组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A(TSA)诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法 显微镜下观察TSA作用24、48 h后,小鼠NIH3T3成纤维细胞、人乳腺癌MCF-7细胞的形态学变化,采用流式细胞学方法(FCM)检测细胞凋亡情况.利用Western blot方法检测细胞周期相关蛋白Rb蛋白和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)降解片段的表达.结果 TSA作用后的NIH3T3细胞,生长变得缓慢,但细胞尚保持生长的活性.MCF-7细胞24、48 h的凋亡率分别为(36.4±1.5)%、(67.0±2.8)%,以48 h最明显.TSA作用24、48、72 h后,两种细胞均出现不同程度的磷酸化Rb蛋白水平下降,MCF-7细胞中PARP发生明显的降解,48 h后降解明显,72 h达到最大程度.结论 TSA可诱导MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过改变肿瘤细胞校染色质的空间结构,以及阻滞细胞周期实现的.     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术,观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长,并且具有时间和剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合丁酸纳诱导肝癌HepG-2细胞凋亡研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)与丁酸纳(NaB)联合应用对肝癌细胞HepG-2的抑制作用.方法 将HepG-2细胞悬液接种于96孔培养板后,分别或联合加入不同浓度的NaB(1.0、2.5、5.0 mmol/L)和TRAIL(10、100、500、1000μg/L),应用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对HepG-2细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内DR4和DR5 mRNA的表达水平.结果经不同浓度的TRAIL处理后,HepG-2细胞生长抑制率和凋亡率分别为(4.5±1.3)%和3.2±0.7)%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).NaB对HepG-2细胞生长有明显抑制作用,且随着NaB浓度从1.0mmol/L升高到5.0mmol/L时,抑制率从(37.6±2.6)%升高到(58.4±3.0)%,各浓度组间差异有统计学意义(P<0.05),NaB浓度为2.5 mmol/L时的凋亡率为(26.7 5.2)%.联合应用NaB和TRAIL能够明显的提高HepG-2细胞的生长抑制率和凋亡率,与同等浓度的NaB或TRAIL单独应用比较,差异有统计学意义(P<0.05).HepG-2细胞经过NaB作用后,其DR5 mRNA的表达水平明显的高于对照组.结论 HepG-2细胞对单独应用TRAIL诱导的凋亡不敏感,NaB可通过上调HepG-2细胞内DR5 mRNA的表达而增强HepG-2对TRAIL的敏感性.     

大黄素对人肝癌细胞smmc-7721的作用及机制

大黄索(Emodin)(1，3，8．三羟基-6-甲基蒽醌)属蒽醌类衍生物。是大黄、虎杖、何首乌等多种中药的有效成分之一。既往研究表明emodin对于人乳腺癌细胞、肺鳞癌细胞的生长具有抑制作用。本研究旨在观察emodin对人肝癌细胞的抑制作用及对其机制进行探讨。     

紫杉醇对肝癌细胞增殖抑制和诱导凋亡的效应研究

紫杉醇(paclitaxel,商品名Taxol)是一种促进细胞微管聚合、抑制微管解聚的新型抗肿瘤药,目前临床上已用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌,而对肝癌的治疗还在试验研究阶段。紫杉醇诱导肝癌细胞凋亡和抑制增殖能力的分析对于探讨临床应用有积极意义。我们采用ATP生物发光法进行肿瘤化疗药敏试验(TCA)检测肝癌细胞BEL7402对紫杉醇的敏感性,以及诱导肝癌细胞凋亡、抑制细胞增殖情况,并与5氟脲嘧啶(5Fu)对比分析。一、材料与方法1.材料:人肝癌细胞株BEL7402由广东省药学院黄树林教授惠赠。试剂:RPMI1640培养基和胰蛋白酶均为Gbico产品。ATP…     

丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

本研究旨在观察在体外丝裂霉素(ＭＭＣ)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用 ,从凋亡的角度探讨其抗癌机理 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.细胞培养及实验分组 :人肝癌ＢＥＬ 740 2细胞株来自中国科学院上海细胞所 ,用含高糖的ＤＭＥＭ培养液 ,补充体积分数为 12 %的胎牛血清、青霉素 (10 4 Ｕ/Ｌ)、键霉素 (10 0 μｇ/Ｌ) ,于37℃ ,体积分数为 5 %的ＣＯ2 孵箱中培养。实验分药物处理组与对照组 ,处理组又分 2× 10 -2 、2× 10 -3 、2× 10 -4 ｇ/ＬＭＭＣ 3种浓度 ,作用时间为 2 4ｈ。2 .透射电镜 :将浓度为 2× 10 -2ｇ/Ｌ的ＭＭＣ处理Ｂ…     

乙型肝炎病毒x蛋白对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (hepatitisBvirusxprotein ,HBx)在体内外对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带HBx基因的表达质粒 pHA HBx转染HepG2细胞 ,通过检测细胞生长曲线、倍增时间和3 H TdR掺入率观察HBx对细胞增殖活性的影响 ;将整合HBx基因的HepG2细胞接种裸鼠 ,建立表达HBx的人肝癌裸鼠模型 ,用阿霉素进行裸鼠腹腔化学药物治疗 ,观察肝癌组织的生长状况 ;用TUNEL方法检测切除的裸鼠癌标本中凋亡细胞的比例。结果转染HBx基因的HepG2细胞倍增时间为 2 8 5h ,对照组为 32 5h ;3 H TdR掺入率 :转染HBx基因组为 (10 2 1± 78)cpm ,对照组为 (85 9± 6 9)cpm ,转染组细胞明显高于对照组细胞 (t =2 5 4 ,P <0 0 1) ;转染HBx基因的细胞在裸鼠体内形成的癌重量为 (3 10± 0 39) g ,对照组癌重量为 (2 6 1± 0 2 8) g ,两组之间差异有显著意义 (t=2 0 3,P <0 0 5 ) ;裸鼠腹腔化学药物治疗后 ,转染组的癌细胞凋亡为 3 5±0 75 ,对照组为 2 2 5± 6 5 ,转染HBx基因的细胞凋亡明显减少 (χ2 =6 6 9,P <0 0 1)。结论HBx可以提高HepG2细胞的增殖活性 ,促进裸鼠体内肝癌生长 ,对阿霉素诱导的肝癌细胞凋亡具有抑制作用。     

枸杞多糖诱导人肝癌细胞Bel-7402凋亡及其周期的实验研究

目的:探讨枸杞多糖对人肝癌细胞Bel-7402凋亡及其周期的影响。方法:利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测枸杞多糖对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人肝癌细胞Bel-7402凋亡率、细胞周期变化。结果:经枸杞多糖作用后的人肝癌细胞Bel-7402出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量LBP组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,1000μg/ml LBP处理组的抑制率达96.02%。药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达21.3%。结论:枸杞多糖可明显抑制人肝癌细胞Bel-7402的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期。     

原发性肝癌细胞凋亡与端粒酶的表达研究

细胞凋亡和端粒酶都是近年来肿瘤基础研究的热点课题之一。了解两者的关系以及它们在肝癌生物学行为中的意义 ,有一定临床价值。1 资料与方法 :(1)一般资料 :原发性肝癌 (hepatocelluarcarcinoma,HCC)标本 4 5例 ,男 36例 ,女 9例。年龄 2 8～ 70岁。平均 4 5 2岁。术前均未行放疗和化疗。细胞凋亡检测标本采用石蜡包埋切片 ,另取旁组织作对照组。端粒酶检测标本于离体后 0 5h内采集 ,- 80℃冰箱内储存备测。HCC恶性程度按Edmondson分级标准 ,Ⅱ级 11例 ,Ⅲ级19例 ,Ⅳ级 15例。 (2 )方法 :细胞凋亡检测方法采用TUNEL法检测。试剂盒购…     

羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌细胞凋亡的研究

羟基磷灰石纳米粒子是近年研制的抗癌新药 ,具有作用缓和及抗瘤谱广的特点。我们从羟基磷灰石纳米粒子诱导人肝癌BEL 740 2细胞凋亡的角度探讨其抑制癌细胞生长的机制 ,为纳米材料用于临床提供依据。一、材料和方法1.材料 :羟基磷灰石纳米粒子由华东理工大学生物材料中心提供 ;RNase酶、蛋白酶K、碘化丙锭 (PI)及Hochest3 3 2 5 8荧光染液购于Sigma公司。Hi tachi 60 0型透射电镜 ,日立公司 ;FAC Sort流式细胞仪 ,BectonDickinson公司。人肝癌细胞系BEL 740 2 ,武汉大学典藏中心提供 ,培养于含 10 %小牛血清的RPMI 164 0培养液中 …     

蛋白酶体抑制剂和肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体协同诱导肝癌细胞凋亡的机制

肿瘤相关坏死因子凋亡诱导配体（TRAIL）是高选择性的化疗药物，然而并非所有肿瘤细胞对TRAIL均表现出显著敏感性。本研究旨在探讨TRAIL诱导肝癌细胞凋亡中存在的抵抗机制，及其与蛋白酶体抑制剂的协同作用。     

生长抑素类似物对肝癌细胞凋亡及c-myc蛋白表达的影响

目的　探讨生长抑素类似物 8肽 (SS 8)对人原发性肝癌细胞凋亡和c myc蛋白表达的影响。 方法　体外培养肝癌细胞SMMC 772 1 ,用 1 0 μg/mlSS 8处理后 ,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率和c myc蛋白的表达。 结果　与对照组相比 ,SS 8使实验组S期和G2 /M期细胞数减少、G0 /G1 期细胞数增加 ,两组细胞的凋亡率分别为 6 .1 %和1 4 .2 % ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5)。经SS 8作用 2 4h后 ,实验组c myc蛋白表达水平为 0 .833± 0 .0 35 ,与对照组相比差异无显著性意义 (P>0 .1 0 ) ,而在SS 8作用 48、72、96、1 2 0和 1 4 4h后 ,实验组c myc蛋白表达水平分别为 0 .81 8±0 .0 4、0 .72 1± 0 .0 2 9、0 .669± 0 .0 2 6、0 .648± 0 .0 4 5和 0 .642± 0 .0 2 8,较对照组显著降低 (P<0 .0 5)。结论　SS 8有诱导肝癌细胞SMMC 772 1凋亡和降低c myc蛋白表达的作用     

阿霉素诱导人肝癌细胞凋亡机制的研究

探讨阿霉素诱导HCC-9204细胞凋亡的作用机制,及其与凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的关系。方法用TUNEL法和流式细胞仪观察和检测阿霉素对HCC-9204细胞增殖周期的影响以及细胞凋亡,并检测HCC-9204细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果阿霉素能够显著诱导HCC-9204细胞凋亡,染色显示有典型的凋亡特征。在药物处理24h后流式细胞仪检测出显著的“亚二倍体峰”。阿霉素作用HCC-9204细胞后,Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);而Bax蛋白的表达虽有所增加,但与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论阿霉素能诱导癌细胞凋亡,是其发挥抗癌作用的重要机制之一,这可能与其下调Bcl-2基因表达有关。     

西罗莫司诱导人肝癌细胞株BEL-7402凋亡及其机制

目的探讨西罗莫司（SRL）在体外诱导人肝癌细胞株BEL-7402的凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的SRL（5、10、20、30、40和50nmol／L）作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402，应用流式细胞仪检测培养24、48和72h时的细胞凋亡情况；Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化；Western Blot法观察BEL-7402细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bcl-xl和Bax基因的表达变化；采用Caspase-3试剂盒检测Caspase-3酶的活性；JCl染色法检测细胞线粒体膜电位（△ψbm）。结果SRL可诱导BEL-7402细胞凋亡，并与药物浓度和作用时间呈正相关。SRL作用BEL-7402细胞后48h，在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征，凋亡过程中线粒体膜电位下降及Caspase-3酶原蛋白激活，伴有Bcl-2、Bcl-xl蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论SRL能使抗凋亡蛋白Bcl-2、gcl-xl表达降低，促凋亡蛋白Bax表达上调，线粒体膜电位下降，激活Caspase-3酶原蛋白，从而诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷和细胞分化剂诱导肝癌细胞凋亡的阈值

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡的阈值以及与细胞分化剂（CDA－Ⅱ）的协同效应。方法：1．0－5．0μmol/L的As2O3和1.0-5.0g/L的CDA－Ⅱ分别以及联合与肝癌细胞株Bel-7402、HepG2共孵育一定时间后，用活细胞荧光染色法、DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：单用As2O3 1.0μmol/L与对照组比较，差异无显著性（P＞0．05），凋亡阈值是5．0μmol/L；单用CDA－Ⅱ 3．0g/L以上与对照组比较，差异有显著性（P＜0．05）。但两药联合应用的凋亡阈值是1.0μmol/L As2O3＋1.0g/L CDA－Ⅱ。结论：CDA－Ⅱ可以降低肝癌细胞的凋亡阈值，增加肝癌细胞对As2O3的敏感性。     

Survivin反义寡核苷酸诱导肝癌细胞凋亡及细胞结构的变化

目的采用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中Survivin基因的表达，研究其诱导细胞凋亡过程中对细胞超微结构与细胞骨架的作用及其机理。方法采用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，Western—blot及原位杂交方法检测Survivin蛋白及mRNA表达，流式细胞仪检测细胞凋亡比率，透射电子显微镜观察细胞超微结构变化，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝系统变化，激酶活性检测方法测定细胞内Caspase-3活性变化。结果脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞后Survivin蛋白及mRNA表达分别由69．59及75．60降低至10．71及22．90，Caspase-3活性由0．0153升高至0．0992，同时细胞结构呈典型凋亡改变，细胞内微丝形态结构破坏，细胞凋亡比率由0．7％增加至31．4％。结论脂质体介导转染Survivin反义寡核苷酸可以有效降低细胞内Survivin基因的表达，并激活Caspase-3。活化的Caspase-3可以切割破坏细胞内骨架微丝系统的结构，进而诱导细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体对肝细胞肝癌的抑制作用

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAIL)对肝细胞肝癌的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白融合TRAIL质粒,转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721细胞后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测 TRAIL的表达,采用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;体内实验建立裸鼠肝癌皮下模型,pIRES-EGFP-TRAIL直接瘤体注射,并观察TRAIL的抑癌作用。结果 真核表达质粒TRAIL体外转染肝癌细胞后,RT-PCR和 Western blot证实了肝癌细胞中有 TRAIL的表达,但对肝癌细胞的生长无显著性的抑制作用。体内直接瘤体注射 pIRES-EGFP-TRAIL 2周,RT-PCR证实瘤体有 TRAIL mRNA强表达,癌旁组织 TRAIL mRNA呈弱表达,正常肝无 TRAIL mRNA表达,但两组间肿瘤大小差异无显著性(P>0.05)。结论 肝细胞肝癌对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象,提示HCC中存在抑制TRAIL诱导凋亡的因素,单一的TRAIL治疗HCC疗效有限。     

骨形成蛋白2诱导肝癌细胞凋亡及其机制

目的观察骨形成蛋白2（BMP-2）诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法以ELISA法检测BMP-2诱导HepG2细胞凋亡，并以Westernblot法检测BMP-2处理后Bcl-2和Fas抗原的表达变化。结果1～100ng／mL浓度BMP-2均对HepG2细胞有诱导凋亡的作用，并能下调Bcl-2的表达量，同时增加Fas抗原的表达。结论BMP-2可诱导HepG2肝癌细胞凋亡，其机制可能是通过Fas介导的途径。     

survivin基因反义寡核苷酸对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡与细胞周期的调控作用

目的研究survivin基因反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期、细胞凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用脂质体介导survivin基因反义寡核苷酸转染人肝癌SMMC-7721细胞,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,RT-PCR方法检测cyclin B1 mRNA的表达。结果survivin反义寡核苷酸转染后细胞内cyclin B1表达由0.36±0.03增加至0.91±0.03,同时G2-M期细胞及凋亡细胞比例分别由5.81%及0.7%明显增加至42.11%及31.35%,同时细胞超微结构呈典型凋亡样改变。结论survivin基因反义寡核苷酸转染细胞后可以通过诱导cyclinB1的表达,导致G2-M期阻滞,从而诱导细胞凋亡的发生。survivin基因反义寡核苷酸转染可以作为治疗肝癌的重要新方法。     

白细胞介素12通过抑制survivin表达加强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导的肝癌细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肝细胞癌(HCC)的治疗作用,以及TRAIL耐药的可能机制和逆转耐药方案。方法 采用原位杂交方法观察HCC与正常肝组织中TRAIL的表达差异。采用不同浓度的sTRAIL(可溶性)处理HCC细胞株及真核表达质粒pIRES-EGFP-sTRAIL转染HCC细胞株,观察sTRAIL的抑癌疗效。建立裸鼠肝癌模型,观察sTRAIL的体内抑癌作用。进一步,检测HCC中survivin的表达并采用反义寡核苷酸封闭治疗。最后,观测sTRAIL和IL-12联合抗癌效果。结果 肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织DR表达量。60例肝癌组织中54例不表达诱捕受体DcRl,25例不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。两种．HCC细胞株中DcR1表达缺失。经sTRAIL(100ng/ml)处理24h,HCC细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上。体外pIRES-EGFP-sTRAIL转染对肝癌细胞杀伤作用不敏感。体内直接瘤体注射pIRES-EGFP-sTRAIL可对裸鼠肝癌无明显抑制作用。HCC高表达survivin,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12使survivin表达明显下调,显著加强TRAIL对HCC细胞的杀伤作用。结论 HCC对TRAIL诱导的凋亡有耐药现象。survivin参与HCC对TRAIL的耐药机制,反义寡核苷酸封闭可部分逆转TRAIL耐药。IL-12可通过抑制siurvivin表达增强TRAIL对HCC杀癌作用。联合基因治疗(如TRAIL和IL-12基因)可能成为一种有前途HCC治疗方案。