mL体外刺激24 h,ox-LDL未处理组作为对照组.24 h后分离细胞.体外实验利用流式细胞仪检测各组以下指标:胞内CD8+IFN-γ+确定胰岛β细胞特异性杀伤性CD8+T细胞的比例;细胞表面分子CD8、CD44、CD62L确定CD8+记忆性T细胞的不同亚群分化;T细胞相关转录因子TCF-1及STAT-3的活化确定关键性转录因子的作用.体内实验中,将各组CD8+记忆性T细胞通过尾静脉注射的方法移植给未发病NOD小鼠,同时设立未移植的模型对照组,每5 d检测血糖1次,监测小鼠的血糖改变及生存率.结果 相比对照组,ox-LDL(30μg/mL)作用24 h后,胰岛β细胞特异性杀伤性CD8+T细胞活化减少[(0.7±0.03)%vs(2.7±0.14)%,P<0.01],记忆性T细胞中的效应记忆性T细胞形成数目减少[(10.3±0.71)%vs(30.3±1.36)%,P<0.01],干细胞样记忆性T细胞增加[(72.3±3.8)%vs(55.1±2.61)%,P<0.05].T细胞转录因子TCF-1及p-STAT-3活化的也受到抑制[TCF-1:(14.5±0.82)%vs(34.2±1.23)%,磷酸化STAT-3:(3.3±0.12)%vs(22.1±1.1)%,P<0.01].T细胞移植给未发病NOD小鼠后,ox-LDL处理组小鼠血糖升高明显低于对照组(P<0.05),且生存率提高(P<0.05).结论 ox-LDL干扰记忆性CD8+T细胞核转录因子TCF-1活化及STAT-3的磷酸化,抑制长效杀伤作用的效应性和记忆性CD8+T细胞形成,诱导干细胞样记忆性CD8+T细胞形成,从而阻止胰岛β细胞自身免疫损伤及□型糖尿病的发生.     

外周血CD4+CD25+ T细胞频数与多发性硬化患者激素治疗的关系

目的:探讨外周血CD4+CD25+ T细胞频数与多发性硬化(MS)患者激素治疗的关系.方法:应用流式细胞术检测激素治疗前R-R型MS 患者22例,脑梗死组患者16例及健康对照组16例外周血CD4+CD25+T细胞频数.对MS患者激素治疗前后行扩展残疾状态量表(EDSS)评分,分析MS患者激素治疗前外周血CD4+CD25+T细胞频数,以及患者性别、年龄、入院时是否合并细菌感染与激素治疗的关系.结果:MS患者外周血CD4+CD25+T的细胞频数最低(9.46±5.31);MS患者外周血CD4+CD25+T对患者的预后起保护作用(β=0.557,P=0.038),CD4+CD25+T细胞的含量降低不利于其预后.结论:MS患者外周血CD4+CD25+T淋巴细胞频数呈低表达,CD4+CD25+T淋巴细胞可能是MS一种保护因子.     

胃癌患者外周血CD8+T细胞中CD28的表达

目的探讨CD28在胃癌患者外周血CD8+T细胞中的表达变化.方法采用三色荧光标记流式细胞术检测胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞数和CD8+CD28+、CD8+CD28-T细胞数以及CD4+/CD8+比值.结果胃癌患者外周血各淋巴细胞亚群数与正常对照组比较无显著差异.CD8+CD28+T细胞数下降,CD8+CD28-T细胞数上升显著,这些变化与胃癌细胞分化程度和患者临床分期无明显相关性.结论胃癌患者CD8+CD28+T细胞减少,CD8+CD28-T细胞增多,使其机体抗肿瘤免疫能力下降,肿瘤细胞借此逃脱免疫攻击.     

正常人外周血中CD8+CD25+T细胞亚群的数量及其细胞因子表达的初步研究

目的:研究正常人外周血CD8 CD25 T细胞亚群的数量及其表达IFN-γ、IL-10和TGF-β的细胞数量情况,以期得到一组该亚群细胞正常数值范围,为研究CD8 CD25 T细胞亚群在自身免疫性疾病、过敏性疾病和器官移植中的变化及其临床意义提供参考.方法:分离正常人外周血单个核细胞,利用三色流式细胞术分别检测CD3 T细胞中CD8 CD25 、CD8 CD25-、CD8-CD25 和CD8-CD25-亚群的比例,并计算其细胞数量;并对经过或未经过离子霉素(ionomycin)、佛波醇乙酯(PMA)联合刺激5 h的CD8 CD25 T细胞检测表达IFN-γ、IL-1O及TGF-β的细胞数量情况.结果:正常人外周血CD3 T细胞中CD8 CD25 细胞亚群约为2.52%.数量达37.09×106/L,经离子霉素、佛波醇乙酯联合刺激培养5 h后其比例、数量均略有降低;CD8 CD25 T细胞表面TGF-β阳性率达到93.8%,刺激对其表达无明显影响;但刺激后IFN-γ T细胞明显增多,而IL-10 的T细胞未见明显升高.结论:正常人外周血CD3 T细胞中存在少量的CD8 CD25 细胞亚群,该细胞表面稳定地高表达TGF-β,可对刺激呈现IFN-γ反应,但不对刺激产生增殖反应.     

胃癌患者外周血CD8+T细胞中CD28的表达

目的探讨CD28在胃癌患者外周血CD8+T细胞中的表达变化.方法采用三色荧光标记流式细胞术检测胃癌患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞数和CD8+CD28+、CD8+CD28-T细胞数以及CD4+/CD8+比值.结果胃癌患者外周血各淋巴细胞亚群数与正常对照组比较无显著差异.CD8+CD28+T细胞数下降,CD8+CD28-T细胞数上升显著,这些变化与胃癌细胞分化程度和患者临床分期无明显相关性.结论胃癌患者CD8+CD28+T细胞减少,CD8+CD28-T细胞增多,使其机体抗肿瘤免疫能力下降,肿瘤细胞借此逃脱免疫攻击.     

CD8+应记忆性T细胞与α-干扰素治疗慢性乙型肝炎疗效的相关性

目的探讨α-干扰素(IFN-α)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的疗效与CD8+效应记忆性T细胞(TEM)变化的相关性。方法 100例CHB患者在接受IFN-α治疗期间分别在治疗前(0周)及疗程期内不同时间点(12周和24周时)抽取外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)后加入抗体染色,流式细胞仪检测,统计学分析。结果 57例患者完成治疗,病毒学应答组26例,无应答组31例。病毒学应答组CD8+TEM百分比在IFN-α治疗前和治疗24周时[69.07±12.30)%和(28.86±10.83)%]均高于无应答组[(15.75±12.30)%和(14.86±10.83)%],P0.05。CD8+中心记忆性T细胞(TCM)百分比在治疗前和治疗24周时[(13.56±7.33)%和(57.75±16.09)%]低于无应答组[(62.76±16.23)%和(72.68±12.74)%],P均0.05。结论 CHB患者应用IFN-α治疗时,可引起记忆性CD8+T细胞亚群的变化,CD8+TEM亚群在比率上占优势对IFN-α治疗效果有益。     

支气管哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞群和CD8+CD56+T细胞群作用机制研究

目的研究哮喘小鼠外周血CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞间的关系及两种细胞群在哮喘中的作用。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组各15只。测定小鼠的气道反应性,对支气管肺泡灌洗液行细胞学分类,观察肺组织的病理变化,流式检测小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞的比例,分析哮喘中两种细胞之间的相关性。结果成功建立小鼠哮喘模型。①哮喘组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞(%)较对照组明显增高;②哮喘组小鼠外周血CD8+CD28-T细胞及CD8+CD56+T细胞比例均较对照组升高;③CD8+CD28-T细胞与CD8+CD56+T细胞数量上呈正相关(r=0.737,P=0.002)。结论哮喘时外周血CD8+CD56+细胞和CD8+CD28-细胞数目异常,两种细胞正相关,可能在哮喘发病中起重要作用。     

结核患者抗原特异性CD8~+记忆T细胞的检测分析

目的研究活动期肺结核患者和潜伏感染者CD8+记忆T细胞的产生及分布特性。方法 24例活动性肺结核患者均为确诊的住院患者,22例潜伏感染者经ELISPOT检查确定。取外周血分离获取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以结核分枝杆菌抗原ESAT-6刺激,通过CD8、CD107a、CCR7、CD45RA抗体共染色,采用流式细胞术分析。结果建立了基于CD107a为分子标识的结核抗原特异性CD8+T细胞检测方法。对24例活动性肺结核患者及22例潜伏感染者对比分析发现,与潜伏感染者相比,肺结核患者CD45RA阳性CD8+记忆T细胞TEMRA亚群比例显著增加[(59.94±3.87)%vs(46.65±2.88)%,P=0.020 3],CD8+效应记忆T细胞TEM亚群分布频率显著降低[(38.14±3.87)%vs(52.34±2.95)%,P=0.014 2]。结论肺结核患者与潜伏感染者抗原特异性CD8+记忆T淋巴细胞亚群的比例存在明显差异,可能与体内抗原刺激的程度及特异细胞免疫应答反应相关。     

日本血吸虫感染小鼠CD8+T细胞亚群的变化及其与肝脏免疫病理的相关性研究

目的:研究CD8+T细胞中Tc1(CD3+CD8+ IFN-γ+)?Tc2(CD3+CD8+IL-4+)和调节性CD8+T细胞(CD8+CD28-)亚群在日本血吸虫感染导致的小鼠肝脏免疫病理发生发展中可能的作用?方法:取正常小鼠及日本血吸虫感染8周的小鼠脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测Tc1?Tc2和调节性CD8+T细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例及绝对数量,并分析感染血吸虫不同时期的CD8+T细胞亚群与血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿和肝纤维化指标的关系?结果:与正常对照小鼠比较,日本血吸虫感染后小鼠脾脏的单个核细胞绝对数显著增加(P < 0.001);日本血吸虫感染小鼠脾细胞中T细胞(CD3+)和CD8+T细胞(CD3+CD8+)的比例及绝对数均显著增加(P均 < 0.05);此外,感染小鼠脾淋巴细胞中Tc1?Tc2?调节性CD8+T比例均显著增加(P均 < 0.001);与正常小鼠相比,感染小鼠Tc2/Tc1比率显著增加(P < 0.001)?此外,多元线性逐步回归分析显示Tc2和调节性CD8+T细胞是影响血吸虫感染所致肝脏免疫病理的主要影响因素?结论:CD8+T细胞及其Tc1?Tc2?调节性CD8+T细胞亚群在日本血吸虫感染宿主的肝脏肉芽肿和纤维化发生发展中可能发挥重要作用?其中,Tc2和调节性CD8+T细胞可能分别促进/抑制血吸虫感染所致的肝脏免疫病理?     

原发性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+细胞亚群的分析

目的研究原发性肝癌(HCC)病人外周血CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子的表达.方法用流式细胞仪对20例原发性肝癌病人的CD8+细胞亚群及CD8+T细胞上CD28分子(即CD8+CD28+和CD8+CD28)的表达进行检测.结果HCC病人CD8+细胞百分率升高,CD8+CD28+细胞百分率降低,CD8+CD28细胞百分率升高,与对照组相比具有显著性差异.CD8+CD28+、CD8+CD28-细胞百分率与CD8+T细胞百分率的相关性研究表明,CD8+CD28-细胞数与CD8+T细胞数之间呈正相关.结论HCC病人CD8+细胞升高,CD8+细胞上CD28分子的表达是异常的,即CD8+CD28-细胞数升高,CD8+CD28+细胞数降低;CD8+T细胞的升高是CD8+CD28-细胞亚群升高的结果.     

结核抗原特异性CD4+中央型记忆T细胞的检测及分布特性研究

目的 比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性.方法 取乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs.采用卡介苗刺激后,通过CD4、CD154、CCR7、CD45RA 4种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞.结果 以CIM+CD154+双阳性区设门,研究结核抗原特异性CD4+记忆T细胞,结果显示,肺结核患者CD4+CD154+CD45RA-CCR7+中央型T淋巴细胞亚群分布频率显著降低(P<0.05),CD4+CD154+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群的比例明显增高(P<0.05).结论 肺结核患者CD4+中央型记忆T淋巴细胞亚群的产生存在异常,可能与免疫功能低下和结核病发病密切相关.     

口腔扁平苔藓组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与不典型增生的关系

目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）中CD3+T细胞和CD8+T细胞浸润与OLP伴上皮不典型增生的相关性,为OLP的临床诊断和免疫治疗提供新的方向。方法：采用免疫组化半定量法检测CD3+、CD8+T细胞在79例OLP患者组织中的表达,取10例口腔正常黏膜组织作为对照,分析口腔扁平苔藓组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与不典型增生的关系。结果：CD3+、CD8+T细胞在正常口腔黏膜组织中呈阴性表达,在79例OLP中均呈阳性表达。CD3+、CD8+T细胞浸润与患者性别、年龄、发生部位无明显统计学意义,但是与OLP伴上皮不典型增生密切相关,具有统计学意义（P<0.001,P=0.002）,CD3+T细胞浸润和CD8+T细胞浸润之间具有显著相关性（r=0.498,P<0.001）。结论：口腔扁平苔藓患者组织中CD3+、CD8+T细胞浸润与上皮不典型增生密切相关,影响OLP的发生发展。     

CD4~+T、CD8~+T细胞和PD-L1在结直肠癌中的表达及意义

目的 探讨结直肠癌中CD4+T、CD8+T细胞和PD-L1的表达情况,并分析其相关性及临床病理学意义。方法 收集2019年1—12月包头市肿瘤医院手术切除的结直肠癌肿物及癌旁5 cm、10 cm石蜡组织标本各41例,免疫组化法检测CD4+T、CD8+T细胞和PD-L1的表达水平,Sanger测序法检测微卫星不稳定性。结果 结直肠癌癌组织CD4+T细胞表达阳性的细胞数为108.8个,高于癌旁5 cm的73.8个及癌旁10 cm的38.0个,差异有统计学意义（P＜0.05）;癌组织CD8+T细胞表达阳性的细胞数为63.8个,高于癌旁5 cm的33.8个及癌旁10 cm的22.4个,差异有统计学意义（P＜0.05）;癌组织PD-L1表达阳性的细胞数为18.0个,高于癌旁5 cm的3.2个及癌旁10 cm的1.2个,差异有统计学意义（P＜0.05）。神经侵犯、脉管癌栓与结直肠癌癌组织CD4+T细胞表达相关,MSI、淋巴结转移、脉管癌栓与CD8+T细胞表达有关,MSI、淋巴结转移、神经侵犯、脉管癌栓与PD-L1的表达均无关。PD-L1和CD8+T细胞的表达呈低度正相关（r=0.350,P＜0.05）,PD-L1与CD4+T细胞表达无相关性（r=0.138,P＞0.05）。结论 CD4+T、CD8+T细胞和PD-L1在癌组织高表达,CD8+T与CD4+T细胞两者的高表达可作为预后良好的辅助判断指标,PD-L1与CD8+T细胞表达呈正相关。     

恶性肿瘤患者营养状况与血清瘦素、CD4^＋T／CD8^＋T细胞关系的研究

目的：探讨恶性肿瘤患者营养状况与血清瘦素、CD4^ T／CD8^ T细胞比值的关系。方法：选择恶性肿瘤患者79例及BMI为18．5～25．0的42例健康者，检测血清瘦素浓度和CD4^ T／CD8^ T细胞比值。结果：(1)不同营养状态的恶性肿瘤患者的血清瘦素含量之间均有显著性差异，而CD4^ T／CD8^ T细胞比值之间均无显著性差异。(2)女性肿瘤患者的血清瘦素含量明显高于男性患者。(3)BMI为18．5～25．0的恶性肿瘤患者与健康人血清瘦素含量之间无显著性差异，而肿瘤组CD4^ T／CD8^ T细胞比值明显低于健康人。(4)以瘦素为因变量，BMI、性别、年龄、CD4^ T／CD8^ T细胞比值为自变量进行多元线性回归分析，结果显示，血清瘦素含量与BMI、性别显著相关。结论：恶性肿瘤合并营养不良者，血清瘦素水平明显低于营养正常和肥胖的肿瘤患者。血清瘦素含量女性高于男性。BMI正常的肿瘤患者血清瘦素含量与正常人无差异，说明此时瘦素还发挥正常调节作用。在影响恶性肿瘤患者血清瘦素含量的因素中，BMI、性别是最主要的因素。不同营养状况的肿瘤患者之间的血清瘦素水平有明显差异，而与其相对应CD4^ T／CD8^ T细胞比值无统计学差异，提示瘦素影响免疫反应可能有更复杂的途径和机制，值得进一步探讨。     

化疗对HBV慢性感染者CD8+T细胞的杀伤及分泌细胞因子能力的影响

目的:探讨合并慢性HBV感染的非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma,NHL)患者接受化疗后其CD8+T细胞的杀伤能力及分泌细胞因子能力是否有影响。方法:选择合并HBV慢性感染并且HLA-A2阳性的NHL患者。从其外周血分离纯化CD8+T细胞,经PHA刺激后与人肝癌细胞株HepG2.2.15共培养,检测CD8+T对肝癌细胞的杀伤及分泌TNF-α、INF-γ的能力。结果:CD8+T细胞的杀伤能力及分泌TNF-α、INF-γ的水平呈现出效:靶比依赖性,而化疗对杀伤能力和分泌TNF-α、INF-γ的能力没有影响。结论:慢性HBV感染的NHL患者接受化疗不影响其CD8+T细胞的杀伤能力及分泌TNF-α、INF-γ的能力。     

白癜风患者外周血黑素细胞抗原特异性T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞水平及意义

目的 探讨白癜风患者外周血黑素抗原特异性CD8+T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞的变化及意义。方法 采用流式细胞术对初诊123例白癜风患者（观察组）和30例正常人（对照组）外周血中黑素细胞抗原特异性T细胞（CD8+Melan-A+/Tyrosinase+CTL）、调节性T细胞（CD4+CD125+CD127-Tregs）及自然杀伤T细胞（CD3+TCRα24+β11+NKT）进行定量分析并进行比较。结果观察组CD8+Melan-A+/Tyrosinase+CTL水平显著高于对照组（P＜0.05）;CD4+CD125+CD127-Tregs、CD3+TCRα24+β11+NKT水平均低于对照组（均P＜0.05）。不同分期白癜风患者外周血各种T细胞表达水平比较中,CD8+Melan-A+/Tyrosinase+CTL在各期中均高于对照组（均P＜0.05）;CD4+CD125+CD127-Tregs、CD3+TCRα24+β11+NKT水平仅在进展期中均低于对照组（均P＜0.05）,稳定期则无统计学差异。3种细胞水平与患者的白斑面积明显相关（r=0.929、-0.982、-0.957,均P＜0.01）。结论CD8+Melan-A+/Tyrosinase+CTL、CD4+CD125+CD127-Tregs、CD3+TCRα24+β11+NKT水平的异常导致白癜风患者体内免疫调节功能失衡,与白癜风的发生、发展有密切关系。