外泌体分离和纯化方法研究进展

外泌体是由活细胞主动分泌的一种纳米级囊泡,内含蛋白质、核酸等生物活性物质,参与细胞间通讯,在肿瘤微环境调节、免疫识别、炎症反应等众多生理病理过程中发挥重要作用。作为一种运输载体,外泌体广泛存在于生物流体中,但由于其粒径小、内含物丰度低,能否获得高质量的外泌体成为后续研究成败的关键。虽然外泌体分离、纯化和鉴定方法日趋发展...     

外泌体对肿瘤微环境的免疫调节作用及在肿瘤诊疗中的应用研究进展

外泌体属于一种纳米级的生物活动囊泡,其是由多种细胞分泌的,广泛分布在体液中,外泌体携带着来自于母体细胞的相关生物活性,可以在细胞间的信息交流中有效参与,并且可以对靶细胞的功能进行调节。外泌体作为肿瘤和免疫细胞的来源,在肿瘤微环境形成过程中作为调节因子积极的参与,使免疫应答有效增强,患者对免疫活化进行抑制,从而对肿瘤微环境进行调节,在肿瘤发生和进展等过程中存在一定的影响。     

外泌体在骨肉瘤中的研究进展

外泌体是一类由细胞释放的微小囊泡，其中包含了细胞分泌的蛋白质、核酸和脂质等生物活性分子。不同细胞释放的外泌体在肿瘤发展和转移中发挥重要作用，这些外泌体可通过携带特定的蛋白质和核酸，调节肿瘤微环境，促进肿瘤生长和侵袭，并参与远处转移的过程。此外，外泌体中的某些生物标志物可作为骨肉瘤早期诊断和预后评估的潜在标志物。该文综述了外泌体在骨肉瘤中的研究进展，以期深入了解其在该疾病中的作用机制，并为开发新的治疗策略和预后评估指标提供参考。     

外泌体在肿瘤疾病诊断中的研究进展

外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,内含微小RNA(miRNA)、mRNA、DNA片段、蛋白质等多种生物活性物质。外泌体存在于多种类型的细胞中,广泛分布于血清、尿液、唾液等体液中。目前发现肿瘤来源的外泌体与肿瘤的发生、发展密切相关。外泌体可以作为一种生物标志物在肿瘤诊断和治疗过程中发挥作用。因此,肿瘤外泌体内容物的检测和分析可以用于肿瘤的早期辅助诊断、疗效评价和预后评估。文章就外泌体在肿瘤诊断中的研究进展进行综述。     

外泌体在乳腺癌中的研究进展

外泌体是来源于细胞的脂质微型囊泡,其含有多种的蛋白质、核酸、脂质等物质。细胞通过分泌外泌体,将这些物质运输到靶细胞,从而影响靶细胞的生物学活性。在过去的十几年中,大量研究显示外泌体不仅能影响主要的肿瘤相关信号通路,如Wnt信号通路,还能在肿瘤微环境中影响癌症干细胞、癌症的血管生成以及癌症的转移等多个方面。因而,外泌体在临床诊断、应用治疗方面存在重大潜在价值,可能成为乳腺癌早期诊断、疗效检测、预后判断、药物传递的重要载体。     

肿瘤细胞来源的外泌体在结直肠癌中的研究进展

外泌体(exosome)作为目前液体活检领域中研究的热点已被证实可参与多种生物学的过程。其所包含的大量核酸如DNA、RNA以及大分子如脂类和蛋白质等,均可以外泌体为载体通过控制微血管生成、调节基质细胞、重铸细胞外基质以及建立"预转移微环境"等多种途径,从而促进肿瘤的侵袭与转移。该文以肿瘤细胞来源的外泌体为主要对象,介绍外泌体及其分离技术,并对其在结直肠癌中的研究进展进行分析及论述。     

外泌体蛋白质组学研究进展

外泌体(exosome)是一类由体内多种活细胞分泌的纳米级的双层膜结构小囊泡,可携带包含亲代细胞信息的核酸、蛋白质和脂质等。大多数外泌体有特殊的功能,可能与细胞信号转导功能相关。现已发现外泌体参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监视等多个环节。外泌体中蛋白质是参与疾病发生、发展的重要部分。该文总结外泌体蛋白质组学的研究思路及方法,综述目前外泌体蛋白质的临床作用,并对外泌体蛋白质组学研究面临的挑战和前景进行分析与评述。     

肿瘤外泌体在微环境细胞间通讯中的作用及其作为肿瘤标志物的研究进展

外泌体(exosome)是一种起源于内吞体系统的细胞外囊泡,是微环境中细胞间通讯的重要载体。肿瘤细胞在肿瘤进展过程中可以通过外泌体与微环境的免疫细胞、间质细胞和内皮细胞之间发生相互作用进而促进肿瘤进展。肿瘤外泌体中可以携带蛋白质、脂质和核酸等形式的生物信息分子,这些分子既可以对受体细胞进行驯化作用,同时有可能成为肿瘤特异性标志物,在肿瘤临床检验中发挥重要作用,因此,外泌体的研究已成肿瘤基础和临床检验研究中重要的新领域。该文就肿瘤外泌体在微环境中的多种细胞相互作用机制及其作为特异性肿瘤标志物的研究现状和前景作一概述。     

马奶和酸马奶来源外秘体的分离及其对RAW264.7细胞细胞因子的作用

目的以马奶和酸马奶作为原料分离和鉴定外泌体,观察其对巨噬细胞株Raw264.7几种细胞因子的影响。方法用TEM观察不同方法分离的马奶和酸马奶外泌体的形态结构。运用Western blot检测外泌体膜特异性蛋白,对其进行鉴定。利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测外泌体和Raw264.7细胞共培养后的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-12p40以及IL-10等细胞因子的分泌水平。结果 TEM视野中观察到直径小于100 nm的具有清晰膜的茶托或凹半球的外泌体样结构。Western blot检测到分子量为28~29 kDa的外泌体膜特异性蛋白CD63的富集。共培养实验中发现,马奶外泌体能够促进Raw264.7细胞的促炎因子TNF-α和IL-12p40的分泌,而酸马奶外泌体则能够促进抗炎因子IL-10的分泌。结论马奶和酸马奶中大量存在外泌体,并具有不同的免疫调节作用。该研究结果为马奶和酸马奶的外泌体后续研究甚至作用机制研究提供了新的思路和理论基础。     

肿瘤微环境中外泌体在肿瘤发生发展中作用及机制

外泌体(exosomes)是直径在30~100 nm,内含RNA、脂质和蛋白质的纳米级囊泡,来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,与细胞膜融合后释放到胞外,是肿瘤微环境中细胞间通讯和遗传物质的重要载体。肿瘤在发生、发展过程中可通过外泌体与肿瘤微环境中的免疫细胞、内皮细胞和肿瘤相关成纤维细胞之间相互作用从而促进肿瘤的进展,其携带蛋白质、脂质和核酸等内容物释放到细胞外随着体液运输改变肿瘤微环境、促进肿瘤细胞增殖、加快血管形成及促进癌症发展;肿瘤微环境是由肿瘤细胞、巨噬细胞、成纤维细胞及细胞外基质等共同构成的局部稳态环境,在癌症的发生、复发、转移和化疗耐药等过程中发挥重要的作用。本综述着重讨论外泌体的生物学特性及对肿瘤微环境的影响,为研究及诊断治疗肿瘤提供新的思路。     

外泌体微小RNA在肿瘤无创诊断和靶向治疗中的研究进展

外泌体是一类由多种细胞分泌的脂质双分子层包裹的囊状结构, 内含多种蛋白质、脂质、信使RNA、微小RNA(miRNA)以及非编码RNA。外泌体miRNA在多种疾病中异常表达并参与细胞凋亡、细胞焦亡、细胞自噬等生理过程, 通过不同分子机制调节肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移过程, 并具有作为肿瘤无创诊断标志物的潜力。本文总结了外泌体miRNA调节多种肿瘤发生发展的作用机制及其无创诊断价值, 以期为外泌体miRNA作为肿瘤无创诊断标志物及作为分子靶点在肿瘤靶向治疗中的研究提供新的理论依据。     

外泌体蛋白、mRNA及非编码RNA调节肝癌发生和发展的研究进展

外泌体是一种广泛存在于人体各种体液中的细胞外囊泡,它可以携带包括蛋白、核酸、脂质和代谢产物在内的多种成分。通过这些组分,外泌体可以介导细胞间通讯,进而影响人体内各项细胞生命活动。最近研究发现,外泌体在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）的发生、发展及耐药等各个环节中发挥着重要的调控作用。其中非编码RNAs作为外泌体重要组分可以参与调节HCC肿瘤微环境,影响肿瘤生长、转移、血管生成、免疫调节等生物学行为,有望成为HCC新的诊断、预后标志物或治疗靶点。本文通过对近五年来外泌体组分在HCC进展中的作用进行综述,期望在HCC的早期诊断、预后及治疗等方面提供参考和新的思路。     

中药干预外泌体影响胃癌治疗的研究进展

外泌体是近年来十分热门的话题,它是一种极微小的囊泡样物质,是由细胞分泌并帮助细胞与细胞之间传递生物信息的一种特殊物质。外泌体可携带肿瘤的遗传信息,向周围细胞组织,甚至远处细胞组织传递癌症信号,在肿瘤的发生机制中起到重要作用,可以参与肿瘤的生长、侵袭、转移、耐药等多种环节当中。近年来,中药在胃癌治疗中也被证实了可以影响外泌体的相关机制,外泌体在胃癌的诊治方面表现出较好的前景,特别是中药在治疗胃癌中与外泌体之间的联系。研究中药对肿瘤外泌体的影响,从微观的角度探求一条新的中药治疗胃癌的发展道路是亟待解决的问题。本文从外泌体对胃癌的作用机制及中药干预外泌体影响胃癌疗效等方面进行综述,希望能为胃癌的治疗提供更好、更新的助力。     

外泌体的研究进展及其对神经系统疾病的免疫调节

外泌体是来源于细胞自身分泌的一种脂质双分子层包裹形成的膜性小体,参与调解机体免疫反应, 作为运输载体参与炎症反应,在肿瘤的发生发展和治疗过程中也起到一定作用。外泌体在多发性硬化、视 神经脊髓炎、重症肌无力等神经系统免疫疾病中发挥重要作用,同时也参与阿尔茨海默病、帕金森病等中枢 神经系统疾病的发生发展。本文就外泌体的性质、作用、获得、鉴别及其在中枢神经系统疾病中的研究进展 作一综述。     

一种新的纳米级细胞来源囊泡外泌体的特征

目的:外泌体(exosome)是由晚期内涵体产生的,直径为30～100nm的小囊泡。目前的研究热点是树突细胞和肿瘤细胞来源的外泌体在肿瘤免疫治疗方面的应用,已经有众多的研究证实外泌体具有良好抗肿瘤效果。因此,探讨外泌体在肿瘤免疫治疗方面的应用及进展对于发展新的肿瘤治疗策略具有重要意义。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1987-01/2006-02有关外泌体肿瘤治疗的文章,检索词“exosomes,tumor”。资料选择:纳入标准:①有关外泌体生物来源、制备、生物功能的研究。②有关外泌体在肿瘤免疫治疗应用的研究。对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文。资料提炼:共收集到92篇有关外泌体肿瘤免疫治疗的文章,选其中与树突状细胞及肿瘤细胞来源的外泌体相关研究28篇进行归纳总结。资料综合:①外泌体的生物来源:外泌体的前体是细胞内的多囊泡体,一般认为,具有多泡体的细胞均有分泌外泌体的潜能,而且对于外泌体表面特征性蛋白质的研究也证明了他们的多囊泡体来源。②外泌体的制备:通过对多种外泌体体制备方法的综合分析,将外泌体的制备方法分为3种:经典的制备方法,有抗体包被的磁珠分离方法,超滤及超速离心方法。③外泌体的成分:主要成分包括蛋白质和脂质。目前对于蛋白质的研究比较充分,并按照功能将其分为3类。④外泌体的功能:外泌体最早被发现的功能是在红细胞成熟过程中清除蛋白质,随着对外泌体研究的深入,其他免疫相关的功能也逐渐被发现,包括介导细胞间信号传递和介导免疫耐受等。结论:外泌体是近年来发现的一种纳米级细胞来源的囊泡,由于具备介导免疫信号传递的功能,外泌体在肿瘤免疫治疗中的应用研究也越来越多。因此,对外泌体进行全面深入的了解和研究,对于肿瘤的治疗具有重要意义。     

外泌体在常见恶性肿瘤化疗耐药中的作用

外泌体是机体各种细胞分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs),参与机体的生理和病理活动。外泌体被认为是肿瘤细胞与细胞微环境之间的一种交流途径,其与肿瘤化疗耐药的相关性是近年的研究热点。外泌体可介导特定的细胞间的相互作用并激活相关信号通路,传递包括微小RNA(MicroRNA,miRNA)和蛋白质在内的功能性分子。研究表明乳腺癌中miR-221的高表达会引起曲妥珠单抗耐药;miR-21的上调,miR-133b的下调可降低肺癌细胞对顺铂的敏感性。外泌体介导的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)转移是促成乳腺癌细胞中多西他赛耐药的主要机制。这些发现证实了外泌体携带的功能性分子miRNA和蛋白质与肿瘤耐药性之间可能存在联系,外泌体可以作为信号转导的媒介改变肿瘤对化疗药物的敏感性。本综述侧重于列举外泌体与几种常见的恶性肿瘤化疗耐药性的相关机制,讨论miRNA功能在耐药性方面的前景和挑战,并强调探索外泌体在乳腺癌进展和耐药性中的有价值途径。     

血浆外泌体样小体免疫调节作用的初步研究

目的 鉴定血浆中外泌体(exosomes)样小体,研究其生物学特性及免疫调节作用.方法 利用多次超速离心结合膜超滤的方法,从健康供者血浆中分离纯化外泌体样小囊泡.采用透射电镜从形态学方面鉴定此囊泡为外泌体,用流式细胞术检测其生物学特性.通过磁珠分选从健康供者外周血单个核细胞中分选CD4+T细胞及CD4+CD25+CD127low调节性T细胞(Treg),外泌体样小体与CD4+T细胞或Treg细胞共孵育,通过增殖和凋亡实验分析其免疫调节作用.采用流式细胞术检测外泌体样小体与Treg细胞共孵育后,Treg细胞中Wnt经典信号转导通路中磷酸化β-catenin的变化.结果 人血浆中的外泌体样小体与外泌体在形状和大小方面均相似,表达外泌体的标志性蛋白CD63和CD81,还表达MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD86等.血浆外泌体样小体与CD4+T细胞孵育后能抑制CD4+T细胞的增殖,且呈剂量依赖性.血浆外泌体样小体与Treg细胞孵育后,Treg细胞的生存时间延长,培养14 d后与血浆外泌体样小体共孵育的Treg细胞存活率为57.07%,而对照Treg细胞存活率为30.91%.RT-PCR检测出Treg细胞有Frizzled受体FRZ2、3、4及LRP6 mRNA表达(相对灰度值分别为48.50、34.84、23.85、49.73),而血浆中外泌体样小体携带Wnt分子.与血浆外泌体孵育后,Treg细胞磷酸化β-catenin平均荧光强度降低(由20.06±2.99降低到12.41±2.08),抗凋亡基因bcl-2明显上调(相对灰度值由0.45上调到84.97).结论 血浆中存在外泌体样小体,表达免疫调节分子,并且体外能够抑制活化的CD4+T细胞增殖,通过Wnt信号转导途径延长Treg细胞生存时间.     

树突状细胞外泌体免疫作用机制的初步研究

为了研究外泌体（exosome）作为肿瘤疫苗刺激免疫应答作用的机制，从正常人外周血单个核细胞诱导树突状细胞（DC）制备负载肿瘤抗原的DC外泌体（Dex），研究其在DC有无或DC成熟状态不同的情况下刺激T细胞增殖的能力；通过实验阻断DC外泌体上一些分子（CD11a、CD11b、CD11c、CD54、MFG-E8及CD83）后检测外泌体免疫学功能的改变；采用共聚焦显微镜检测DC对外泌体的吞噬作用，用流式细胞仪检测阻断外泌体表面分子对DC吞噬外泌体作用的影响。结果表明：在无DC存在或未成熟DC存在的情况下未成熟DC外泌体（imDex）和成熟DC外泌体（mDex）均不能有效地激活T细胞；不同的促成熟因子（LPS、TNF-α、CpG、CD40L）诱导成熟的DC所分泌的外泌体在数量上无明显差别，但在功能上有显著差异；Dex表面分子CD11a、CD11b、CD11c、CD54、MFG-E8及CD83与其功能有关，阻断这些分子均能不同程度地抑制Dex对T细胞刺激的作用；共聚焦显微镜和流式细胞仪检测表明阻断CD11a、cD54抑制了Dex靶向DC及被DC吞噬。结论：外泌体可以通过其表面分子靶向DC进而引起T细胞免疫应答。     

一种新的纳米级细胞来源囊泡外泌体的特征

目的：外泌体（exosome）是由晚期内涵体产生的，直径为30～100nm的小囊泡。目前的研究热点是树突细胞和肿瘤细胞来源的外泌体在肿瘤免疫治疗方面的应用，已经有众多的研究证实外泌体具有良好抗肿瘤效果。因此，探讨外泌体在肿瘤免疫治疗方面的应用及进展对于发展新的肿瘤治疗策略具有重要意义。 资料来源：应用计算机检索Pubmed数据库1987-01／2006-02有关外泌体肿瘤治疗的文章，检索词“exosomes，tumor”。 资料选择：纳入标准：①有关外泌体生物来源、制备、生物功能的研究。②有关外泌体在肿瘤免疫治疗应用的研究。对资料进行初审，选取符合研究要求的有关文章找全文。 资料提炼：共收集到92篇有关外泌体肿瘤免疫治疗的文章，选其中与树突状细胞及肿瘤细胞来源的外泌体相关研究28篇进行归纳总结。 资料综合：①外泌体的生物来源：外泌体的前体是细胞内的多囊泡体，一般认为，具有多泡体的细胞均有分泌外泌体的潜能，而且对于外泌体表面特征性蛋白质的研究也证明了他们的多囊泡体来源。②外泌体的制备：通过对多种外泌体体制备方法的综合分析，将外泌体的制备方法分为3种：经典的制备方法，有抗体包被的磁珠分离方法，超滤及超速离心方法。③外秘体的成分：主要成分包括蛋白质和脂质。目前对于蛋白质的研究比较充分，并按照功能将其分为3类。④外泌体的功能：外泌体最早被发现的功能是在红细胞成熟过程中清除蛋白质，随着对外泌体研究的深入，其他免疫相关的功能也逐渐被发现，包括介导细胞间信号传递和介导免疫耐受等。 结论：外泌体是近年来发现的一种纳米级细胞来源的囊泡，由于具备介导免疫信号传递的功能，外泌体在肿瘤免疫治疗中的应用研究也越来越多。因此，对外泌体进行全面深入的了解和研究，对于肿瘤的治疗具有重要意义。     

Rab27a基因与外泌体的研究进展

Rab27a基因可通过其编码的蛋白参与T淋巴细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞、胰腺β细胞及造血细胞等的颗粒分泌、运输及胞吐作用,参与白化病、癌症、糖尿病、炎症、血栓形成等疾病的发生发展。另外,Rab27a对外泌体的分泌调控作用也备受关注。本文就Rab27a基因调节外泌体的分泌及其基因修饰的外泌体在治疗炎症损伤、血栓形成及肿瘤等疾病方面的研究现状进行综述。