用DIG标记的寡核苷酸基因探针杂交技术进行人轮状病毒VP7G血清型鉴定

目的：建立用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，ＤＩＧ）标记的寡核苷酸基因探针鉴定Ａ群轮状病毒ＶＰ７Ｇ血清型的分子杂交技术，并应用该技术研究河南Ａ群轮状病毒的Ｇ血清型分布。方法：根据轮状病毒编码糖蛋白ＶＰ７的基因核苷酸序列，选择该基因高保守区序列中与ＶＰ７Ｇ血清型高度相关的核苷酸片段，人工合成，并用ＤＩＧ标记。在优选的杂交条件下进行杂交：结果：①Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３和Ｇ４四种Ｇ血清型特异性寡核苷酸探针只与同血清型的轮状病毒参考毒株杂交，无交叉杂交现象。灵敏度和特异性达到放射性同位素３２Ｐ标记的水平。②１８８份经ＰＡＧＥ确定的轮状病毒阳性标本中，７９份（４２．０％）、３５份（１８．６％）、１５份（７．９％）分别与Ｇ１、Ｇ２或Ｇ３型探针杂交；未检出Ｇ４型；５６份（２９．８％）未能分型；３份分型特殊。结论：该Ｇ血清型分型技术具有高度特异性和灵敏度     

2009~2011年大庆地区感染人轮状病毒G血清型鉴定

目的了解大庆地区2009—2011年感染人的轮状病毒流行株的血清型情况。方法采用A组轮状病毒ELISA检测试剂盒对采集来的288例腹泻标本进行轮状病毒阳性鉴定,对鉴定为阳性的腹泻标本经处理后,采用多重一步反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）对轮状病毒株的血清型进行鉴定,并通过对阳性标本的轮状病毒VP7基因的核苷酸序列进行分析、比对,以进一步鉴定毒株的血清型。结果对288例标本进行ELISA检测,RV阳性177例;血清型检测共测得G1型73例（41．2％）,G2型12例（6．7％）,G3型67例（37．9％）,另有25例为G1和G3混合型。结论轮状病毒是引起大庆地区婴幼儿病毒性腹泻的主要原因,对成人腹泻影响较小,2009～2011年大庆地区流行的RV以G,和G,型为主。此外,出现了G1和G3混合型,说明病毒血清型之间出现了一定重组变异。     

轮状病毒的二种血清型

美《传染病杂志》第2卷(1979年)报道贝塞斯达消息:用于预防轮状病毒引起的胃肠炎的疫苗可诱导产生对二种不同血清型轮状病毒的抵抗力。华盛顿地区和世界其他地方的研究工作表明,小儿胃肠炎中的轮状病毒有二型。任何一型引起的疾病对另一型并无免疫力。轮状病毒是世界上引起小儿胃肠炎的一个重要原因。雅尔肯(R.H.Yolken)医生及其同事认为,应用低效价制品时,以补体结合法鉴别轮状病毒血清型不够灵敏。免疫电子显微镜和免疫荧光技术对大批标本进行血清分型也不实用。中和反应方法也不能用于鉴别血清型,因为在一般的组织培养系统中不能培养人     

抗人血清型IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

有关抗人IgA单克隆抗体(McAb)的研制,国内已有抗人唾液和初乳IgAMcAb的报告。我们使用从IgA骨髓瘤病人血清中抽提的IgA,免疫BALB/C小鼠,采用常规的细胞融合方法,获得了4株针对IgAM-cAb细胞系.它所产生的McAbs,将代替常规的血清学方法(多克隆抗体),对原发性或继发性IgA增多或缺乏的多种疾病的诊断和研究.本文仅就该细胞系的建立的主要结果报告如下。材料、方法与结果①抗原制备和免疫方法:取IgA骨髓瘤病人血清,经ZnSo_4和(NH_4)_2SO_4沉淀,再经DEAE-22纤维     

广州及邻近地区人轮状病毒的基因RNA分析

本文报道了用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对广州及邻近地区1982年11月到1985年1月收集的603份婴幼儿腹泻标本进行了人轮状病毒(HRV)的基因RNA分析。共发现21个电泳型,每年均有一个优势电泳型流行,而且在不同的地理位点和年份所检出的非流行优势电泳型基本不同,表明HRV电泳型的变异性较大。另外,发现长—长电泳型和长—短电泳型HRV混合感染各6例,表明同一宿主可同时感染不同电泳型的HRV株,以及HRV在自然界会发生基因重组的迹象。对成人流行性急性腹泻病人的粪便标本的RNA电泳分析结果表明,广东省的中山县,江门市,新会县三地区以及湖南省所发现的成人轮状病毒(ADRV)感染可能由同一毒株引起,而该毒株与广西发现的ADRV株有少许的差别。表明ADRV也存在电泳型变异性的问题,本文还提出了对HRV电泳型分类及命名的建议,并探讨其在实践应用上的可行性。     

人的轮状病毒核酸的提取及鉴定

轮状病毒是婴儿及幼畜腹泻的主要病原之一。轮状病毒核酸是具有11个片段的 RNA 分子。我们从患儿粪便中提取轮状病毒核酸,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离 RNA 片段及分子量测定。用分光光度法测定了核酸的紫外吸收,并对核酸及病毒颗粒进行了电镜观察。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

婴幼儿轮状病毒G血清型与腹泻病情关系的分析

A组轮状病毒（group A rotavirus,RV）是世界范尉内婴幼儿腹泻的最主要病原。根据RV的VP7和VP4蛋白分为GI血清型和P血清型,而最常见的为G1～G4,     

鸡源大肠杆菌血清型鉴定与分析

对江苏地区13个鸡场分离到的67株大肠杆菌进行了O血清型鉴定。结果为；分离自5个种鸡场孵化后期死亡鸡胚及出壳弱雏的50株大肠杆菌共有15个血清型，其中O11、O81、O88及O115为优势血清型，分别占待检菌株的16％（8／50）、6％（3／50）、12％（6／50）及26％（13／50），其余为O3、O4、O18、O26、O36、O60、O75、O93、O103、O114及O133，各为1株，未定型菌9株，占待检菌株的18％（9／50）；分离自其余8个蛋鸡场疑似大肠杆菌病的病、死鸡的17株大肠杆菌共有11个血清型．其中O20、O78、O89较为多见，分别占待检菌株的11．8％（2／17）、11．7％（2／17）、17．6％（3／17），O9、O18、O26、O30、O36、O88、O131、O149各为1株，未定型菌2株。     

人胎盘TRAIL基因cDNA的克隆和鉴定

目的:利用基因工程技术克隆TRAIL基因全长cDNA,并构建其原核表达载体.方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL,将其连接于克隆载体pMD18-T中,并通过酶切及测序鉴定载体构建的正确性.结果:应用RT-PCR技术和BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切成功获得1049 bp的目的片段,测序分析结果表明该基因序列与报道的TRAIL基因片段的序列完全相同.结论:成功克隆了TRAIL基因的cDNA全长,为其在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础.     

人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析

目的 鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制.方法 从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段.将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入pGL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定.将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性.5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点.结果 电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNA.PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段.双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体.双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体pGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399.荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0～-399区域(ATG前一个碱基为-1).5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于-101.结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101～-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础.     

人轮状病毒非结构蛋白NSP4基因特征的初步分析

目的：初步了解重症腹泻轮状病毒株NSP4基因特征及变异情况，方法：在2002年100例秋冬季腹泻患儿轮状病毒分子流行特征的研究中，确诊为轮状病毒腹泻的10例患儿的粪便标本。用PCR方法对其NSP4基因进行测定，并挑选出一株重症腹泻轮状病毒毒株(简称02′K1)。采用一步法RT-PCR对其NSP4基因进行扩增获得NSP4 cDNA，利用银染测序方法对所扩增获得NSP4 cDNA进行测定，采用Winegene231核酸分析软件对02′K1株NSP4核苷酸序列进行翻译，同时利用Omiga生物软件对02′K1株、ST3株(人轮状病毒G4血清型)及代表NSP4四个主要基因型的之一的Wa株(简称Wa-1株)、Wa-a株、Wa-v株的核苷酸和氨基酸序列进行比较，分析其同源性及02′K1株的NSP4氨基酸变异位点，结果：(1)经一步法RT-PCR扩增获得的NSP4 cDNA约725bp，NSP4基因全长686个核苷酸，含有一个开放读码框架，编码一个由175个氨基酸组成的蛋白；(2)02′K1株与ST3株、Wa-1株、Wa-a株、Wa-v株的核苷酸和氨基酸同源性均达90％以上；(3)与ST3比较，02′K1株的NSP4氨基酸序列有14个位点发生了变异。即aa16、aa26、aa60、aa72、aa76、aa124、aa135、aa140、aa141、aa145、aa146、aa161、aa162、aa169，结论：(1)02′K1株的NSP4基因型属于Wa组；(2)02′K1株的NSP4氨基酸序列有14个位点发生了变异。     

深圳孕妇携带B族链球菌的血清型和毒素基因分析

目的 调查深圳市孕妇B族链球菌(group B Streptococcus,GBS)携带情况,并分析其血清分型和毒素基因.方法 对1277名研究对象进行问卷调查和阴道拭子采样,采用PCR检测菌株的血清分型和毒素基因,采用确切概率法分析血清分型和毒素基因间关联性.结果 孕妇阴道GBS携带率为4.5%.GBS菌株的主要血清型是Ⅲ型(56.1%)、Ⅰa型(21.0%)和Ⅴ型(12.3%),主要携带毒素基因是Rib(49.1%)、Epsilon(28.1%)和AlphaC(21.1%).菌株的血清型与毒素基因存在关联性,Ⅲ型菌株主要携带Rib,Ⅰa型菌株主要携带Epsilon,Ⅴ型菌株主要携带AlphaC.结论 GBS菌株血清分型与毒素基因存在关联性,提示不同特征菌株的潜在致病能力可能不同.     

延边地区婴幼儿轮状病毒的基因RNA分析

本文作者用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对延边地区1985年10月～1987年12月收集的200份婴幼儿腹泻粪便标本进行了婴幼儿轮状病毒的基因RNA分析。1985年和1986年以电泳长型为主,而1987年则为电泳长型和电泳短型各占一半左右,表明婴幼儿轮状病毒电泳型的变异较大。另外,发现长-长电泳型混合感染2例,说明同一宿主可以同时感染不同电泳型的婴幼儿轮状病毒株,表明了婴幼儿轮状病毒在自然界发生基因重组的迹象。     

人HCN4基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的: 构建超极化激活环核苷酸门控通道基因(HCN4)重组腺病毒载体. 方法: 采用基因工程技术,将HCN4 cDNA定向克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,利用pAdeasy-1系统进行细菌内同源重组后,脂质体转染293T细胞包装、扩增,CsC1密度梯度超速离心纯化. 采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行监测. 结果: 测序结果证明成功构建了HCN4基因重组腺病毒载体,病毒滴度达2.0×1015pfu/L. 结论: 应用细菌内同源重组法成功构建了含人HCN4基因的重组腺病毒载体.     

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

目的：从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2（ CDC2）,并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法：从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2 cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和 XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果：RT-PCR扩增出约894 bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论：从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。     

我国昆明地区人轮状病毒RNA基因组分析

最近国外应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术对人轮状病毒RNA基因组进行分析,在轮状病毒胃肠炎流行病学研究中获得一些有意义的结果。为探索我国人轮状病毒基因组电泳型(Electrop-herotype)及其与疾病流行的关系,我们用PAGE对1979～1981年昆明地区两次     

人UCA1基因转录调控的生物信息学分析与鉴定

目的生物信息学分析与鉴定人类膀胱癌特异性表达的UCA1 基因转录调控作用原理。方法运用CpG岛预测软件
EMBOSS CpGplot、CpG Island Searcher、Methprimer、CpG finder对UCA1基因启动子CpG岛进行分析。利用转录因子预测软
件MatrixCatch和TFSEARCH对UCA1基因核心启动子区可能结合的转录因子进行分析。染色质免疫沉淀技术对所预测到的
转录因子进行分子生物学实验验证。结果CpG岛预测发现UCA1基因全长启动子区中不存在CpG岛,因此UCA1基因属于组
织特异性基因与前期研究报道结果一致。生物信息学预测及筛选发现UCA1基因核心启动子存在4个与肿瘤关系密切的转录
因子。根据预测结果选取2个转录因子利用染色质免疫沉淀实验鉴定,确定1个转录因子可与UCA1基因核心启动子区结合。
结论UCA1 基因启动子区无CpG岛存在,该基因核心启动子区可能与多种转录因子结合,并确定转录因子c-Myb 可以与
UCA1基因核心启动子区结合。