豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca2+-ATP酶的变化

目的了解Ｃａ２＋ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的变化。方法选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只,左耳装圆窗电极后阻塞内淋巴,经声反应阈（ＣＡＰ阈值）证明膜迷路积水形成;右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ２＋ＡＴＰ酶,在透射电镜下Ｃａ２＋ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果对照耳Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮板及静纤毛、血管纹中间细胞指突膜等处;实验性膜迷路积水后,声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处之Ｃａ２＋ＡＴＰ酶颗粒明显减少。结论膜迷路积水后声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性明显下降,两者呈负相关。     

豚鼠耳蜗Ca2+-ATP酶活性的超微细胞化学定位

目的为观察耳蜗Ca^2 -ATP酶的定位，建立一种检测内淋巴积水的超微细胞化学手段，进一步探讨CCa^2 -ATP酶在调节耳蜗钙浓度方面的作用。方法采用柠檬酸铅超微细胞化学染色方法观察12只豚鼠耳蜗内Ca^2 -ATP酶活性。结果Ca^2 -ATP酶活性反应产物是柠檬酸铅颗粒，主要表达在前庭膜内淋巴侧的细胞膜表面和微绒毛上，内、外毛细胞的静纤毛和皮板上，外毛细胞的基底侧细胞膜和血管纹基底细胞的内皱折膜上也可观察到Ca^2 -ATP酶反应产物。结论柠檬酸铅组织化学一步法能系统测定Ca^2 -ATP酶在耳蜗的定位，为探索此酶在耳蜗的作用建立了一种观察手段。本文结果提示Ca^2 -ATP酶在调节内耳钙浓度方面起着重要的作用。     

豚鼠耳蜗Ca++ -ATP酶组化定位

钙是细胞内一种重要的调节细胞各种功能的信使。其哺乳动物细胞内浓度约为10~(-7)mo l/L。该浓度受Ca~(++)通道系统、离子交换机制、细胞内Ca~(++)储存和Ca~(++)泵的控制。Ca~(++)通道是质膜上的孔,经过它Ca~(++)沿着化学和/或电子梯度被动进入细胞内。在可兴奋细胞中这些通道受生理刺激或神经介质调节。Ca~(++)泵是一种对传出质膜的Ca~(++)具有高度亲和力的磷酸酶,其定位可通过一步法枸橼酸铅反应组化测定。该反应中ATP是底物,Ca~(++)是激活剂,铅     

348 Ca^2＋—ATP酶对耳蜗Ca^2＋平衡的调节作用

钙离子（C ^2＋）做为第二信使几乎参与了细胞所有的生理活动。在耳蜗水平,钙与机械－电转换、内耳声感受的频率选择性、基底膜振动非对称性等有密切关系。毛细胞及内淋巴液的Ca^2＋浓度变化与感音神经性耳聋有着密切的联系,而在Ca^2 -ATP酶（又称钙泵）在耳蜗Ca^2 稳态的调控中起了重要作用。Ca^2 －ATP酶的作用及其机理已成为感音神经性耳聋发病机制和防治研究的关键之一。     

实验性面神经麻痹面肌Ca2+-ATP酶活性观察

目的:探讨面瘫时眼轮匝肌(眼肌)和口轮匝肌(口肌)损伤程度差异(损伤差)的机制.方法:应用酶组织化学及图象分析技术观察眼肌和口肌失神经支配后Ca2+-ATP酶的活性变化.结果:眼肌和口肌均由Ⅰ型及Ⅱ型肌纤维构成,眼肌以Ⅰ型肌纤维为主,口肌以Ⅱ型肌纤维为主.失神经支配后,眼肌酶活性减弱程度大于口肌.结论:眼肌酶活性损失大于口肌,判定面瘫程度用局部评价系统是合理的.     

声波对离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的影响

探讨声波对离体耳蜗内外毛细内游离Ｃａ＾２＋浓度的影响。方法采用荧光染色法,用ＡＣＡＳ５７０型粘附式细胞仪对纯音刺激引起的豚鼠耳蜗ＯＨＣ的的变化进行动态观察。结果声刺激可引起明显升高,至高峰后迅速,再次刺激可引起类似反应。结论声音刺激中引起单个ＯＨＣ的生理变化。     

高渗盐液对豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ca2+浓度的影响

细胞内游离钙浓度的改变是细胞生理功能的重要物质基础 ,也是多种受体被激活后信息传递过程的中心环节[1 ] 。高渗盐液对离体外毛细胞 (ＯＨＣ)的影响研究较多 ,但尚无定论。本文采用粘附式的细胞仪 (ＡＣＡＳ 5 70 ,美国Ｍｅｒｉｄｉａｎ公司生产 )对 1 8%ＮａＣｌ引起的豚鼠离体耳蜗外毛细胞内游离Ｃａ2 浓度的变化进行定量分析 ,报告如下 :1　材料和方法1 1　药物试剂与仪器　用去离子水配制 1 8%ＮａＣｌ;胶原酶Ⅳ型 (Ｓｉｇｍａ公司生产 ,浓度为 0 5ｇ Ｌ ,Ｄ -Ｈａｎｋ’ｓ溶液配制 ) ;伴刀豆球蛋白 (ＣｏｎＡ) (浓度为 0 1ｍｇ ｍ…     

噪声对豚鼠耳蜗外淋巴Ca2+的影响及天麻素对噪声性聋的防护作用

目的探讨噪声暴露对耳蜗外淋巴Ca2 含量的影响,并观察天麻素对噪声性聋的防护作用。方法将42只健康豚鼠随机分为3组,8只为对照组,未作噪声暴露,17只为噪声暴露组,17只为噪声 天麻素组,用天麻素预防,用微量进样-火焰原子吸收光谱法测定耳蜗外淋巴Ca2 含量,检测噪声暴露前、后听性脑干反应(ABR),并与对照组比较。结果噪声暴露组耳蜗外淋巴平均Ca2 含量(113.67±42.22μg/ml)显著低于对照组(196.91±47.10μg/ml)(P<0.01),噪声 天麻素组耳蜗外淋巴平均Ca2 含量(151.15±60.65μg/ml)与对照组差异无统计学意义(P>0.05);噪声暴露后,噪声 天麻素组、噪声暴露组ABR阈值均显著升高(P<0.01),但噪声暴露组(88.53±5.08dBSPL)高于噪声 天麻素组(83.68±4.93dBSPL),差异有统计学意义(P<0.05)。结论噪声暴露可降低耳蜗外淋巴Ca2 含量,后者是噪声致聋的重要发病机理之一;天麻素能减轻噪声暴露引起的外淋巴Ca2 下降,对噪声性聋可能具有一定的预防作用。     

豚鼠内淋巴囊内Na~+-K~+-ATP酶亚单位异构体的表达

以往的研究表明内淋巴囊的上皮细胞有调节内淋巴的作用,而内淋巴囊吸收内淋巴的过程是需要Na~+-K~+-ATP酶驱动的。Na~+-K~+-ATP酶由α、β两种位于胞浆膜内的亚单位组成,α亚单位有α_1、α_2、α_3三种异构体,它含有包括Na~+-K~+-ATP磷酸化结合位点在内的所有酶催化位点,而β亚单位有β_1、β_2两种异构体,它可能在Na~+-K~+-ATP酶复合体功能成熟及与膜结合方面起作用。Na~+-K~+-ATP酶构形的多样性与其多     

噪声刺激对耳蜗一氧化氮合酶的影响

目的：探讨一氧化氮（ＮＯ）在噪声性聋发病中的作用。方法：用中高频连续稳态噪声制作噪声性聋的动物模型,用ＮＡＤＰＨ－黄递酶组织化学、原位杂效和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法,观察噪声刺激对耳蜗一氧化氮合酶（ＮＯＳ）表达的影响。结果：组织化学法显示ＮＯＳ主要分布于内外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞;原位杂效法发现ＮＯＳｍＲＮＡ在内外毛细胞、螺旋神经节细胞胞浆内均可见阳性染色,但血管纹边缘细胞无阳性染色     

醛固酮对豚鼠耳蜗功能及AF9蛋白表达的调节作用

目的检测豚鼠耳蜗组织中AF9蛋白的表达情况,分析醛固酮对耳蜗功能及AF9蛋白表达影响,探讨醛固酮与AF9蛋白在内淋巴积水中的作用。方法将28只豚鼠随机分为两组,对照组及实验组(Ald组)分别腹腔注射50μl生理盐水、0.1mg/kg/d醛固酮,各5天。1月后通过听性脑干反应(ABR)检测耳蜗功能学改变;应用苏木素-伊红染色(HE)检测两组耳蜗组织形态学差异,利用免疫组织化学(IHC)检测AF9蛋白在耳蜗组织中的定位表达以及醛固酮作用前后AF9蛋白的差异表达模式。结果醛固酮作用后,ABR提示Ald组听力阈值较对照组升高(P<0.05)。HE证实Ald组豚鼠耳蜗存在内淋巴积水,IHC显示AF9蛋白在血管纹、前庭膜、螺旋缘、Corti器、螺旋神经节及前庭阶骨膜均有表达,并且Ald组耳蜗AF9蛋白在血管纹及前庭膜表达量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论耳蜗组织中存在与Na+代谢相关的AF9蛋白,醛固酮可能通过下调AF9蛋白表达来参与内淋巴代谢,进而影响内耳功能。     

耳蜗内环境的平衡与调控

内耳是一个精细的感觉器官,除了毛细胞及其相关的各种分子外,还有许多辅助细胞亚群和生物大分子也在听觉形成过程中发挥着重要的调控作用.其中任何一个环节发生异常都会对听功能产生影响,这也是本文探讨的重点.     

耳蜗内环境的平衡与调控

内耳是一个精细的感觉器官，除了毛细胞及其相关的各种分子外，还有许多辅助细胞亚群和生物大分子也在听觉形成过程中发挥着重要的调控作用。其中任何一个环节发生异常都会对听功能产生影响，这也是本探讨的重点。     

耳蜗中L-精氨酸对Ca2+-ATP酶抑制剂的拮抗作用

目的探讨耳蜗中L-精氨酸对Ca2+-ATP酶抑制剂的拮抗作用。方法选择健康杂色豚鼠70只,雌雄不限,随机分为7组,每组10只:①人工外淋巴液组;②Ca2+-ATP酶抑制剂组;③L-精氨酸组;④Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸组;⑤Ca2+-ATP酶抑制剂+环磷酸鸟苷(cGMP)组;⑥Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸+非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂组;⑦Ca2+-ATP酶抑制剂+L-精氨酸+可溶性环磷酸鸟苷合酶sGC抑制剂组。各组动物分别行全耳蜗灌流以上各组药物120分钟,灌流过程中由圆窗龛每隔30分钟测1次耳蜗微音器电位(cochlear microphonic,CM)和听神经复合动作电位(compound action potential,CAP),比较各组结果。结果第3组灌流Ca2+-ATP酶抑制剂前后CAP阈移为28.5 dB,第4组在此基础上加入L-精氨酸可使CAP阈移改善9 dB,与第5组加入cGMP后作用相似;第6组多加入非选择性NOS抑制剂后CAP阈移为29.5 dB,与第7组加入可溶性环磷酸鸟苷合酶sGC抑制剂作用相似。结论①Ca2+-ATP酶抑制剂通过抑制Ca2+-ATP酶使胞内Ca2+浓度升高,可对耳蜗功能产生影响;②L-精氨酸通过激活NO/cGMP通路可对Ca2+-ATP酶抑制剂的作用产生部分拮抗。     

多巴胺对豚鼠耳蜗谷氨酸受体NMDA NR_1和NMDA NR_(2A)的调节作用

目的观察豚鼠耳蜗谷氨酸受体NMDANR1和NMDANR2A与多巴胺调节作用的相关性,探讨多巴胺在内毛细胞下突触复合体中的作用机制。方法选用杂色豚鼠40只,随机分组,每组10只．分别以右耳行全耳蜗灌流人工外淋巴液和不同浓度的多巴胺,并以人工外淋巴液灌流组的对侧耳蜗作为正常对照组,则共为5组（每组10耳）：①正常对照组;②人工外淋巴液组;③10mmol／L多巴胺组;④30mmol／L多巴胺组;⑤50mmol／L多巴胺组。在灌流前、灌流0、1、2h同时记录各组动物耳蜗电图,应用半定量RT—PCR的方法,观察各组间谷氨酸受体NMDANR1和NMDANR2A的mRNA表达量是否有差异。结果多巴胺对豚鼠4000Hz耳蜗复合动作电位产生抑制作用,使其阈值升高,且这种抑制作用呈现明显的量效依赖关系。与正常对照组和人工外淋巴液组比较,其余三组谷氨酸受体NMDANR1的mRNA表达量明显减少（P〈0．05）,NMDANR1的表达量与灌流多巴胺的浓度呈现明显的浓度剂量依赖关系;谷氨酸受体NMDANR2A的mRNA表达量在各组间差异均无统计学意义（P〉0．05）,随着灌流多巴胺浓度的增加,NMDANR2A的表达量没有明显变化。结论多巴胺可通过减少谷氨酸受体NMDANR1的量来实现对听觉通路抑制的作用,而谷氨酸受体NMDANR2A不参与多巴胺的抑制作用。     

去氨加压素对耳蜗功能及上皮钠通道表达的调节作用

目的研究去氨加压素DDAVP调节豚鼠耳蜗功能及上皮钠通道蛋白α亚基(α-ENaC)的表达,探讨其在内淋巴积水中的作用。方法将24只豚鼠随机分为3组,分别给予0、5、10天DDAVP,通过耳蜗电图(ECochG)检测耳蜗功能学改变。应用苏木素-伊红染色(HE)确定各组耳蜗组织形态学改变,并用免疫组化法确定α-ENaC蛋白在耳蜗定位表达。采用蛋白印迹实验(WesternBlot)分别检测不同给药时间豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达水平。结果DDAVP注射后,ECochG提示部分豚鼠耳蜗出现内淋巴积水,HE证实豚鼠内淋巴积水。α-ENaC蛋白在耳蜗血管纹、螺旋韧带、Reissner膜、Corti器、螺旋缘、螺旋神经、耳蜗神经表达。与未给予DDAVP相比,10天组豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高(P<0.05);。结论 DDAVP调节豚鼠耳蜗α-ENaC蛋白表达升高,进而调节内淋巴代谢,诱导内淋巴积水,影响内耳功能。     

豚鼠耳蜗一氧化氮合酶的分布

目的 用组织化学法,通过观察NADPH-黄递酶的活性了解一氧化氮合酶在豚鼠耳蜗内分布。方法 经4％多聚甲醛心脏灌注固定后,取出耳蜗,经3％依地酸脱钙后,作厚10μm冰冻切片,用辅酶Ⅱ孵育液在37℃条件下孵育l小时。结果 发现在耳蜗内、外毛细胞底部与耳蜗神经末梢接头处及毛细血管球内皮细胞有明显NADPH-黄递酶活性,此外在内、外柱细胞、支持细胞、血管纹及螺旋神经节细胞也有NADPH-黄递酶活性反应。结论 NO在维持耳蜗正常神经传导及毛细血管张力中起着重要作用。     

Ca2+在内耳疾病的变化及钙拮抗剂的作用

近年来的研究表明钙超载与内耳的病理过程紧密联系 ,钙拮抗剂的应用也越来越广泛 ,特作如下综述。1　细胞水平的Ｃａ2 病理作用生理状况下胞质内处于低Ｃａ2 水平 ,与胞外及胞内某些细胞器之间有 10 0 0倍的浓度梯度 ,维持低Ｃａ2 是一个耗能过程 ,对细胞的生理活动是必需的。在病理状态下 ,如缺氧、耳毒性药物损伤时 ,钙平衡失调 ,Ｃａ2 内流的增加、细胞胞浆内钙离子浓度 [Ｃａ2 ]ｉ释放增多及Ｃａ2 外流的抑制导致[Ｃａ2 ]ｉ持续地增加。 [Ｃａ2 ]ｉ增高将在以下方面对细胞产生损伤 :(1)推动氧化应激过程 ,导致能量贮存的耗竭 ,…     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na+,K+-ATP酶不同β亚基的mRNA表达

目的　进一步研究内淋巴囊上皮细胞Na ,K -ATP酶不同 β亚基的表达。方法　采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Na ,K -ATP酶不同 β亚基mRNA在内淋巴囊上皮细胞中的表达。结果　在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Na ,K -ATP酶不同 β亚基的阳性颗粒 ,β1亚基表达较弱 ,β2 亚基表达较强。结论　结合其他报道 ,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Na ,K -ATP酶的表达 ,而结肠上皮、肾小管上皮的Na ,K -ATP酶几乎仅有α1β1型 ,提示其离子转运过程可能不同。     

内耳缺血对一氧化氮合酶在耳蜗表达的影响

一氧化氮（ＮＯ）是一种重要的神经递质或调质及血管活性物质，在机体内广泛参与生理调节，影响多种疾病的病理生理过程。本文研究内耳缺血对耳蜗ＮＯＳ（ｎｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｅ，一氧化氮合酶）ｍＲＮＡ表达的影响，从分子水平探讨耳蜗缺血条件下ＮＯ作...