人巨细胞病毒感染后平滑肌细胞即刻早基因及晚期基因表达与调控

目的 通过检测体外培养平滑肌细胞(SMCs)感染人类巨细胞病毒(HCMV)后即刻早期(IE) 基因及晚期(L)基因的表达与调控,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化(AS)的可能机制.方法 应用PCR方法,在SMCs感染HCMV后不同时相点,检测IE基因、L基因的DNA,同时应用反义寡核苷酸及丙氧鸟苷作用于感染细胞,动态观测其对IE基因、L基因的抑制作用.结果 感染细胞12 h即可检测到IE基因,24 h可同时检测到IE基因和L基因,48和72 h只能检测到L基因.丙氧鸟苷作用后,IE基因和L基因相对减弱.而反义硫代寡核苷酸(ASON)作用后,IE基因明显受到抑制,L基因减弱明显.结论 SMCs感染后IE基因、L基因的表达与调控可能在HCMV致AS的发病机制及其治疗中具有重要意义.     

人巨细胞病毒基因在大肠癌组织的表达及其临床意义

目的:初步探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染相关基因在大肠癌的表达及与大肠癌临床病理特征的关系.方法:巢式PCR方法检测60例大肠癌患者的肿瘤及癌旁正常肠黏膜组织HCMV UL135、UL136、US28及IE1基因;SDSPAGE凝胶电泳分析结合基因测序方法验证巢式PCR结果的准确性,用卡方检验或Fisher确切概率法比较两组间阳性率,Logistic回归分析HCMV感染与大肠癌患者临床病理特征的关系.结果:SDS-PAGE凝胶电泳分析结合基因测序方法验证了巢式PCR结果的准确性.UL135、UL136及US28基因在大肠癌组织表达的阳性率分别为35.0%、15.0%及60.0%,在癌旁正常肠组织的表达阳性率分别为16.7%、1.7%及18.3%,两组具有显著性差异(均P0.05);IE1在大肠癌组织表达的阳性率(13.3%)与癌旁组织表达阳性率(10%)差异无显著意义.Logistic回归分析HCMV基因与大肠癌患者临床病理特征的关系,结果发现UL135、UL136及IE1基因表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分化程度、淋巴结转移及Dukes分期无关,而US28基因表达与淋巴结转移及Dukes分期相关,但和性别、年龄、肿块大小及病理分化程度无关.结论:大肠癌组织中UL135、UL136及US28基因表达较癌旁正常组织显著升高,其中US28阳性表达与大肠癌淋巴结转移及Dukes分期相关,提示HCMV某些基因表达可能参与大肠癌的发展.     

人巨细胞病毒感染及Bcl-2表达与结直肠癌相关性研究

目的探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在结直肠癌发生、发展过程中可能的作用机制。方法收集50例结直肠癌患者的病理肿瘤组织标本,同时收集距离肿瘤组织手术切缘10cm以上的自身瘤旁正常肠粘膜组织为对照,应用RT-PCR技术检测组织中HCMV的感染情况,免疫组化技术检测凋亡相关基因Bcl-2的表达水平。结果肿瘤组及瘤旁组HCMV IE2阳性率分别为40.00%(20/50)和6.00%(3/50),差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2阳性率分别为36.00%(18/50)和8.00%(4/50),差异有统计学意义(P<0.05)。50例HCMV阳性肿瘤组织Bcl-2阳性率高于HCMV阴性肿瘤组织,肿瘤组织Bcl-2表达水平与HCMV感染呈线性相关(χ2=5.834,P<0.05)。结论 HCMV感染是结直肠癌发生、发展的相关因素之一,其作用机制与影响Bcl-2的表达有关。     

人巨细胞病毒对人巨核系祖细胞体外生长的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对人巨核系祖细胞（CFU－MK）的抑制作用及其机制。方法；采用体外半固体培养技术，观察4种不同浓度HCMV AD169株对CFU－MK集落生长和成熟的影响。分别用PCR和RT－PCR检测集落细胞中HCMV即刻早期（IE）蛋白DNA与即刻早期(IE)蛋白mRNA。结果：HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU－MK集落生长，3个感染组的CFU－MK集落数均减少，与灭活病毒组比较，集落数减少程度分别为21.6%、33.8%、46.3%（P＜0.05），显示抑制程度与病毒感染滴度虽剂量依赖关系；RT－PCR检测发现HCMV感染组CFU－MK细胞有IE蛋白mRNA的表达；PCR检测发现HCMV感染组CFU－MK细胞中有IE蛋白DNA。结论：HCMV AD169株在体外能抑制CFU－MK的分化和增殖，提示HCMV感染引起的血小权减少与CFU－MK受HCMV抑制有关，并证实HCMV感染的CFU－MK集落细胞中存在HCMV IE蛋白的早期转录。     

人巨细胞病毒感染与疣状胃炎病理特征及幽门螺旋杆菌的关系

目的检测疣状胃炎组织中人巨细胞病毒(HCMV)的表达,探讨其与疣状胃炎病理特征及幽门螺旋杆菌(H.pylori)的关系。方法选取就诊于西安市第一医院消化内科经内镜诊断为疣状胃炎患者80例(研究组)及慢性浅表性胃炎患者70例(对照组)为研究对象,采用免疫组化SP法对病理标本进行HCMV的检测并观察HCMV表达情况,并进一步将研究组根据H.pylori感染情况分为H.pylori阳性组和H.pylori阴性组,观察HCMV的表达情况及其病理特征。结果研究组组织中HCMV表达阳性率(35.0%)高于对照组HCMV表达阳性率(0)(P0.05);研究组中H.pylori阳性组及H.pylori阴性组HCMV表达阳性率分别为71.0%、12.2%,差异有显著统计学意义;研究组HCMV+H.pylori+、HCMV+H.pylori-、HCMV-H.pylori+、HCMV-H.pylori-不同亚组间炎症活动程度及肠化率对比,差异有统计学意义(P0.05),其中HCMV+H.pylori+组与非HCMV+H.pylori+组中-重度炎症活动发生率分别为77.3%、31.0%,肠化率分别为77.3%、12.1%,差异有统计学意义(P0.05)。结论部分疣状胃炎组织中存在HCMV感染,疣状胃炎的发生可能有HCMV的参与,并且可能与H.pylori共同致病。     

载脂蛋白E增强子基因多态性与冠心病及血清脂质的关系

目的研究载脂蛋白E(Apo E)内含子1增强子元件(IE1)基因多态性与人类冠心病(CHD)及其血脂水平的关系.方法采用聚合酶链式反应结合限制酶切片段长度多态分析方法,分析了79例健康人及91例冠心病患者的IE1基因型及测定血清血脂.结果CHD组IE1G/G基因型频率(0.604)和G等位基因频率(0.758)分别显著高于对照组(0.392,0.652;P＜0.05);CHD组的G/G基因型的血清总胆固醇高于同组的G/C基因型和C/C基因型,也高于对照细G/G基因型(P均＜0.05).结论IE1G/G基因型及G等位基因是冠心病的危险因子.     

冠心病患者抗磷脂抗体与人巨细胞病毒感染关系的初步研究

目的 :研究抗磷脂抗体与冠心病的相关性 ,探讨人巨细胞病毒 (HCMV)感染与冠心病患者抗心磷脂抗体 (ACA)产生的关系。　　方法 :76例冠心病患者分为急性心肌梗塞组 (n=2 3) ,陈旧性心肌梗塞组 (n=2 7) ,不稳定性心绞痛组 (n=2 6 ) ;采用酶联免疫吸附试验法检测血清抗心磷脂抗体—免疫球蛋白 G(ACA- Ig G)、人巨细胞病毒—免疫球蛋白 G(HCMV- Ig G)、人巨细胞病毒—免疫球蛋白 M(HCMV- Ig M) ,并与正常对照组 (n=30 )进行比较。　　结果 :76例冠心病患者 ACA的阳性率为 35 .5 3% ,显著高于正常对照组的 6 .6 7% (P<0 .0 5 ) ,而急性心肌梗塞组、陈旧性心肌梗塞组、不稳定性心绞痛组 3组间 ACA的阳性率无差异。全部患者 HCMV的感染情况高于正常对照组 ,HCMV感染的冠心病患者 ACA的阳性率显著高于 HCMV未感染的冠心病患者 (P<0 .0 5 )。　　结论 :抗磷脂抗体可能是促使冠心病发生的免疫因素之一 ;HCMV不仅与冠心病的发生有关 ,而且与冠心病患者ACA的产生有密切关系。     

载脂蛋白E基因多态性、内含子1基因多态性与血脂代谢关系的研究

目的探讨载脂蛋白E基因(ApoE)及其内含子1增强子元件(IE1)基因多态性与血脂代谢的关系。方法采用聚合酶联反应及限制性片段长度多态性分析法测定120例冠心病(CHD)患者及120例健康对照者的ApoE基因型及IE1基因型,血脂测定采用酶法。结果①CHD组ε4等位基因的TC显著高于同组其他基因型,也显著高于对照ε4基因型。②CHD组G/G基因型的血清总胆固醇高于同组的G/C基因型及C/C基因型,也高于对照组G/G基因型(P<0.05)。③CHD组含等位基因ε4的各增强子基因型TC均高于非ε4组,同时G/G型的低密度脂蛋白水平高于同组G/C和C/C型,也显著高于非ε4的G/G型、G/C型、C/C型(P<0.01)。结论①ε4携带者及IE1的G/G基因型为血脂代谢紊乱的遗传因子。②当ε4携带者的IE1为G/G基因型及G等位基因时其发生血脂代谢紊乱的危险性尤为明显。     

上皮型钙黏素基因启动子甲基化与胃肠腺癌的关系及意义

目的探讨上皮型钙黏素（E—cad）基因启动子CpG岛甲基化与胃腺癌（GAC）和大肠腺癌（CRAC）的关系及意义。方法用甲基化特异性PCR技术检测82例GAC组织（GAC组）、30例十二指肠球部溃疡胃窦黏膜组织（对照组）、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生胃黏膜组织（胃炎组）、94例CRAC组织（CARC组）及其癌旁非肿瘤组织中的E—cad基因启动子CpG岛甲基化状况。结果GAC组E—cad甲基化率显著高于对照组和胃炎组（P〈0．01,〈0．05）,低分化者显著高于高、中分化者（P〈0．05）,Ⅲ～Ⅳ期肿瘤显著高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0．05）CRAC组显著高于癌旁非肿瘤组织（P〈0．01）。结论E—cad基因启动子CpG岛甲基化可能参与胃肠腺癌发生。     

黄疸婴儿人巨细胞病毒的检测

目的: 探讨黄疸婴儿HCMV感染的诊断.方法:FQ-PCR检测248例黄疸婴儿和50例对照组患儿尿液中HCMV DNA, 化学发光免疫分析法(CLIA)检测黄疸婴儿血清HCMV IgM抗体, 在尿液HCMV DNA阳性黄疸婴儿中, 比较血清HCMV IgM抗体阳性与阴性组HCMV DNA拷贝数的差异.结果: 黄疸婴儿尿液HCMV DNA的阳性率为41.5%, 对照组患儿阳性率为2.0%, 两者有统计学意义(P<0.01). CLIA检测黄疸婴儿血清HCMV IgM抗体的阳性率为19.8%. 在尿液HCMV DNA检测阳性的黄疸患婴儿中, IgM抗体阳性组的尿液HCMV DNA拷贝数显著高于阴性组(t = 5.51, P<0.01).结论:FQ-PCR检测尿液HCMV DNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法.     

Immunohistochemical detection of an immediate early antigen of human cytomegalovirus in normal tissues

As a member of the herpesvirus family, human cytomegalovirus (HCMV) induces a life-long latent infection in most individuals infected with it. This latent infection is subject to periodic reactivations that serve as an important source of disease and death in patients with defective immunologic responses. The specific types of cells that harbor latent HCMV have not yet been identified. To detect latent HCMV and identify the host cells carrying it, tissue sections from nine HCMV-seropositive normal individuals were examined using a murine monoclonal antibody specific for one of the immediate early (IE) antigens of HCMV. Cells expressing the IE antigen were detected in several different tissues from six of the subjects. Tissues found to contain positively stained cells included brain, kidney, spleen, lung, and liver. No positively stained cells were found in any tissue from seven HCMV-seronegative individuals studied by the same procedures. Cells undergoing productive infection with HCMV could not be detected in any of the tissues containing IE antigen-positive cells. It is proposed that these IE antigen-expressing cells represent at least some of the sites of HCMV latency in normal seropositive individuals.     

巨细胞病毒感染参与动脉粥样硬化发生的机制

探讨巨细胞病毒感染与动脉粥样硬化的相关性及其可能机制。酶联免疫吸附试验检测一个大样本病人血清中的抗人巨细胞病毒的IgG抗体以及C 反应蛋白 ,同时用聚合酶链式反应检测动脉粥样硬化病变中人巨细胞病毒特异性的即时早期基因 ,探讨巨细胞病毒感染和动脉粥样硬化的关系 ;采用反转录聚合酶链式反应检测人巨细胞病毒感染对内皮细胞趋化因子表达的影响。结果发现动脉粥样硬化组血清中的人巨细胞病毒的阳性率显著高于非动脉粥样硬化组 (分别为 82 .2 %和 6 1.0 % ,P =0 .0 2 ) ;动脉粥样硬化患者血清中的C 反应蛋白水平显著高于无动脉粥样硬化的对照组病人 (5 .912± 3.795mg L比 2 .871± 1.76 1mg L ,P =0 .0 0 0 ) ;而且动脉粥样硬化斑块中人巨细胞病毒基因出现率显著高于正常血管组织 (13 15比 2 7,P =0 .0 1)。人巨细胞病毒感染还可上调内皮细胞ECV 30 4表达单核细胞趋化蛋白 1和不规则趋化因子。表明人巨细胞病毒感染参与动脉粥样硬化的形成和发生 ,可能与人巨细胞病毒上调内皮细胞趋化因子表达有关。     

急性冠状动脉综合征患者巨细胞病毒检测及临床意义

目的：探讨人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＨＣＭＶ）感染与急性冠状动脉综合征（ａｃｕｔｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ,ＡＣＳ）的关系。方法：利用人巨细胞病毒磷酸化蛋白ｐｐ７１基因引物,采用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）检测２２例急性冠状动脉综合征患者和３８例健康对照者外周血ＨＣＭＶ基因的表达。同时应用琼脂扩散法检测血清Ｉ     

Human immunodeficiency virus type 1 tat gene enhances human cytomegalovirus gene expression and viral replication.

Clonal lines of human rhabdomyosarcoma (RD) cells, constitutively expressing human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) tat gene (RD tat cell lines) showed enhanced expression of human cytomegalovirus (HCMV) immediate-early (IE) and late (L) proteins upon HCMV infection, as compared with control RD cells. One of the RD tat cell lines produced infectious HCMV. The RD-tat cell lines, following transfection with recombinant plasmids containing the full length of the HCMV-IE enhancer/promoter linked to the bacterial chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene, exhibited an increased CAT expression by the tat product. A chronically HIV-1-infected human T-lymphoid cell line, SupT1, superinfected with HCMV, expressed HCMV-IE proteins while the parental SupT1 cells infected with HCMV were negative. Parental SupT1 cells coinfected with HIV-1 and HCMV also expressed HCMV-IE proteins, indicating that HIV-1-encoded proteins exert a positive regulatory effect on HCMV expression.     

Human cytomegalovirus inhibits antigen presentation by a sequential multistep process.

The human cytomegalovirus (HCMV) genomic unique short (US) region encodes a family of homologous genes essential for the inhibition of major histocompatibility complex (MHC) class I-mediated antigen presentation during viral infection. Here we show that US3, the only immediate early (IE) gene within the US region, encodes an endoplasmic reticulum-resident glycoprotein that prevents intracellular transport of MHC class I molecules. In contrast to the rapid degradation of newly synthesized MHC class I heavy chains mediated by the early gene product US11, we found that US3 retains stable MHC class I heterodimers in the endoplasmic reticulum that are loaded with peptides while retained in the ER. Consistent with the expression pattern of US3 and US11, MHC class I molecules are retained but not degraded during the IE period of infection. Our data identify the first nonregulatory role of an IE protein of HCMV and suggest that HCMV uses different T-cell escape strategies at different times during the infectious cycle.     

人类巨细胞病毒在脐动脉血管平滑肌细胞中的增殖

目的 研究人类巨细胞病毒对血管平滑肌细胞的感染性,为人类巨细胞病毒致动脉粥样硬化及移植物血管病机制研究建立细胞模型.方法 自脐动脉分离血管平滑肌细胞,以1 个感染复数(MOI)的人类巨细胞病毒感染该细胞,观察细胞病变效应,以RT-PCR技术检测人类巨细胞病毒 IE基因在平滑肌细胞内的表达,同时以电镜技术检测平滑肌细胞内的病毒颗粒.结果 人类巨细胞病毒感染脐动脉血管平滑肌细胞后第3天即可出现细胞病变,至第8天已出现明显的细胞病变效应,以RT-PCR技术可从感染人类巨细胞病毒 AD169株的平滑肌细胞内扩增出预期的产物,经测序验证为人类巨细胞病毒 IE基因,以电镜技术可从感染人类巨细胞病毒 AD169株的血管平滑肌细胞中观察到病毒颗粒.结论 人类巨细胞病毒 AD169株可以感染人血管平滑肌细胞,并复制出子代病毒颗粒.为人类巨细胞病毒致动脉粥样硬化及移植物血管病的机制研究提供了较好的实验依据及细胞模型.     

Identification of Cellular Proteins that Interact with Human Cytomegalovirus Immediate-Early Protein 1 by Protein Array Assay

Human cytomegalovirus (HCMV) gene expression during infection is characterized as a sequential process including immediate-early (IE), early (E), and late (L)-stage gene expression. The most abundantly expressed gene at the IE stage of infection is the major IE (MIE) gene that produces IE1 and IE2. IE1 has been the focus of study because it is an important protein, not only for viral gene expression but also for viral replication. It is believed that IE1 plays important roles in viral gene regulation by interacting with cellular proteins. In the current study, we performed protein array assays and identified 83 cellular proteins that interact with IE1. Among them, seven are RNA-binding proteins that are important in RNA processing; more than half are nuclear proteins that are involved in gene regulations. Tumorigenesis-related proteins are also found to interact with IE1, implying that the role of IE1 in tumorigenesis might need to be reevaluated. Unexpectedly, cytoplasmic proteins, such as Golgi autoantigen and GGA1 (both related to the Golgi trafficking protein), are also found to be associated with IE1. We also employed a coimmunoprecipitation assay to test the interactions of IE1 and some of the proteins identified in the protein array assays and confirmed that the results from the protein array assays are reliable. Many of the proteins identified by the protein array assay have not been previously reported. Therefore, the functions of the IE1-protein interactions need to be further explored in the future.