长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化方法研究

目的:研究长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的简单分离纯化方法。方法:采用DEAE-Sephadex A-25及Sephadex G-25层析的方法,比较二者对长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶简单分离纯化的效果。结果:从长白山白眉蝮蛇蛇毒中分离出类凝血酶,SDS-PAGE电泳显示为一条带,分子量大约为35.5kDa,达到电泳纯。理化性质研究表明,此类凝血酶具有体外凝血活性,体外凝血酶比活力为12.57IU.mg-1,用N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐测得该酶的精氨酸酯酶比活力为137.65IU.mg-1。用蛋白酶抑制剂和乙二胺四乙酸对该酶进行抑制实验,结果表明该酶属于丝氨酸蛋白酶,而不是金属蛋白酶。结论:本方法可用于长白山白眉蝮蛇蛇毒中类凝血酶的分离纯化。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的纯化

从长白山白眉蝮蛇蛇毒中纯化具有溶栓功效的纤溶酶。方法：用 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０离子交换、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５凝胶过滤层析和 ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ ５０三步柱层析分离方法,对长白山白眉蝮蛇蛇毒进行分离纯化,得到了一种纤溶酶活性组分。结果：经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱表征该酶为单一蛋白,其分子量为 ２３．３６７ ｋＤ。结论：为进一步研究其结构和功能提供了可靠依据。     

白眉蝮蛇降纤酶的纯化及特性分析

目的从白眉蝮蛇蛇毒中提取降纤酶,并对其进行特性分析。方法采用一步亲和色谱法分离纯化降纤酶,用高效液相色谱分析其纯度,SDS-PAGE测定其相对分子质量。结果分离得到的降纤酶纯度高(99%以上),SDS-PAGE分析为一条带,相对分子质量为36 000,比活性为4 800 u/mg。结论用一步亲和色谱法从白眉蝮蛇蛇毒中纯化降纤酶的方法简单有效,所得产品纯度高、产量高。     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化

目的用白眉蝮蛇蛇毒分离纯化纤溶酶。方法利用离子交换层析、亲和层析、分子筛层析技术进行分离纯化纤溶酶。结果得到了电泳纯的纤溶酶,其相对分子质量为24000。结论该工艺可以快速地分离纯化白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶：     

注射用白眉蛇毒血凝酶对外科手术切口的止血效果

目的:观察白眉蛇毒血凝酶对外科手术切口的止血效果。方法:采用随机单盲法,入选220例外科手术患者,随机分为治疗组60例,阳性对照组60例,空白对照组60例和自身对照组40例。治疗组60例患者分别于术前90min肌注及术前30min静注1KU的白眉蛇毒血凝酶,观察其对手术切口单位面积出血量和出血时间的影响,以单位面积出血量的减少率作为评价临床疗效的指标。阳性对照组和空白对照组分别用蛇凝血酶注射剂(立止血)和生理氯化钠溶液,自身对照组观察40例患者用和不用白眉蛇毒血凝酶自身对照。结果:治疗组和阳性对照组的单位面积出血量的减少率分别为53%和56%,差异无显著性(P>0.05)。自身对照组给药前、后的单位面积出血量和出血时间分别为(0.34±0.15)g·cm~(-2),(133.6±55.8)s及(0.23±0.11)g·cm~(-2),(96.0±38.0)s,单位面积出血量的减少率为32%。治疗组及自身对照组共100例患者的显效率为49%,有效率为41%,总有效率为90%。结论:注射用白眉蛇毒血凝酶能减少手术切口的单位面积出血量,缩短出血时间。     

白眉蛇毒血凝酶局部治疗闭合性腹部损伤肝破裂的疗效

目的探讨白眉蛇毒血凝酶局部治疗闭合性腹部损伤肝破裂的方法,归纳其临床病症的特点和治疗手段。方法选取我院2009年9月～2011年8月收治的48例闭合性腹部损伤肝破裂患者进行分析。采用白眉蛇毒血凝酶注射方法治疗,局部治疗无效者采取手术方式。结果患者治愈44例,4例未能止血成功,采取手术治疗治愈。患者病前后指标有明显好转,差异有统计学意义(P<0.05)。结论白眉蛇毒血凝酶对于病情稳定较轻患者有良好的治疗作用,肝损伤严重者则需采用手术方式治疗。     

白眉蝮蛇蛇毒的分离纯化及综合利用

目的促进蛇毒的有效、综合利用。方法在分离纯化白眉蝮蛇蛇毒中降纤酶的试验过程中,同时分离纤溶酶。结果主要成分降纤酶的回收率为55.80%,纤溶酶的回收率为20.40%。结论该方法实现了对蛇毒宝贵资源的综合利用,为其综合开发利用探索了一条有效途径。     

注射用白眉蛇毒血凝酶致支气管痉挛1例

【病例】　女 ,6 2a。因卵巢肿瘤入院行肿瘤切除术。t 37 5℃ ,P10 0beats·min- 1,BP 10 5 / 70mmHg (1mmHg =0 133kPa) ,两肺听诊无异常。ECG示频发房性早搏 ,有 10余年慢性支气管炎病史 ,无其他药物过敏史。患者入手术室后 ,采用全麻诱导插管后机控呼吸 ,术中用维库溴铵、异氟烷维持麻醉。因手术创面渗血较多 ,给予注射用白眉蛇毒血凝酶 (商品名 :帮亭 ,沈阳新马药业有限公司 ,批号 2 0 0 4 0 10 1) 2KU ,iv ,给药后约 2min ,患者突然出现憋气 ,颜面潮红 ,气道压由 18～ 19kPa升至 35～ 37kPa ,潮气量降至 15 0mL ,BP 90 / 6 0mm…     

注射用白眉蛇毒血凝酶治疗上消化道出血320例临床观察

目的 对照研究注射用白眉蛇毒血凝酶(邦亭)治疗上消化道出血的疗效.方法 治疗组160例应用靶向性生物止血药(邦亭)2 kU静脉注射,1～2次/d,同时联合应用质子泵抑制剂泮托拉唑;对照组160例应用酚磺乙胺(止血敏)并联合应用泮托拉唑,观察止血时间.结果:治疗组显效率85%,有效率10%,总有效率95%.结论注射用白眉蛇毒血凝酶治疗上消化道出血止血迅速,疗效好.     

尖吻蝮蛇血凝酶不良反应分析及对策

<正>注射用尖吻蝮蛇血凝酶(haemocoagulase agkistrodon,HCA)是从尖吻蝮蛇属毒蛇液中分离得到的酶性止血剂,主要用于各种出血、血友病血肿、血小板减少性疾病伴出血症的辅助治疗,尤其对预防手术中及术后出血具有重要意义。随着临床对该药的广泛应用,关于注射用尖吻蝮蛇血凝酶不良反应的报道也逐渐增加[1-2],但尚未引起临床医务人员的高度重视。本科室为肿瘤微创介入科室,手术较多,术前使用止血药已成为降低手术风险的     

尖吻蝮蛇血凝酶对股骨干骨折术中出血的影响

目的观察尖吻蝮蛇血凝酶对股骨干骨折术中出血的影响。方法选择中上1/3处股骨干骨折实施钢板内固定患者46例,采用就诊顺序编码方法,将患者分为血凝酶组(23例)和对照组(23例)。血凝酶组术前30 min给予注射用血凝酶2 U静脉注射,术后第1天再用血凝酶2 U静脉注射。对照组除不给予血凝酶外,其他操作和用药同血凝酶组。观察两组术中出血及术后24 h引流量。结果同对照组比较,血凝酶组术中出血及术后24 h引流量明显减少(P<0.05),术前及术后24 h凝血因子检测差异无统计学意义(P>0.05)。结论术前静脉注射尖吻蝮蛇血凝酶,可明显减少术中出血量,对于手术创面大和剥离组织较多的手术具有良好的止血作用。     

注射用尖吻蝮蛇血凝酶含量测定方法研究

目的建立能够准确反映注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法。方法采用Lowry法、Brad-ford法、RP-HPLC法及AQC柱前衍生HPLC法四种方法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量并进行比较。结果Lowry法的测定结果明显高于Bradford法,Bradford法测定结果与两种液相色谱方法相当。结论 Lowry法由于赋形剂的干扰,测定结果偏高,不宜采用;柱前衍生HPLC法虽然灵敏度更高,但操作较繁琐;Bradford法和RP-HPLC法可作为注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法。     

尖吻蝮蛇血凝酶对高原地区老年人鼻出血的治疗效果

目的评价尖吻蝮蛇血凝酶（Haemocoagulase Agkistrodon,HCA,商品名苏灵）对老年人鼻出血的治疗效果。方法将本院收治的105例鼻出血患者按照住院号末位数的单、偶数随机分成试验组和对照组,试验组（n=42）给予尖吻蛇毒血凝酶治疗,对照组（n=63）给予酚磺乙胺治疗,观察其临床效果及副作用。结果 HCA在高原老年出血中作用与酚磺乙胺相比,作用良好,且副作用较小,最终试验组总有效率为95.23%,而对照组总有效率仅为47.62%,两者之间差异有统计学意义（P〈0.05）。未出现严重并发症。结论 HCA在高原鼻出血患者中值得推广应用,因为它不激活凝血因子Ⅷ,不易发生血栓。     

尖吻蝮蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的疗效观察

目的：研究尖吻腹蛇血凝酶在泌尿外科手术中止血的价值。方法：将前列腺增生患者147例、膀胱肿瘤患者33例按照可比性的原则分为A、B、C3组进行研究,给予注射用尖吻蝮蛇血凝酶（1U／支）,A组给予3支,B组给予2支,C组给于安慰剂,观察3组患者的止血效果与血凝指标。结果：在3组患者之间具有可比性的前提下,患者凝血酶原时间（胛）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原定量（FIB）以及D-二聚体（DD）方面比较,A组与B组患者之间的差异无统计学意义（P〉0．05）;但是A、B2组与C组之间的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。A组和B组患者之间的止血时间、切口出血时间以及凝血异常比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;但是A、B2组与c组之间的差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：尖吻蝮蛇血凝酶在泌尿外科手术中具有较好的止血作用和安全性,疗效不随药物剂量增加而增加,一般情况下,使用2U即可达到良好的效果。     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究

目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(Wannan Agkistrodon acutus venom)中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性。方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast Flow阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8法检测该蛋白对体外培养的白血病K562细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HepG2)的增殖抑制作用。结果:分离纯化得一相对分子质量约23700的抗肿瘤活性组分(ATF1-c),CCK-8检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HepG2细胞的增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖关系。结论:ATF1-c对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用。     

尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究

应用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱,从尖吻蝮蛇毒中分离出一个新的抗凝血因子.经Superdex 75 HR 10/30预装柱检测,纯度达99.9%.SDS-PAGE检测为单一条带,相对分子量52.2k.该因子有显著的抗凝血活性,延长白陶土部分激血活酶时间的临界浓度为0.2mg/ml,无纤溶活性、磷脂酶A2活性和出血活性.     

蚓激酶活性成分的分离纯化

目的本实验采用色谱分离的方法从赤子爱胜蚓（EiseniaFoelide）中分离纯化出一种纯度达到95％以上的蚯蚓纤溶酶。方法采用匀浆抽提、热变性、超滤、色谱分离、SDS—PAcE和高效液相色谱法等技术对蚓激酶进行分离纯化及鉴定,并用纤维平板法测定其活性。结果通过一系列纯化步骤所得的蚓激酶比活120000u／mg,经sDs—PAGE分析得一条带,相对分子量为28000Da;高效液相色谱分析其纯度达95％以上。结论本实验从蚯蚓中分离纯化出一种高活性、高纯度的蚓激酶。